蔣旭超，　謝志芳，　章衛(wèi)平△

(第二軍醫(yī)大學(xué) 1病理生理學(xué)教研室， 2肥胖與糖尿病研究中心，上海 200433)

糖尿病是當(dāng)今嚴(yán)重危害人類健康和社會(huì)發(fā)展的重大疾病之一，在全球不同國(guó)家和地區(qū)的發(fā)病率均呈現(xiàn)不斷上升和年輕化的趨勢(shì)。2010年中國(guó)糖尿病患者近9 200萬(wàn)[1]，目前全球糖尿病患者已增至3.66億人，根據(jù)預(yù)測(cè)，20年內(nèi)將達(dá)到近6億人，全球每年死于糖尿病的人數(shù)約為460萬(wàn)，用于糖尿病患者的醫(yī)療開(kāi)支共計(jì)4 650億美元。因此，糖尿病的防治任重道遠(yuǎn)。糖尿病主要分為1型和2型，共同的病理生理學(xué)特征是胰島β細(xì)胞數(shù)目減少和(或)功能障礙。因此，胰島β細(xì)胞的發(fā)育與再生一直是糖尿病領(lǐng)域的研究前沿和熱點(diǎn)，該方面的研究進(jìn)展可能為糖尿病的防治帶來(lái)新的突破。本文就胰島β細(xì)胞發(fā)育與再生的最新研究進(jìn)展做一綜述。

1　胰島β細(xì)胞的發(fā)育

1.1胰腺的組成胰腺由外分泌部和內(nèi)分泌部構(gòu)成。外分泌部由腺泡細(xì)胞和導(dǎo)管細(xì)胞構(gòu)成。胰腺內(nèi)分泌部主要由散在胰腺各部的胰島和在胰腺外分泌細(xì)胞中的內(nèi)分泌細(xì)胞構(gòu)成。胰島是胰腺的主要內(nèi)分泌組織，主要有5種類型的細(xì)胞，即α、β、δ、PP和ε細(xì)胞，分別分泌胰高血糖素、胰島素、生長(zhǎng)抑素、胰多肽和生長(zhǎng)激素釋放肽。其中α細(xì)胞約占胰島細(xì)胞的15%～20%，β細(xì)胞占70%～80%，δ細(xì)胞占5%，PP 細(xì)胞占1%，ε細(xì)胞﹤1%。在多數(shù)哺乳類動(dòng)物中，內(nèi)分泌細(xì)胞在胰島內(nèi)的分布相似，其特點(diǎn)是β細(xì)胞位于核心，而周圍由非β細(xì)胞(α細(xì)胞和δ細(xì)胞)構(gòu)成非連續(xù)性框架。人類和靈長(zhǎng)類的胰島形狀及排列更加復(fù)雜，輪廓有橢圓形和三葉草形等多種形態(tài)。

1.2胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞的分化人體內(nèi)分泌細(xì)胞來(lái)源于導(dǎo)管樣上皮細(xì)胞，于孕第7周開(kāi)始分化；第12周時(shí)，胰島細(xì)胞增多并離開(kāi)導(dǎo)管上皮遷移到導(dǎo)管旁的間充質(zhì)內(nèi)聚集，形成原始胰島；第14周時(shí)，胰腺間充質(zhì)大量增生，分隔胰腺組織形成胰腺小葉，胰島形成并繼續(xù)保持高速增殖分化直到出生。出生后，胰島經(jīng)歷了β細(xì)胞復(fù)制、增生及凋亡的重塑過(guò)程。出生階段，β細(xì)胞群體中每天約有18% β細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制增殖，使β細(xì)胞數(shù)量增多，以適應(yīng)合成胰島素的需要。成年后，β細(xì)胞的復(fù)制率占總數(shù)的2%～3%。胰島通過(guò)凋亡和增殖的平衡來(lái)維持β細(xì)胞數(shù)量的穩(wěn)定[2]。

2　胰島β細(xì)胞分化的分子機(jī)制

研究證明，參與胰島β細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子主要包括胰十二指腸同源異型盒蛋白1(pancreatic duodenal homeobox 1，Pdx1)、神經(jīng)元素3(neurogenin 3，Ngn3)、激活素A(activin A)、配對(duì)盒基因4(paired homeobox gene 4,Pax4)、NK2轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)的基因座2(NK2 transcription factor related, locus 2,Nkx2.2)及NK6轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)的基因座1(NK6 transcription factor related, locus 1,Nkx6.1)等，這些蛋白協(xié)調(diào)表達(dá)決定了胰島β細(xì)胞的分化。

2.1Pdx1Cerf等[3]研究認(rèn)為Pdx1是表達(dá)于早期胰腺發(fā)育、胰島細(xì)胞分化和β細(xì)胞成熟過(guò)程中的一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子。Pdx1誘導(dǎo)內(nèi)胚層向胰腺定向發(fā)育和成熟, 其活化可促進(jìn)胰島素、生長(zhǎng)抑素、葡萄糖激酶、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子2和胰島淀粉樣多肽等β細(xì)胞重要基因的表達(dá)，并可誘導(dǎo)內(nèi)源性生長(zhǎng)激素抑制激素基因的表達(dá)，是胰腺開(kāi)始形成的標(biāo)志；促進(jìn)胰島素分泌和維持胰島β細(xì)胞的正常功能, 其對(duì)出現(xiàn)在腸內(nèi)胚層背側(cè)及腹側(cè)的胰腺萌芽的生長(zhǎng)分化起重要作用，其純合子缺失突變會(huì)導(dǎo)致胰腺無(wú)法形成[2]。

2.2Ngn3Ngn3是堿性螺旋-環(huán)-螺旋家族轉(zhuǎn)錄因子，屬于胰島祖細(xì)胞的特異性表達(dá)基因之一，在胚胎內(nèi)臟內(nèi)胚層新生內(nèi)分泌胰腺中起重要作用[4]。上調(diào)其下游基因神經(jīng)源性分化因子1(neurogenic diffe-rentiation factor 1,NeuroD1)表達(dá)，Pax4/6等可促進(jìn)胰高血糖素樣肽1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)對(duì)β細(xì)胞的分化作用。Melton實(shí)驗(yàn)室利用重組腺病毒將Ngn3、Pdx1及肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物A基因 (v-mafmusculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene ho-molog A,MafA)聯(lián)合作用可在體內(nèi)不需要重新編程即可將外分泌腺的胰腺泡細(xì)胞轉(zhuǎn)分化成β細(xì)胞[5]。此外，Ngn3對(duì)本身的表達(dá)具有負(fù)調(diào)控作用，當(dāng)Ngn3通過(guò)激活胰島素細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)胰島細(xì)胞分化時(shí)，Ngn3也抑制本身基因的表達(dá)[6]。

2.3Activin AActivin A屬于TGF-β超家族成員。不同濃度的activin A可使胚胎干細(xì)胞向不同胚層細(xì)胞分化[7]。Activin A在胚胎干細(xì)胞向胰島素生成細(xì)胞分化的過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。Kitamura等[8]發(fā)現(xiàn)，一種植物堿藥物conophylline(CnP)和β細(xì)胞素δ4(betacellulin-δ4,BTCδ4)可以使β細(xì)胞分化，二者比用activin A和β細(xì)胞素(betacellulin)更能有效誘導(dǎo)胰島β細(xì)胞的產(chǎn)生，且分化成的β細(xì)胞更能應(yīng)答高血糖刺激，說(shuō)明CnP是一種比activin A更為有效的誘導(dǎo)胰島細(xì)胞生成的因子。

2.4Pax4Pax4是成對(duì)-同源框基因家族成員，在胰腺早期分化及成熟胰島細(xì)胞增殖過(guò)程中起重要的作用。早期在胚胎胰芽中表達(dá)，晚期局限于分化的β細(xì)胞中，胰腺發(fā)育成熟后，不再表達(dá)[9]。Pax4對(duì)胰島素和生長(zhǎng)抑素產(chǎn)生細(xì)胞分化是必要的, 促進(jìn)β和δ細(xì)胞的發(fā)育。

2.5Nkx2.2與Nkx6.1Nkx2.2和Nkx6.1是NK2型同源盒基因家族成員。Nkx2.2在腹側(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胰腺中表達(dá)。Nkx2.2從胚胎胰腺8.5 d即在腹側(cè)和背側(cè)胰芽中表達(dá)。胰島發(fā)育完全后，在除δ細(xì)胞外的所有胰島細(xì)胞中表達(dá)，它對(duì)于表達(dá)胰島素是必需的[10]。Nkx2.2是下游的調(diào)控因子，保證定向分化形成的內(nèi)分泌細(xì)胞具有內(nèi)分泌作用。Nkx2.2是β細(xì)胞分化的重要調(diào)節(jié)因子，對(duì)于β細(xì)胞的最終分化是必要的。Nkx6.1位于Nkx2.2下游，是一個(gè)特異表達(dá)于成熟β細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子。最早于胚胎9.0～9.5 d在胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中表達(dá)，后來(lái)特異局限于成熟的β細(xì)胞，Nkx6.1在β細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

3　胰島β細(xì)胞的變化與糖尿病的關(guān)系

糖尿病是一種以血漿葡萄糖水平升高為基本特征的代謝性疾病。1型糖尿病患者因免疫損傷、β細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行性喪失及胰島素分泌不足導(dǎo)致血糖持續(xù)升高。2型糖尿病患者同時(shí)存在胰島素分泌缺陷和胰島素抵抗，存在β細(xì)胞數(shù)量的丟失或功能不足，致胰島素總量不足或生物效應(yīng)的降低，引起血糖升高[11]。不論是1型還是2型糖尿病，最終在多因素?fù)p害下均會(huì)導(dǎo)致β細(xì)胞衰竭，β細(xì)胞的分泌缺陷和數(shù)量缺失可導(dǎo)致胰島素供給缺乏，機(jī)體代謝障礙。糖尿病早期，β細(xì)胞功能損害尚部分可逆，但到了晚期，由于胰島數(shù)量和β細(xì)胞總量減少，功能衰退發(fā)展為不可逆[12]。因此，早期消除或減輕各種損害β細(xì)胞的因素，逆轉(zhuǎn)其衰竭，晚期增加β細(xì)胞數(shù)量和提升其質(zhì)量是解決糖尿病損害的關(guān)鍵途徑之一。

現(xiàn)有證據(jù)表明，β細(xì)胞群是不斷變化的，通過(guò)β細(xì)胞功能和大小數(shù)量的變化使血糖濃度局限在一個(gè)很狹窄的生理范圍內(nèi)[3]。β細(xì)胞群大小數(shù)量的增加或減少可能與β細(xì)胞數(shù)量(增殖或凋亡)和單個(gè)細(xì)胞體積(肥大或萎縮)的變化有關(guān)。在肥胖、妊娠等情況下，胰島細(xì)胞的數(shù)量和胰島的體積都明顯增加，妊娠大鼠的β細(xì)胞數(shù)量比正常時(shí)增加50%。胰島素受體或胰島素受體底物1基因敲除的小鼠，其血漿胰島素水平比正常小鼠高數(shù)十倍。同時(shí)，其β細(xì)胞的數(shù)量約是正常小鼠的數(shù)十倍[13]。這種細(xì)胞數(shù)量的增加是一種有效的功能代償形式，其機(jī)制可能包括β細(xì)胞的增生增加、凋亡減少和胰島的再生。

4　胰島β細(xì)胞再生的細(xì)胞來(lái)源

4.1成熟β細(xì)胞Dor等[14]發(fā)現(xiàn)在正常的生理或胰腺部分切除后(70%)，新的β細(xì)胞是由已經(jīng)存在的成熟β細(xì)胞復(fù)制或有絲分裂形成的，并不是由其干細(xì)胞或者祖細(xì)胞分化發(fā)育而來(lái)。從而直接證明終末分化的小鼠β細(xì)胞仍具有增殖能力。β細(xì)胞的復(fù)制主要是在胰島內(nèi)部，胰島的體積會(huì)隨著β細(xì)胞復(fù)制而增加，并沒(méi)有新的胰島生成。Spijker等[15]發(fā)現(xiàn)成熟內(nèi)分泌細(xì)胞的可塑性能夠被調(diào)控。在沒(méi)有引入基因突變修飾的情況下，初始人類β細(xì)胞經(jīng)歷了一個(gè)轉(zhuǎn)變過(guò)程而成為產(chǎn)生胰高血糖素的α細(xì)胞。慢病毒介導(dǎo)的β細(xì)胞譜系跟蹤揭示，這個(gè)轉(zhuǎn)變過(guò)程在幾天內(nèi)發(fā)生。在超微結(jié)構(gòu)形態(tài)的基礎(chǔ)上，已轉(zhuǎn)化的細(xì)胞與原始α細(xì)胞難以區(qū)分，且移植體內(nèi)后能維持α細(xì)胞的表型。隨著β細(xì)胞脫顆粒和產(chǎn)生胰高血糖素細(xì)胞內(nèi)β細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Pdx1及Nkx6.1的表達(dá)，β細(xì)胞轉(zhuǎn)變成α細(xì)胞。

4.2胰島α細(xì)胞Thorel等[16]使用白喉毒素(diphtheria toxin,DT)將RIP-DTR小鼠的胰島β細(xì)胞幾乎全部破壞，誘發(fā)糖尿病，并采用遺傳譜系追蹤標(biāo)記監(jiān)測(cè)方法在6個(gè)月后發(fā)現(xiàn)胰島β細(xì)胞再生，數(shù)量增加，并且是由α細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)。Maria-Engler等[13]也發(fā)現(xiàn)胰島α細(xì)胞可以向β細(xì)胞轉(zhuǎn)化，其中Pdx1、Nkx6.1和Pax4起了關(guān)鍵作用，并且胰島α細(xì)胞和β細(xì)胞有共同的轉(zhuǎn)錄因子(如Isl1和Pax6)和起源。Talchai等[17]發(fā)現(xiàn)在2型糖尿病β細(xì)胞功能衰竭的過(guò)程中，β細(xì)胞去分化轉(zhuǎn)變?yōu)棣良?xì)胞是其中的重要機(jī)制。這些研究結(jié)果表明，胰島α細(xì)胞和β細(xì)胞在特定的病理生理?xiàng)l件下，可能存在交互轉(zhuǎn)分化過(guò)程。

4.3胰腺導(dǎo)管前體細(xì)胞胰腺導(dǎo)管細(xì)胞可能是胰島的前體細(xì)胞。采用共聚焦顯微和微量RT-PCR方法證實(shí)，長(zhǎng)期培養(yǎng)巢蛋白陽(yáng)性的胰島細(xì)胞，可被視為前體細(xì)胞分化為完全功能β細(xì)胞的潛在來(lái)源[18]。Phinney等[19]在體外定向誘導(dǎo)成人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞分化為分泌胰島素的功能性胰島細(xì)胞團(tuán)。Bonner-Weir等[20]從人胰腺導(dǎo)管中誘導(dǎo)分化出有組織結(jié)構(gòu)的胰島樣細(xì)胞團(tuán)(cultured human islet buds,CHIBs)，CHIBs可根據(jù)葡萄糖刺激產(chǎn)生胰島素分泌。

4.4胰腺腺泡細(xì)胞Furuya等[21]發(fā)現(xiàn)，配體結(jié)合的甲狀腺激素受體α(thyroid hormone receptor α,TRα)在β細(xì)胞數(shù)量的后天擴(kuò)增生長(zhǎng)過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。使用能表達(dá)TRα的腺病毒載體去誘導(dǎo)腺泡細(xì)胞的重新編碼而使其轉(zhuǎn)變成產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞，其中TRα是由淀粉酶2啟動(dòng)子(AdAmy2TRα)調(diào)控的。用3,5,3′-三碘甲狀腺原氨酸的治療增加了TRα與磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)亞基p85α的聯(lián)系，在純化的腺泡細(xì)胞中，磷酸化絲/蘇氨酸激酶(serine/threonine kinase,Akt)致其活化，從而促進(jìn)Pdx1、Ngn3和MafA表達(dá)。基于凝集素相關(guān)細(xì)胞譜系示蹤系統(tǒng)和Cre/loxP位點(diǎn)細(xì)胞譜系示蹤系統(tǒng)的分析，表明新合成的產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞來(lái)源于胰腺腺泡細(xì)胞。經(jīng)電子顯微鏡觀察到細(xì)胞中含有胰島素的分泌顆粒。由小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)介導(dǎo)的p85α沉默或由LY294002誘導(dǎo)的PI3K抑制，揭示了的Pdx1、Ngn3和MafA的表達(dá)和產(chǎn)生胰島素細(xì)胞的重新編碼。

4.5胚胎干細(xì)胞Schuldiner等[22]發(fā)現(xiàn)，胚胎干細(xì)胞可以在體外自發(fā)分化為能夠產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞，但效率非常低(1%～2%)。Segev等[23]應(yīng)用H9.2胚胎干細(xì)胞系在體外經(jīng)過(guò)6個(gè)不同階段的分化，形成了胰島樣細(xì)胞團(tuán)。Kroon等[24]發(fā)現(xiàn)，胚胎干細(xì)胞成熟時(shí)可生成一種相應(yīng)于胰腺內(nèi)胚層的細(xì)胞，其能夠保持血糖接近正常水平，但得到的內(nèi)分泌細(xì)胞會(huì)有一些不成熟的表型，可能形成畸胎瘤。因所獲得胰島樣細(xì)胞分泌胰島素水平低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到β細(xì)胞的功能，以及倫理學(xué)問(wèn)題等限制了胚胎干細(xì)胞的應(yīng)用。

4.6骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)是來(lái)源于中胚層的具有自我更新和分化潛能的多能干細(xì)胞，能夠向胰島樣細(xì)胞分化，促進(jìn)受體殘余胰島增殖。Moriscot等[25]發(fā)現(xiàn)hBMSCs能夠分化為胰島素分泌細(xì)胞，經(jīng)RT-PCR檢測(cè)肝核轉(zhuǎn)錄因子叉頭盒蛋白A2(forkhead box protein A2,FoxA2)和胰島素啟動(dòng)因子1在誘導(dǎo)其分化過(guò)程中起重要作用。唐小龍等[26]研究發(fā)現(xiàn)Pdx1聯(lián)合Nkx6.1促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島樣細(xì)胞。Sun等[27]研究證實(shí)，即使是糖尿病患者的hBMSCs，也可以在體外誘導(dǎo)成胰島素生成細(xì)胞，自體移植后可有效避免排斥反應(yīng)，這種hBMSCs表達(dá)CD29、CD44和CD106。

4.7臍帶血干細(xì)胞臍帶血所含淋巴細(xì)胞的免疫功能不夠成熟，體內(nèi)移植能逃避主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)不相容的免疫細(xì)胞攻擊。研究證實(shí)，臍血中除了富含造血干細(xì)胞，還含有多潛能干細(xì)胞-間充質(zhì)干細(xì)胞。Michael等[28]經(jīng)外周靜脈為15位1型糖尿病患兒實(shí)施臍血自體移植術(shù)，移植后患兒內(nèi)源性胰島素分泌衰退的速度減慢，沒(méi)有明顯不良反應(yīng)。蘇仲春等[29]使用細(xì)胞外基質(zhì)膠將人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)分化為胰島素分泌細(xì)胞，可見(jiàn)細(xì)胞團(tuán)樣結(jié)構(gòu)，胰島素陽(yáng)性細(xì)胞占所誘導(dǎo)細(xì)胞的(25.2±3.4)%，誘導(dǎo)后的細(xì)胞表達(dá)胰島相關(guān)基因和激素。

4.8脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)脂肪組織來(lái)源方便，且含有大量的間充質(zhì)干細(xì)胞。Chandra等[30]采用分步誘導(dǎo)法，將ADSCs誘導(dǎo)成能分泌胰島素的胰島樣細(xì)胞。印度學(xué)者用ADSCs結(jié)合骨髓移植治療了5例1型糖尿病患者，發(fā)現(xiàn)患者胰島素的需求降低，血液C-肽水平提高了4～26倍，且平均維持在3個(gè)月左右。研究表明用人的ADSCs結(jié)合骨髓移植治療1型糖尿病比較安全，沒(méi)有出現(xiàn)明顯的排斥反應(yīng)，也避免了異基因的污染[31]。

4.9誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,iPS細(xì)胞)2006年，Takahashi等[32]向鼠胚或成體成纖維細(xì)胞中導(dǎo)入4個(gè)特定的轉(zhuǎn)錄因子(Oct3/4、Sox2、c-Myc及Klf4)產(chǎn)生出iPS細(xì)胞。經(jīng)過(guò)篩選，發(fā)現(xiàn)了具有干細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞群落和具有胚胎干細(xì)胞特異的表面抗原，通過(guò)檢測(cè)充分證明了它們具有多能性。2009年，“小小”的誕生再次證明了iPS細(xì)胞的全能性[33]。Zhang等[34]將iPS細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的產(chǎn)胰島素細(xì)胞，大部分表達(dá)與成熟β細(xì)胞相同的特異標(biāo)記，如Nkx6.1和Pdx1。2010年7月，Seki等[35]研究發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(T-cellderived iPS cells,TiPS cells) 保留了T淋巴細(xì)胞受體的基因組重排，并且其受體基因座重排可作為一種基因簽名用于體內(nèi)示蹤。iPS細(xì)胞具有許多獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，如來(lái)源不受限制，避免了免疫排斥反應(yīng)以及倫理道德等問(wèn)題，保證了其具有廣泛的應(yīng)用前景，然而致瘤性是其致命的缺陷，安全性、有效性仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

5　展望

目前關(guān)于通過(guò)胰腺成熟細(xì)胞、干細(xì)胞等來(lái)源定向分化為β細(xì)胞的多種途徑的研究已經(jīng)取得了一定的成果，從而有希望在根本上解決β細(xì)胞來(lái)源不足的問(wèn)題，為臨床糾正糖尿病患者的β細(xì)胞功能缺陷提供有效手段。但如何解決定向誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的功能性β細(xì)胞，克服排斥反應(yīng)，避免自身免疫反應(yīng)的攻擊以及干細(xì)胞致瘤性等問(wèn)題仍是一個(gè)巨大挑戰(zhàn)。隨著干細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展，相信將來(lái)肯定能克服以上困難，掌握一套成熟的技術(shù)用于臨床治療攻克糖尿病。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Yang W, Lu J, Weng J, et al. Prevalence of diabetes among men and women in China[J]. New Engl J Med, 2010,362(12):1090-1101.

[2]Gagliardino JJ, Del Zotto H, Massy L, et al. Pancreatic duodenal homeobox-1 and islet neogenesis-associated protein: a possible combined marker of activateable pancreatic cell precursors[J]. J Endocrinol, 2003,177(2):249-259.

[3]Cerf ME. Transcription factors regulating beta-cell function[J]. Eur J Endocrinol, 2006,155(5):671-679.

[4]Noguchi H. Production of pancreatic beta-cells from stem cells[J]. Curr Diabetes Rev, 2010, 6(3):184-190.

[5]Zhou Q, Brown J, Kanarek A, et al.Invivoreprogramming of adult pancreatic exocrine cells to beta-cells[J]. Nature, 2008,455(7213):627-632.

[6]Smith SB, Watada H, German MS. Neurogenin3 activates the islet differentiation program while repressing its own expression[J]. Mol Endocrinol, 2004, 18(1):142-149.

[7]Sulzbacher S, Schroeder IS, Truong TT, et al. Activin A-induced differentiation of embryonic stem cells into endoderm and pancreatic progenitors:the influence of differentiation factors and culture conditions[J]. Stem Cell Rev, 2009, 5(2):159-173.

[8]Kitamura R, Ogata T, Tanaka Y, et al. Conophylline and betacellulin-delta4: an effective combination of differentiation factors for pancreatic beta cells[J]. Endocr J, 2007, 54(2):255-264.

[9]Smith SB, Ee HC, Conners JR, et al. Paired-homeodomain transcription factor PAX4 acts as a transcriptional repressor in early pancreatic development[J]. Mol Cell Biol, 1999,19(12):8272-8280.

[10] Sander M, Sussel L, Conners J, et al. Homeobox gene Nkx6.1 lies downstream of Nkx2.2 in the major pathway of beta-cell formation in the pancreas[J]. Development, 2000,127(24):5533-5540.

[11] Dohath MY, Halban PA. Decreased beta-cell mass in diabetes: significance, mechanisms and therapeutic implications[J]. Diabetologia, 2004,47(3):581-589.

[12] Bonner-Weir S. Life and death of the pancreatic beta cells[J].Trends Endocrinol Metab, 2000,11(9):375-378.

[13] Maria-Engler SS, Correa-Giannella ML, Labriola L, et al. Co-localization of nestin and insulin and expression of islet cell markers in long-term human pancreatic nestin-positive cell cultures[J]. J Endocrinol, 2004,183(3):455-467.

[14] Dor Y, Brown J, Martinez OI, et al. Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation[J].Nature, 2004,429(6987):41-46.

[15] Spijker HS, Ravelli RB, Mommaas-Kienhuis AM, et al. Conversion of mature human beta-cells into glucagon-producing alpha-cells[J]. Diabetes, 2013,62(7): 2471-2480.

[16] Thorel F, Népote V, Avril I, et al. Conversion of adult pancreatic alpha-cells to beta-cells after extreme beta-cell loss[J]. Nature, 2010, 464(7292):1149-1154.

[17] Talchai C, Xuan S, Lin HV, et al. Pancreatic beta cell dedifferentiation as a mechanism of diabetic beta cell failure[J]. Cell, 2012, 150(6):1223-1234.

[18] Wu HL, Wang Y, Zhang P, et al. Reversible immortalization of rat pancreatic beta cells with a novel immortalizing and tamoxifen-mediated self-recombination tricistronic vector[J]. J Biotechnol, 2011,151(3):231-241.

[19] Phinney DG. Biochemical heterogeneity of mesenchymal stem cell populations: clues to their therapeutic efficacy[J]. Cell Cycle, 2007,6(23): 2884-2889.

[20] Bonner-Weir S, Taneja M, Weir GC, et al.Invitrocultivation of human islets from expanded ductal tissue[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2000,97(14):7999-8004.

[21] Furuya F, Shimura H, Asami K, et al. Ligand-bound thyroid hormone receptor contributes to reprogramming of pancreatic acinar cells into insulin-producing cells[J]. J Biol Chem, 2013,288(22): 16155-16166.

[22] Schuldiner M, Yanuka O, Itskovitz-Eldor J, et al. Effects of eight growth factors on the differentiation of cells derived from human embryonic stem cells[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2000, 97(21):11307-11312.

[23] Segev H, Fishman B, Ziskind A, et al. Differentiation of human embryonic stem cells into insulin-producing clusters[J]. Stem Cells, 2004,22(3):265-274.

[24] Kroon E, Martinson LA, Kadoya K, et al. Pancreatic endoderm derived from human embryonic stem cells generates glucose-responsive insulin-secreting cellsinvivo[J]. Nat Biotechnol, 2008,26(4): 443-452.

[25] Moriscot C, de Fraipont F, Richard MJ, et al. Human bone marrow mesenchymal stem cells can express insulin and key transcription factors of the endocrine pancreas developmental pathway upon genetic and/or microenvironmental manipulationinvitro[J]. Stem Cells, 2005,23(4):594-603.

[26] 唐小龍,張洹,朱康兒,等. PDX1聯(lián)合NKX6.1促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為胰島樣細(xì)胞[J].中國(guó)病理生理學(xué)雜志,2009,25(8):1591-1599.

[27] Sun Y, Chen L, Hou XG, et al. Differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells from diabetic patients into insulin-producing cellsinvitro[J]. Chin Med J (Engl), 2007,120(9): 771-776.

[28] Michael J, Viener HL, Wasserfall C, et al. Autologous umbilical cord blood infusion for type 1 diabetes[J]. Exp Hematol, 2008,36(6):710-715.

[29] 蘇仲春,陳家勁,王玔,等.誘導(dǎo)人臍帶MSCs分化為胰島樣細(xì)胞團(tuán)的促成熟方案及機(jī)制[J]. 中國(guó)病理生理學(xué)雜志,2013,29(2):294-301.

[30] Chandra V, G S, Phadnis S, et al. Generation of pancreatic hormone-expressing islet-like cell aggregates from murine adipose tissue-derived stem cells[J]. Stem Cells, 2009, 27(8):1941-1953.

[31] Trivedi HL, Vanikar AV, Thakker U, et al. Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells combined with hematopoietic stem cell transplantation synthesize insulin[J]. Transplant Proc,2008, 40(4):1135-1139.

[32] Takahashi K, Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors[J]. Cell, 2006,126(4):663-676.

[33] Zhao XY, Li W, Lv Z, et al. iPS cells produce viable mice through tetraploid complementation[J]. Nature, 2009, 461(7):86-90.

[34] Zhang D, Jiang W, Liu M, et al. Highly efficient differentiation of human ES cells and iPS cells into mature pancreatic insulin-producing cells[J]. Cell Res, 2009,19(4):429-438.

[35] Seki T, Yuasa S, Oda M, et al. Generation of induced pluripotent stem cells from human terminally differentiated circulating T cells[J]. Cell Stem Cell, 2010,7(1):11-14.