曲亞南 方旻 呂鵬舉 謝新藝 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所包裝材料容器檢驗(yàn)中心 （廣州 510663）

液相色譜測(cè)定藥用聚丙烯組合蓋中抗氧劑1010的不確定度評(píng)定

曲亞南 方旻 呂鵬舉 謝新藝 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所包裝材料容器檢驗(yàn)中心 （廣州 510663）

本文按歐洲藥典3.1.3聚烯烴項(xiàng)下檢測(cè)抗氧劑1010的方法，對(duì)藥用聚丙烯組合蓋樣品進(jìn)行平行檢測(cè)，并建立數(shù)學(xué)模型，以探尋不確定度的主要影響因素，系統(tǒng)分析和量化不確定度各分量。結(jié)果表明采用液相色譜測(cè)定聚丙烯組合蓋中抗氧劑1010的不確定度，主要由回收率和標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的不確定度而引起。

液相色譜法 藥用聚丙烯 抗氧劑1010 不確定度

直接接觸藥品的包裝材料與藥品的相容性已越來越受到廣泛的重視，尤其是高風(fēng)險(xiǎn)性的品種，例如噴霧劑、注射液等，國內(nèi)已就該領(lǐng)域發(fā)布了化學(xué)藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[1]。作為直接接觸藥品包裝材料的常用添加劑，歐洲藥典規(guī)定了抗氧劑1010的檢測(cè)方法和限量，并已作為國內(nèi)相容性試驗(yàn)的參考標(biāo)準(zhǔn)之一。該提取包裝材料中的抗氧劑的方法采用了回流技術(shù)，并含有過濾、定容、蒸干等多步前處理過程，這給檢測(cè)結(jié)果帶來引入較大誤差的機(jī)會(huì)。為了評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量，需要對(duì)不確定度進(jìn)行評(píng)定[2]，探尋不確定度的主要來源并加以控制，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

1.材料方法

1.1材料與試劑

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）

抗氧劑1010對(duì)照品：四-［β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸］季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，SIGMA-ALDRICH，批號(hào)：MKBF3728V，98%

樣品：藥用聚丙烯組合蓋

1.2方法

1.2.1 色譜條件

流動(dòng)相：水：四氫呋喃：乙腈=1：3：6

流速：1.5ml/min

波長：280nm

進(jìn)樣量：20μl

1.2.2 對(duì)照液制備

將抗氧劑1010標(biāo)準(zhǔn)品60.0mg溶于10.0ml乙腈與四氫呋喃等體積混合的溶液中。吸取此溶液2.0ml用乙腈與四氫呋喃等體積混合的試劑稀釋至50.0ml。

1.2.3 樣品供試液制備

溶液S1：取樣品約2.0g，精密稱量，放置于燒瓶中，加入甲苯80ml，持續(xù)攪拌，加熱回流1.5h，冷卻至60?C，在攪拌下加入甲醇120ml，燒結(jié)玻璃過濾器濾過。用甲苯與甲醇（4:6）混合液25ml沖洗燒瓶和濾渣，將洗液與濾液合并，并用相同的混合液稀釋至250ml。同法配制空白溶液。

供試液S2：將50ml溶液S1在45?C真空蒸干，殘?jiān)?.0ml的乙腈與四氫呋喃等體積混合液溶解，即為樣品供試液。同法制備空白液。

1.2.4 測(cè)定

將對(duì)照液、空白液與樣品供試液分別注入高效液相色譜儀，采用外標(biāo)法定量。

2.測(cè)量不確定度的數(shù)學(xué)模型的建立

根據(jù)樣品測(cè)定方法建立測(cè)量不確定度模型（1）式，即為聚丙烯中抗氧劑1010測(cè)量的不確定度[3]

式中： C－樣品中抗氧劑的含量，μg/g；

Ci－供試液的抗氧劑濃度，μg/mL；

V－最終樣品溶液的體積，ml；

m－樣品的質(zhì)量，g；

f1－體積校正因子；

f2－校準(zhǔn)溶液濃度變化修正因子；

f3－測(cè)量重復(fù)性修正因子；

f4－方法回收率偏差修正因子。

從測(cè)量不確定度模型中可以得到測(cè)量聚丙烯組合蓋中抗氧劑1010不確定度分量來源于以下幾個(gè)方面：

標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度產(chǎn)生的不確定度；

樣品稱量產(chǎn)生的不確定度；

樣品定容體積產(chǎn)生的不確定度；

樣品濃縮過程產(chǎn)生的不確定度；

樣品重復(fù)測(cè)定產(chǎn)生的不確定度；

標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬和的不確定度；

回收率產(chǎn)生的不確定度。

3.測(cè)量不確定度的分析與評(píng)定

3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度產(chǎn)生的不確定度urel(f2)

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度

抗氧劑1010對(duì)照品因未給出質(zhì)量分?jǐn)?shù)和限度標(biāo)識(shí)，故此項(xiàng)不考慮。

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量產(chǎn)生的不確定度u1rel(f2)

此三項(xiàng)合成出的稱量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度為

3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定容體積產(chǎn)生的不確定度u2rel(f2)

3.1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋體積產(chǎn)生的不確定度u3rel(f2)

此兩項(xiàng)合成得出稀釋產(chǎn)生的u3rel(f2)=0.00412。

3.1.5 由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)重復(fù)測(cè)定產(chǎn)生的不確定度u4rel(f2)

通過重復(fù)抗氧劑1010標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣進(jìn)行重復(fù)性評(píng)定，由重復(fù)標(biāo)定產(chǎn)生的不確定度如表1所示。

重復(fù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)生的不確定度

表1. 重復(fù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)生的不確定度

綜合以上不確定度分量，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel(f2)=0.0122。

3.2樣品稱量產(chǎn)生的u (m)

稱2g左右樣品,實(shí)際稱得2.0012g。根據(jù)1.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱量的不確定度同理計(jì)算，

3.3樣品濃縮過程產(chǎn)生的不確定度urel(f1)

20?C時(shí)50ml單標(biāo)線(A級(jí))的容量允差為0.05ml（按JJG 196-2006 《常用玻璃量器檢定規(guī)程》規(guī)定），相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2rel(f1)為0.00294。

3.4樣品定容體積產(chǎn)生的不確定度urel(V)

20?C時(shí)2ml單標(biāo)線(A級(jí))的容量允差為±0.010ml（按JJG 196-2006 《常用玻璃量器檢定規(guī)程》規(guī)定），urel(V)=0.00408。

3.5樣品重復(fù)測(cè)定產(chǎn)生的不確定度urel(f3)

由于測(cè)量次數(shù)較少，根據(jù)JJF1059-1999 4.4，采用極差法進(jìn)行評(píng)定。樣品重復(fù)測(cè)定2次,測(cè)定結(jié)果為452.1756和452.7045μg/g，平均值452.4400μg/g。

3.6標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬和的不確定度urel(Ci)[5]

分別重復(fù)兩次測(cè)定不同濃度抗氧劑1010標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC峰面積列于表2。

采用最小二乘法擬合表2中的數(shù)據(jù)，得標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度－峰面積工作曲線回歸方程C=2.639178e-4*A+0.1748723，R2=0.99998，則峰面積測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)偏差s為

應(yīng)用該標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量時(shí)，重復(fù)兩次測(cè)量樣品，即P=2，測(cè)得供試液中抗氧劑含量的最佳估計(jì)值C0=x0=36.21692μg/ml，

表2. 抗氧劑1010標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度—響應(yīng)值

表3. 加標(biāo)回收率結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度殘差平方和

n—標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)量次數(shù)，本列為12；

p—C0的測(cè)量次數(shù)，本例為2。

則校準(zhǔn)曲線擬合的不確定度u(Ci)為

3.7回收率產(chǎn)生的不確定度urel(f4)

制樣過程產(chǎn)生的不確定度采用與所測(cè)定樣品濃度水平相近的濃度進(jìn)行添加回收率試驗(yàn),每個(gè)添加濃度重復(fù)3次。回收率測(cè)定結(jié)果如表3所示。

4.合成相對(duì)不確定度

現(xiàn)將各不確定度分量列于表4中。

從數(shù)學(xué)模型中可看出，各影響參數(shù)相互獨(dú)立，且各參數(shù)的不確定度直接對(duì)被測(cè)量 C 的不確定度產(chǎn)生影響，即靈敏系數(shù)等于1，合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度可用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行合成，根據(jù)JJF1059–1999中6.7，相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

擴(kuò)展不確定度：在沒有特殊要求的情況下，按國際慣例，測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度包含因子k取2，則相對(duì)擴(kuò)展不確定度U= urel?k=8.14%。

表4.不確定度分量表

5.結(jié)論

液相色譜法測(cè)定藥用聚丙烯組合蓋中抗氧劑1010的含量，當(dāng)k=2，擴(kuò)展不確定度為36.8286μg/g，測(cè)量結(jié)果表述為452.4400±36.8286μg/g，k=2。

6.討論

通過對(duì)各不確定度的評(píng)定從表4可以看出，液相色譜法測(cè)定藥用聚丙烯組合蓋中的測(cè)量不確定度的來源主要為回收率和標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩方面引起的不確定度，回收率引起的不確定度最大。通過對(duì)分析數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)長期實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)總結(jié)分析,可以看出在整個(gè)檢測(cè)過程中前處理是結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵，在進(jìn)行前處理步驟時(shí)需格外謹(jǐn)慎以保證抗氧劑1010盡可能被獲得。稱量、玻璃器皿在轉(zhuǎn)移和稀釋溶液時(shí)所引起的不確定度比較小，基本可以不予考慮。

另外，由于抗氧劑1010自身的不穩(wěn)定，應(yīng)盡可能縮短檢測(cè)周期，特別是對(duì)樣品供試液的保存，最好是回流、過濾、蒸干、定容和測(cè)量都能夠在第一時(shí)間完成。

[1] 國家食品藥品監(jiān)督管理總局.化學(xué)藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)[S].2012.

[2] 國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示[S].JJF1059-1999.北京:中國計(jì)量出版社,1999.

[3] 占永革,黃湘燕,龔劍.離子色譜法測(cè)定泡菜中亞硝酸鹽的測(cè)量不確定度評(píng)定[J].食品科學(xué),2011,32(22):163-170.

[4] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.JJG196-2006 常用玻璃量器檢定規(guī)程[S].2006.

[5] 祁雄.微波消解-冷原子吸收法測(cè)定大米中汞的不確定度評(píng)定[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2007,24(6):1138-1144.

The Evaluation of Uncertainty for the Content of Antioxidant 1010 in Determining the Medical Polypropylene Combined Cover by Liquid Chromatography

QU Ya-nan FANG Min LV Peng-ju XIE Xin-yi Packaging Materials and Containers Test Center of Guangdong Medical Instruments Quality surveillance and Inspection Institute (Guangzhou 510663)

The antioxidant 1010 in the Medicinal Polypropylene Combined Cover samples was tested in parallel by Liquid Chromatography according to the method of the European Pharmacopoeia 3.1.3 polyolefin and a mathematical model was established to explore the main factors of uncertainty during the test. The results showed that the major factors came from the uncertainty of recovery rate and concentration of standard solution.

liquid chromatography, medical polypropylene, antioxidant 1010, uncertainty

1006-6586(2013)04-0048-05

R197.39

A

2012-11-29