周 莉 于津浦 李 慧 于文文 任寶柱 曹 水 任秀寶

在一些晚期腫瘤和標(biāo)準(zhǔn)治療失敗的惡性腫瘤中，人們普遍認(rèn)識到生物治療包括免疫細(xì)胞治療和腫瘤疫苗能夠起到明確的抗腫瘤效果。近期的研究表明，相較于傳統(tǒng)的治療，CIK細(xì)胞有更強(qiáng)的抗腫瘤作用。CIK細(xì)胞在多項(xiàng)研究中均被發(fā)現(xiàn)有NK細(xì)胞功能［1］，并且在治療多種實(shí)體腫瘤中取得了可靠的療效［2］。這些優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在細(xì)胞增殖率、非MHC限定細(xì)胞毒作用、增強(qiáng)藥物抵抗腫瘤細(xì)胞的藥物敏感性［3-4］。除此之外，研究顯示，健康供者和腫瘤患者中得到的CIK細(xì)胞有相似的增殖作用，在動物實(shí)驗(yàn)和患者中均取得了良好的耐受性。

CIK細(xì)胞是一群新型的免疫活性細(xì)胞群體，是將人外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子（抗CD3抗體、IL-2、IFN-γ等）誘導(dǎo)擴(kuò)增一段時(shí)間后獲得的一群異質(zhì)性細(xì)胞，其中CD3+CD56+細(xì)胞在對腫瘤細(xì)胞的殺傷活性中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用［5-6］。IFN-γ又是在CIK細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒作用和介導(dǎo)Th1類細(xì)胞免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子［6-8］。此外，CD4+T細(xì)胞又通過產(chǎn)生有利于Th1極化的細(xì)胞因子和扭轉(zhuǎn)Fas抵抗來調(diào)節(jié)CIK細(xì)胞的抗腫瘤作用［9-10］。然而，在大規(guī)模的細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中，T細(xì)胞凋亡仍然是提高CIK細(xì)胞增殖能力的瓶頸所在。研究顯示，IFN-γ也是引起T淋巴細(xì)胞激活誘導(dǎo)性細(xì)胞死亡（ACID）的關(guān)鍵因子，這使得體外CIK細(xì)胞的大量擴(kuò)增受到限制［11-13］。然而，CH-296被發(fā)現(xiàn)能夠刺激T細(xì)胞的增殖。本研究旨在探討CH-296和IFN-γ是否可以相互促進(jìn)，從而突破CIK細(xì)胞體外大量擴(kuò)增的瓶頸。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2007年1月至2009年12月間20例實(shí)體腫瘤患者，男性16例，女性4例，年齡21～28歲。其中肺癌9例，胃癌3例，腎癌2例，膽管癌2例，非霍奇金淋巴瘤1例，甲狀腺癌1例，前列腺癌1例和肉瘤1例。這些患者中，17例為Ⅳ期，1例I期和2例Ⅱ期（表1）。入組前至少其他治療包括化療、放療和手術(shù)結(jié)束1個(gè)月。RN-CIK治療過程中無傳統(tǒng)治療和輔助性治療。每位患者均簽署了知情同意書。KPS評分和CT檢查用來評估臨床反應(yīng)。

表1 20位接受治療患者數(shù)據(jù)Table1 Clinical data of 20 patients enrolled in the RN-CIK treatment

1.2 RN-CIKs增殖

白細(xì)胞分離法，采集所有患者外周靜脈血，富集血單個(gè)核細(xì)胞量為（1.5×108/flask），轉(zhuǎn)入含有1 000 U/mL重組人IFN-γ和300 U/mL IL-2 GT-T551無血清培養(yǎng)基中。此培養(yǎng)基同時(shí)包被了抗CD3抗體（5 μg/mL）和CH-296（25 μg/mL）。第4天細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中繼續(xù)培養(yǎng)。包含IL-2和IFN-γ GT-T551無血清培養(yǎng)基添加2次。經(jīng)過14d的培養(yǎng)，CH-296和多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（RN-CIKs）成熟，PBS洗滌2次，經(jīng)靜脈回輸患者體內(nèi)，細(xì)胞總量＞3×1010。5例患者的細(xì)胞培養(yǎng)未加入IFN-γ補(bǔ)充劑，作為評估的對照組。細(xì)胞的數(shù)量和活力通過臺盼藍(lán)染色法檢驗(yàn)。細(xì)胞表型測定采用流式細(xì)胞儀，此種方法培養(yǎng)的CIK細(xì)胞在增殖、抗代謝、抗腫瘤細(xì)胞毒性、抗原分泌方面的能力均較傳統(tǒng)CIK細(xì)胞有所提高［14］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS 13.0軟件。計(jì)量資料分析采用以±s表示。各組計(jì)量資料的比較使用one-way ANOVA統(tǒng)計(jì)法分析。兩兩比較用LSD檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

RN-CIKs臨床中是安全有效的。全部20例患者接受了3個(gè)周期的RN-CIKs細(xì)胞靜脈輸注。每周期細(xì)胞回輸總量為（5.19±0.68）×1010并分4天回輸患者，平均增殖58.34倍。除2例患者在回輸過程中出現(xiàn)發(fā)熱，無嚴(yán)重不良事件發(fā)生。在RN-CIKs治療后，KPS評分和CT檢查用來評估臨床反應(yīng)。大部分患者有臨床癥狀的緩解和生理功能的提高。KPS評分平均提高了（13±8.6）分。隨訪1年，20例患者病情評價(jià)，穩(wěn)定（SD）9～25個(gè)月（圖1A）。8例患者病情進(jìn)展，其中7例患者死亡（表1）?？傮w臨床反應(yīng)率PR和SD為65%（13/20），其中1例患者在病情進(jìn)展5個(gè)月后出現(xiàn)部分緩解（PR）（圖1B）。1年生存率為65%（13/20），Ⅳ期患者為58.82%（10/17）。OS為（16.95±6.10）個(gè)月。

圖1 接受RN-CIKs治療后CT片的比較Figure1 Patients with shrunk tumor after RN-CIK treatment

3 討論

手術(shù)、化療和放射治療在原發(fā)腫瘤患者的治療中占據(jù)著主要地位。但是，當(dāng)腫瘤患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)時(shí)，化療就成為了一線治療方案。然而，由于嚴(yán)重的細(xì)胞毒性反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞對細(xì)胞毒藥物的耐藥情況，使得轉(zhuǎn)移或者復(fù)發(fā)的腫瘤患者的治療遭遇到很大障礙。免疫效應(yīng)性細(xì)胞，尤其是CIK細(xì)胞為晚期化療抵抗患者的治療提供了更進(jìn)一步的治療方法［15］。既往研究顯示，轉(zhuǎn)移部位和臨床分期對于CIK細(xì)胞的抗腫瘤細(xì)胞毒性作用和細(xì)胞的增殖能力無明顯影響。然而，由于ACID作用的影響，體外CIK細(xì)胞的大量擴(kuò)增受到限制，由此可能減弱過繼性免疫細(xì)胞治療的臨床效果［9］。

為了證實(shí)RN-CIKs細(xì)胞體內(nèi)抗腫瘤效益，本研究設(shè)計(jì)了Ⅰ期臨床試驗(yàn)RN-CIK治療實(shí)體腫瘤。全部20例患者接受了3個(gè)周期的RN-CIK細(xì)胞靜脈輸注治療。80%的患者有臨床癥狀的改善和生理功能的提升。在1年隨訪期結(jié)束時(shí)，12例患者病情穩(wěn)定，8例患者病情進(jìn)展。1年生存率為65%（13/20），Ⅳ期患者為58.82%（10/17）。OS為（16.95±6.10）個(gè)月。這些結(jié)果證明了RN-CIKs細(xì)胞臨床治療的安全性和有效性。

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