張忠強(qiáng) 吳 濤 于紅濤 何錦照

（河源市人民醫(yī)院內(nèi)二區(qū)，廣東 河源 517000）

急性白血病患者體內(nèi)MicroRNA-143在骨髓細(xì)胞中的表達(dá)及其意義分析

張忠強(qiáng) 吳 濤 于紅濤 何錦照

（河源市人民醫(yī)院內(nèi)二區(qū)，廣東 河源 517000）

目的探討MicroRNA-143在急性白血病患者骨髓細(xì)胞表達(dá)情況，并分析其臨床意義。方法入選2009年5月至2011年9月在我院住院治療的急性白血病患者47例，同時(shí)入選在我住院治療并進(jìn)行骨髓穿刺檢查的非白血病患者46例作為對照組，比較兩組患者M(jìn)icroRNA-143表達(dá)情況，以及白血病組患者經(jīng)治療后MicroRNA-143表達(dá)變化情況。結(jié)果白血病組患者其MicroRNA-143表達(dá)水平顯著低于對照組患者，差異均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；且MicroRNA-143表達(dá)水平在白血病患者不同年齡、性別、疾病分型、基因類型等方面的差異無明顯差異，P＞0.05；入選白血病患者經(jīng)化治療后MicroRNA-143表達(dá)水平較治療前水平顯著升高，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。結(jié)論MicroRNA-143表達(dá)與急性白血病發(fā)病的發(fā)生、發(fā)展存在非常顯著的關(guān)系，檢測其水平的變化可以對患者的預(yù)后做出有效的評價(jià)。

急性白血??；骨髓細(xì)胞；表達(dá)；臨床意義；MicroRNA-143

近年來，隨著社會(huì)發(fā)展，白血病患病率呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，成為威脅人類健康和生命安全的主要疾病之一。急性白血病是一類由于干細(xì)胞出現(xiàn)異?？寺〉膼盒约膊?，其中克隆中的干細(xì)胞失去進(jìn)一步分化成熟能力而停滯在細(xì)胞發(fā)育不同階段；并且在發(fā)展過程中不斷浸潤器官和其他組織，抑制造血系統(tǒng)，對患者造成嚴(yán)重的危害[1]。及早診斷并干預(yù)這類疾病對于挽救患者生命具有非常重要的臨床意義。MicroRNA是近年來研究較多的一種小RNA，為一種內(nèi)生的、長度約20～24個(gè)核苷酸組成，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著多種重要的調(diào)節(jié)作用，研究顯示，每個(gè)MicroRNA可以擁有多個(gè)靶基因，且多個(gè)MicroRNA也可以對同一個(gè)基因發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用；MicroRNA對人類基因也存在重要的調(diào)節(jié)作用，大約控制人類1/3的基因[2-3]。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)MicroRNA與腫瘤的發(fā)生存在密切關(guān)系，通過調(diào)控細(xì)胞分化和增殖直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]，本研究旨在探討MicroRNA-143在急性白血病患者骨髓細(xì)胞表達(dá)情況，并分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料

入選2009年5月至2011年9月在我院住院治療的急性白血病患者47例，其中男性患者29例，女性患者18例，患者年齡18～57歲，其中髓系白血病患者27例，占57.4%；淋巴系白血病20例，占42.6%；所有患者均符合FAB分型診斷標(biāo)準(zhǔn)，均為初次診斷的白血病，均未接受化療或其他治療。同時(shí)入選在我住院治療并進(jìn)行骨髓穿刺檢查的非白血病患者46例作為對照組，兩組患者均簽署知情同意書，兩組患者在年齡、性別等其他方面的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理

所有入選者在進(jìn)行骨髓穿刺后，留取骨髓標(biāo)本5mL，采用肝素抗凝；單個(gè)核細(xì)胞提取，采用TRIzol法提取RNA，然后吸取2μLRNA在核蛋白定量測定儀上測定OD值，進(jìn)行準(zhǔn)確定量。反轉(zhuǎn)錄嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR

引物設(shè)計(jì)與合成由專門的生物科技公司負(fù)責(zé)設(shè)計(jì)和合成，MicroRNA-143實(shí)時(shí)定量反應(yīng)總體系的構(gòu)建，總量為20μL，包括：10μLSYBR Green 1μL、cDNA10μmol/L、正向和反向引物各1μL、ROX參考資料0.04μL、DEPC水補(bǔ)充至20μL，循環(huán)參數(shù)主要見參考文獻(xiàn)[5]，分為四個(gè)階段進(jìn)行：第1階段，50度2min鐘；第2階段，95℃2min，以上兩個(gè)階段均進(jìn)行1各循環(huán)；第3階段，95℃15s，60℃30s，40 個(gè)循環(huán)；溶解曲線分析: 95℃15 s、60℃1min、95℃15s、60℃15s、1個(gè)循環(huán)。每個(gè)標(biāo)本均作復(fù)孔3管，至少重復(fù)3 次。

1.2.3 觀察指標(biāo)

比較兩組患者M(jìn)icroRNA-143表達(dá)情況，以及經(jīng)治療后，白血病患者M(jìn)icroRNA-143表達(dá)變化情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用spss17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(χ—±s)表示，2組間資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組人群MicroRNA-143表達(dá)情況比較

分析顯示，白血病組患者其MicroRNA-143表達(dá)水平顯著低于對照組患者，差異均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；且MicroRNA-143表達(dá)水平在白血病患者不同年齡、性別、疾病分型、基因類型等方面的差異無明顯差異，P＞0.05。

2.2 不同階段MicroRNA-143表達(dá)情況比較

入選白血病患者經(jīng)化治療后，再次檢測患者M(jìn)icroRNA-143表達(dá)水平較治療前水平顯著升高，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

3 討 論

隨著環(huán)境污染加劇，白血病發(fā)病率呈現(xiàn)顯著上升的趨勢，盡管近年來在治療急性白血病取得了巨大的進(jìn)步。白血病仍然是威脅人類健康和生命安全的主要疾病之一，早期診斷，并采取有效地治療手段對于改善白血病患者的預(yù)后具有非常顯著的臨床意義[6]。生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)展給醫(yī)學(xué)的發(fā)展提供了非常有利的臨床工具，實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的出現(xiàn)是DNA定量檢測非常有效的手段，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、基礎(chǔ)研究[7]。在本研究中采用Q-PCR技術(shù)取得了非常好的效果。MicroRNA為小分子非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中，其與靶基因結(jié)合的方式主要為堿基配對，對靶基因產(chǎn)生負(fù)性調(diào)控作用，主要的生物學(xué)特點(diǎn)為在序列上高度保守，表達(dá)上具有發(fā)育階段性和組織特異性[8]。是近年來臨床研究和基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)問題，隨著研究的逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)其與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在非常顯著的關(guān)系，如肝癌、乳腺癌等。其表達(dá)具有一定的組織特異性，因此可以通過檢測患者細(xì)胞表達(dá)水平對患者疾病特點(diǎn)、預(yù)后做出非常有價(jià)值的評價(jià)[9]。

在本研究中通過比較發(fā)現(xiàn)，白血病患者M(jìn)icroRNA-143表達(dá)水平顯著下調(diào)，與患者年齡、性別、疾病分型等無顯著相關(guān)性，并且經(jīng)治療后其表達(dá)水平呈現(xiàn)上升趨勢，研究證實(shí)了MicroRNA參與了白血病發(fā)生、發(fā)展整個(gè)過程。有研究表明，MicroRNA-143具有抑癌基因作用，并且已經(jīng)證實(shí)其在多種腫瘤中均發(fā)揮著非常顯著的作用，可以顯著抑制癌細(xì)胞的增殖和遷移，發(fā)揮作用的主要機(jī)制為作用于KRAS基因抑制蛋白激酶通路，并且增強(qiáng)部分化療藥物的化療敏感性，MicroRNA-143在白血病患者中的作用是多方面的。MicroRNA-143這種作用不僅在白血病患者中得到了有效地證實(shí)，并且在其他腫瘤中也得到了類似的結(jié)果，如胃癌、淋巴瘤等其表達(dá)水平均出現(xiàn)明顯異常。隨著生物學(xué)研究進(jìn)展，其信息數(shù)據(jù)表明，每個(gè)MicroRNA對于數(shù)百個(gè)目標(biāo)基因具有一定的控制作用，其在血液系統(tǒng)中的研究最先與血細(xì)胞的分化開始的。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，MicroRNA突變或功能失調(diào)參與了白血病的發(fā)生、發(fā)展，因此在白血病患者檢測MicroRNA表達(dá)水平及其變化情況對于白血病的基因診斷、預(yù)后判斷、靶向治療等方面具有非常重要的作用[10]。

綜上所述，隨著研究的進(jìn)展，白血病的發(fā)生、發(fā)展是多種基因共同參與的結(jié)果；MicroRNA突變或功能失調(diào)參與了白血病的發(fā)生、發(fā)展，檢測其水平的變化可以對患者的診斷、預(yù)后做出有效的評價(jià)。

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1671-8194（2013）11-0255-02