蔣桂韜，楊 俊，邱美珍，張 旭，戴求仲＊

（1.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所動物營養(yǎng)與飼養(yǎng)技術(shù)研究室，湖南長沙410131；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)與獸藥研究室，湖南長沙410131）

仔豬因消化器官發(fā)育尚不健全，斷奶后由于環(huán)境、飼料形態(tài)和營養(yǎng)成分的突然改變而出現(xiàn)免疫力低下、腹瀉和生長發(fā)育滯緩等斷奶應(yīng)激綜合癥，嚴重影響其健康和生長。生產(chǎn)上普遍采用在飼料中高劑量添加抗生素實現(xiàn)抗病促生長作用，然而抗生素的超量用會導(dǎo)致細菌產(chǎn)生耐藥性和藥物殘留等后果。天蠶素抗菌肽是生物防御系統(tǒng)產(chǎn)生的一類對抗外源性病原體的防御性肽類活性物質(zhì)，也是動物免疫防御體系的重要組分［1］，對大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌以及DNA、和RNA 病毒均有很強的抑制作用［2－4］，具有耐熱性和耐酸性［2］，且不易產(chǎn)生耐藥性和無毒副作用等特點。近年來，國內(nèi)學者報道飼糧中添加天蠶素抗菌肽具有提高斷奶仔豬生長性能、機體免疫力和降低腹瀉等積極作用［5－11］，但對于疫苗免疫效果影響的報道較少。為此，本試驗用天蠶素抗菌肽替代其他霉素，研究其對斷奶仔豬生長性能、腹瀉和豬瘟及偽狂犬病抗體的影響，為天蠶素抗菌肽在生產(chǎn)中的應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與分組

選擇120頭胎次相近、健康的初始體重相近的杜×大×長三元斷奶仔豬，隨機分為2個處理，每處理6個重復(fù)，每重復(fù)10頭豬。

1.2 試驗飼糧及營養(yǎng)水平

試驗基礎(chǔ)飼糧參照NRC（1998）8～20kg豬的營養(yǎng)需要，以玉米、豆粕等為主要原料配制而成，其組成及營養(yǎng)含量見表1。對照飼糧為基礎(chǔ)飼糧添加50%吉他霉素140mg／kg和10%硫酸粘桿菌素540 mg／kg，試驗飼糧則在對照飼糧基礎(chǔ)上用天蠶素抗菌肽（預(yù)混料專用型）160mg／kg替代吉他霉素，其它成分均保持一致。50%吉他霉素和10%硫酸粘桿菌素均在市場上購買，預(yù)混料專用型天蠶素抗菌肽由北京中農(nóng)穎泰生物技術(shù)有限公司提供。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets（air－dry basis）

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在湖南省畜牧獸醫(yī)研究所試驗豬場進行，試驗全期為44d。試驗豬飼養(yǎng)在封閉式保育豬舍內(nèi)，水泥地面、漏逢地板各半，通風良好，各欄環(huán)境一致。試驗期間每天上午和下午各加料一次，自由采食和飲水，按該場常規(guī)程序進行免疫（分別在試驗第15d和第30d進行豬瘟和豬偽狂犬活疫苗免疫接種）及飼養(yǎng)管理。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能 分別于試驗開始和結(jié)束時，按重復(fù)稱仔豬初始和終末空腹體重，計算仔豬平均日增重；試驗期以欄為單位準確記錄喂料量和剩料量，計算仔豬平均日采食量和料重比。每天下午和傍晚觀察記錄各欄仔豬腹瀉頭次（以糞樣呈糊狀或水樣并明顯粘于仔豬肛門外為準），并按每欄內(nèi)腹瀉仔豬頭日數(shù)占欄內(nèi)仔豬總頭日數(shù)的百分比計算腹瀉率。

1.4.2 豬瘟和偽狂犬抗體水平 在試驗結(jié)束當天從每欄隨機抽取1頭試豬通過前腔靜脈采血，靜置30min 后分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測豬瘟、豬偽狂犬病抗體，參照ELISA診斷試劑盒說明書進行。試劑盒購自美國IDEXX公司。

判定標準：豬瘟抗體阻斷率40%及上者為陽性，60%及上者為免疫合格；豬偽狂犬抗體S／N 值在0.6及以下者為陽性，0.3及以下者為免疫合格。

1.5 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計

各組數(shù)據(jù)先用Excel 2010 進行整理和初步計算，再采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件作獨立樣本t檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生長性能和腹瀉的影響

由表2知，各組試豬初始體重差異不顯著（P＝0.91），但試驗組仔豬末重和平均日增重比對照組分別高出0.71kg和16.14g／d，提高幅度達3.01%（P＞0.05）和4.94%（P＞0.05）；試驗組平均日采食量、料重比和腹瀉率均低于對照組，其中料重比較對照組降低了5.13%（P＜0.05），而腹瀉率降低了18.66%（P＞0.05）。

2.2 天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬血清豬瘟和偽狂犬病抗體水平的影響

由表3知，在斷乳仔豬飼糧中添加天蠶素抗菌肽替代吉他霉素可提高仔豬的豬瘟抗體水平。其中，試驗組阻斷率達62.80%，比對照組的28.87%提高了117.53%，差異顯著（P＜0.05）；試驗組變異系數(shù)為28.48%，小于對照組的48.56%；試驗組豬瘟抗體陽性率和合格率分別為100%和50.00%，分別比對照組高出499.88%和30%。

表2 天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉的影響Table 2 Effects of cecropins on growth performance and diarrhea incidence in weaned piglets

表3 天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬血清豬瘟抗體水平的影響Table 3 Effects of cecropins on the antibody level against CSFV in weaned piglets

由表4可以看出，在斷奶仔豬飼糧中添加天蠶素抗菌肽160g／t替代吉他霉素140g／t對于仔豬偽狂犬病抗體水平?jīng)]有明顯影響。試驗組和對照組試豬血清的偽狂犬病抗體S／N 值分別為0.28 和0.29，變異系數(shù)均在60%以上，陽性率和合格率為100%和50%。

表4 天蠶素抗菌肽和抗生素對斷奶仔豬血清偽狂犬病抗體水平的影響Table 4 Effects of cecropins and antibiotics on the antibody level against PRV in weaned piglets

2.3 天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬的經(jīng)濟效益分析

在對斷奶仔豬每千克增重經(jīng)濟效益分析中，因2組間人工、欄舍、易耗物料等成本因素基本相同而將其忽略不計，主要考慮每千克增重的飼料成本。飼料原料按當時行情計算，基礎(chǔ)飼糧＋10%硫酸粘桿菌素540mg／kg的成本為4.20元／kg，其中對照組飼糧添加吉他霉素140mg／kg的成本為元0.031元／kg，試驗組飼糧添加天蠶素抗菌肽160 mg／kg的成本為0.0304元／kg；根據(jù)表2中各組料重比計算的對照組和試驗組仔豬每kg增重飼料成本分別為7.70元和7.32元，試驗組比對照組降低了0.38元。表明本試驗中使用天蠶素抗菌肽替代吉他霉素可獲得更好的經(jīng)濟效益。

3 討論

3.1 天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生長性能和腹瀉的影響

抗菌肽作為一種生物活性肽，與傳統(tǒng)抗生素抑菌作用機制不同，它可能是通過在細菌細胞膜上穿孔形成離子通道，破壞細胞膜結(jié)構(gòu)，引起胞內(nèi)水溶性物質(zhì)大量滲出，導(dǎo)致菌體自溶而死亡，從而發(fā)揮其抗菌促生長的作用。陳香等［7］報道，仔豬飼糧中添加天蠶素抗菌肽制劑250 mg／kg組在提高飼料轉(zhuǎn)化率、降低飼料成本方面較之抗生素組效果更好。劉丁健等［8］報道，保育豬飼糧中添加0.1%抗菌肽與0.3%阿莫西林組飼喂效果相當。宋青龍等［9］發(fā)現(xiàn)，試驗2組平均日增重和平均日采食量均顯著高于對照組（P＜0.05）。此外，抗菌肽既能獨立發(fā)揮抗菌作用，也可以和傳統(tǒng)抗生素等其他抗菌物質(zhì)協(xié)同作用，發(fā)揮更高活性［12］。劉揚科等［10］報道，仔豬日糧中添加天蠶素抗菌肽300 mg／kg 與常用抗生素（10%桿菌肽鋅500 mg／kg＋10%硫酸粘桿菌素400mg／kg）配伍可顯著提高斷奶仔豬末重、平均日采食量和平均日增重，且抗菌肽組平均末重和平均日增重略高于高劑量抗生素組（10%桿菌肽鋅800 mg／kg＋10%硫酸粘桿菌素1000 mg／kg），而料肉比略低于高劑量抗生素組。本試驗證明，斷奶仔豬飼糧中添加天蠶素抗菌肽160 mg／kg替代吉他霉素與硫酸粘桿菌素配伍使用，可提高平均日增重和顯著降低料重比，進一步印證了前人的觀點。

宋青龍等［9］試驗表明日糧中添加天蠶素抗菌肽顯著改善仔豬腹瀉（P＜0.05）。黃茂俠［11］報道，飼糧中添加抗菌肽制劑0.6%～0.8%對降低仔豬腹瀉率有顯著效果，且比添加阿莫西林300mg／kg組效果更好。劉揚科等［12］發(fā)現(xiàn)，天蠶素抗菌肽與抗生素配伍使用能有效降低腹瀉，該效果顯著優(yōu)于高劑量抗生素單獨使用的效果。本試驗中，天蠶素抗菌肽組仔豬腹瀉率雖較抗生素組有所降低，但差異不顯著。由于本試驗觀察到的仔豬腹瀉多集中在斷奶后1周內(nèi)，這提示從教槽料開始使用天蠶素抗菌肽抗腹瀉效果是否會更好？值得進一步研究驗證。

3.2 天蠶素抗菌肽替代抗生素對斷奶仔豬血清豬瘟和偽狂犬病抗體水平的影響

宋青龍等［9］發(fā)現(xiàn)添加抗菌肽后第15d和25d可以顯著提高斷奶仔豬的豬瘟抗體陽性率（P＜0.05）。皮燦輝等［13］報道，使用添加抗菌肽制劑的飼糧連續(xù)飼喂母豬6個月能顯著提高母豬血清中的豬瘟抗體水平。本試驗也得到了一致結(jié)果：添加天蠶素抗菌肽的試驗組的豬瘟抗體阻斷率由28.86%顯著提高到62.80%，且變異系數(shù)較小，而100%的陽性率和83.33%合格率均較對照組的16.67%有大幅度提升。這表明飼糧中添加天蠶素抗菌肽替代抗生素能增強仔豬對豬瘟的免疫效果，且使其抗體保護處于相對穩(wěn)定狀態(tài)。Marr等［12］指出，與傳統(tǒng)抗生素對細胞的作用靶點通常是單一的個體或者族群不同，抗菌肽的作用靶點并不特定而且更多，這可能是抗菌肽在先天及獲得性免疫方面發(fā)揮重要作用的原因。

研究表明，豬偽狂犬病活疫苗免疫健康敏感豬7d后抗體水平開始上升，35d后達到高峰［14］。本試驗中，2組試豬偽狂犬病抗體水平差異不明顯，可能是由于本試驗仔豬偽狂犬疫苗接種僅14d，其抗體水平仍處于上升期，故未觀察到差異。

4 小結(jié)

斷奶仔豬飼糧中添加160 mg／kg天蠶素抗菌肽替代140mg／kg吉他霉素（50%）與10%硫酸粘桿菌素配伍使用，可提高飼料轉(zhuǎn)化率、豬瘟抗體水平和經(jīng)濟效益。

［1］Chen X，Zhu F M.Novel expression vector for secretion of Cecropin AD in Bacillus subtilis with enhanced antimicrobial activity［J］.Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2009，53（9）：3 683－3 689.

［2］羅振福，李俊波，楊丹丹，等.天蠶素類抗菌肽抗菌性能測定及其性質(zhì)研究［J］.家畜生態(tài)學報，2009，30（1）：73－77.

［3］Wachinger M，Kleinschmidet A，Winder D，et al.Antimicrobial peptides melittin and cecropin inhibit replication of human immunodeficiency virus 1by suppressing viral gene expression［J］.Journal of General Virology，1998，79（4）：731－740.

［4］Chia T J，Wu Y C，Chen J Y，et al.Antimicrobial peptides（AMP）with antiviral activity against fish nodavirus［J］.Fish＆Shellfish Immunology，2010，28（3）：434－439.

［5］王阿榮，敖長金，宋青龍，等.日糧中添加天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生長性能和血液生化指標的影響［J］.飼料工業(yè)，2011，32（10）：21－24.

［6］張董燕，季海峰，劉輝，等.天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生產(chǎn)性能及血清生化指標的影響［J］.飼料研究，2011（10）：22－24.

［7］陳 香，李 波，易學武，等.添加天蠶素抗菌肽對斷奶仔豬生長性能的影響［J］.中國飼料，2011（12）：25－30.

［8］劉丁健，曾其恒，李秀寶，等.復(fù)合抗菌肽制劑對保育豬生長性能和健康水平的影響［J］.養(yǎng)豬，2011（1）：15－16.

［9］宋青龍，王洪彬，張廣民，等.日糧中添加天蠶素抗菌肽對仔豬健康及生產(chǎn)性能的影響［J］.中國畜牧雜志，2012，48（13）：52－55.

［10］劉揚科，李 希，楊 利，等.日糧中添加天蠶素抗菌肽對降低斷奶仔豬飼用抗生素使用量的影響［J］.飼料與畜牧，2012（8）：56－58.

［11］黃茂俠.抗菌肽對預(yù)防斷奶仔豬腹瀉和呼吸道疾病的作用［J］.中國畜禽種業(yè)，2011（6）：72－74.

［12］Marr A K，Goodcrham W J，Hancock R E.Antibacterial Peptides for therapeutic use：obstacles and realistic outlook［J］.Current Opinion in Pharmacolog，2006，6（5）：468－472.

［13］皮燦輝，王 凱，謝燈養(yǎng)，等.抗菌肽制劑對母豬豬瘟抗體水平的影響［J］.養(yǎng)豬，2008（5）：11－12.

［14］吳文福，游啟有，楊傲冰，等.偽狂犬病活疫苗免疫豬血清抗體消長規(guī)律的研究［J］.廣東畜牧獸醫(yī)科技，2006，31（6）：39－41.