萬培偉，宣亮，劉昌林

（1.江西生物科技職業(yè)學院，江西 南昌 330200；2.江西省畜牧獸醫(yī)局；3.南昌市農科院）

1 豬圓環(huán)病毒的病原學

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV）屬于圓環(huán)病毒科（Circoviridae）、圓環(huán)病毒屬（Circovirus）。PCV可分為兩個血清型，即 PCV－1 和 PCV－2[1]。PCV－2是引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome PWMS）、母豬繁殖障礙、斷奶和育肥豬的呼吸道疾病、豬皮炎和腎病綜合征（Porcine dermatitis and nephropathy syndeome PDNS）等多種疾病的主要病原[2]。PCV－2 可以分為PCV－2a 和PCV－2b 兩種主要亞型，2008年丹麥還發(fā)現存在PCV－2c，這是至今為止唯一一次報道PCV－2c[3，4]。2003年以前中國豬場以 PCV－2a 占主導，2004年之后PCV－2b 越來越普遍，而且毒力更強。還有研究者把PCV－2a 分為（2A－2E）5個基因型，PCV－2b 分為（1A－1C）3個基因型[5]。分析發(fā)現PCV－2a 和 PCV－2b 有 5個主要的區(qū)別：（1）PCV－2a基因組全長1767bp、PCV－2b 基因組全長1768bp，PCV－2a 在第1040個核苷酸缺失。（2）ORF1 有314個氨基酸，PCV－2a 和PCV－2b 在ORF1 中的942個核苷酸中有172個不同，占18%，其中在第152個核苷酸最穩(wěn)定的變異位置，由于這個核苷酸的改變導致Gly52/Arg8/Ser2(PCV2b)改變?yōu)镾er70/Gly1(PCV－2a)。（3）ORF3 有 104個氨基酸，PCV－2a 和PCV－2b 在ORF3 上的312個核苷酸有51個不同，占 28%。（4）PCV－2 分為 PCV－2b 主要是根據ORF2 上的差異，在ORF2 上有233個氨基酸，PCV－2a 和PCV－2b 在該閱讀框上的699個核苷酸中有201個不同，占28%。（5）在ORF2 閱讀框，第1486－1472 位置上PCV－2a 的核苷酸序列為TCAAACCCCCG，1487～1473 位置上 PCV2b 的核苷酸序列為ACCAACAAAAT。

2 豬圓環(huán)病毒流行病學

由PCV－2 引發(fā)的PMWS 最常見于6～8周齡的豬，發(fā)病豬的死亡率一般在10%～30%不等。自1991年，加拿大首次報道了關于PMWS 的爆發(fā)以來，美國、法國、德國、意大利、新西蘭、丹麥、荷蘭、墨西哥、韓國、日本等許多國家和地區(qū)都有該病發(fā)生的相關報道。巴西CN Barbosa 等調查發(fā)現在野豬群中有54.09%～89.53%的高流行率，而野豬場的流行率為100%。德國G Rriner 等調查認為德國野豬PCVl和PCV2 核酸陽性率分別為34.4%和67.2%。PMWS在我國的形勢也非常嚴峻。王忠田等對北京、天津、廣東、深圳、山東、山西等地的12個規(guī)?；i場豬圓環(huán)病毒2型感染發(fā)病豬群進行了發(fā)病情況調查和PCV－2 病毒檢測，結果發(fā)現其中11個豬場表現為PMWS，1個豬場表現為PDNS。孫泉云等對上海市9個區(qū)縣的54個規(guī)?；呢i場進行了PCVD 的血清學調查，從采集的708份血樣中檢出陽性數為594份，總陽性率為79.7%。從上述的調查可見PCV－2 在我國的規(guī)?；i場中已廣泛存在[6]。從最近幾年的對豬場的PCV2 調查發(fā)現，PCV2 不但沒有得到有效的控制，反而越加的嚴重，所以不得不引起高度重視。

3 豬圓環(huán)病毒2型疫苗市場

3.1 國外疫苗

目前國外主要有兩種類型的PCV－2 疫苗，一種是全病毒滅活苗，另一種是亞單位疫苗。由法國梅里亞動物保健公司研發(fā)的PCV－2 疫苗為礦物油佐劑全病毒滅活苗，該疫苗主要用于母豬的免疫。該產品于2007年9月首次在歐洲獲得批準文號。全病毒圓環(huán)病毒2型滅活疫苗，由于PCV－2 非常難培養(yǎng)、生長慢、難滅活、培養(yǎng)成本高、生產周期長，故大多數動物保健公司采用分子生物技術生產的亞單位疫苗。PCV－2 有11個開放性閱讀框(ORF)，0RF1 編碼兩種復制酶蛋白，負責病毒復制；ORF2 編碼核衣殼蛋白，是PCV－2 主要的免疫原性蛋白；0RF3 負責編碼一種小分子量蛋白，主要參與與PCV－2 誘導的細胞凋亡。目前市場上常用亞單位疫苗就是將PCV－2 基因組中編碼免疫原性蛋白的ORF2 片段插入到昆蟲桿狀病毒中，通過培養(yǎng)昆蟲桿狀病毒而快速、大量的獲得具備免疫原性PCV－2 核衣殼蛋白，然后再將其制備成疫苗。如勃林格殷格翰動物保健（德國）有限公司的FLEX 系列茵格發(fā)豬圓環(huán)病毒疫苗和英特威／先靈葆雅動物保健公司的PCV－2 疫苗。另外一種是嵌合病毒滅活苗，他的原理是將PCV－2 的ORF2 片段置換不致病的PCV－1 中的0RF2 片段，從而獲得了PCV1－2 嵌合病毒，從而獲得具有與PCV－2 類似的免疫原性。如富道動物保健公司研制的PCV－2 疫苗即是采用了這種技術。

3.2 國產疫苗

目前已經注冊生產的國產PCV－2 疫苗均為全病毒滅活疫苗。他們分別是哈爾濱獸醫(yī)研究所用LG株、南京農業(yè)大學用SH株研制而成。由哈爾濱維科生物技術開發(fā)公司、上海海利生物藥品有限公司生產的豬圓環(huán)病毒2型LG株全病毒滅活疫苗；由洛陽普萊柯生物工程有限公司、江蘇南農高科技股份有限公司生產的豬圓環(huán)病毒2型SH株全病毒滅活疫苗。以上全病毒培養(yǎng)物在滅活前的病毒含量約105.5～106.0TCID50/mL。應用的滅活劑為甲醛溶液（福爾馬林）。在國際上應用PK－15 傳代細胞培養(yǎng)PCV2 的最高含量很難超過103.5TCID50/mL，而國內應用微載體細胞懸浮培養(yǎng)技術，使抗原效價提高了100多倍。目前國產疫苗所使用的佐劑都含有一定量的礦物油，如進口雙相復乳佐劑（W/O/W），以及雙重佐劑（hygivant）等。疫苗免疫保護期為3～4月，貯存有效期為12～18月。

3.3 進口疫苗

目前在我國注冊的進口PCV－2 疫苗是由FLEX 系列茵格發(fā)所研發(fā)的，是具有純化蛋白抗原的水性佐劑的亞單位滅活疫苗。其關鍵的PCV－2 蛋白(ORF2)由非致病性桿狀病毒的表達系統(tǒng)產生，經獨有的純化蛋白抗原的水性佐劑的亞單位滅活疫苗。相對于我國使用的礦物油佐劑，水性佐劑要比礦物油佐劑疫苗對機體的刺激性小，副反應小。其關鍵的PCV2 蛋白(ORF2)由非致病性桿狀病毒的表達系統(tǒng)產生，經獨有的純化工藝將ORF2 與非特異性蛋白分離，形成形態(tài)、大小與活病毒相同的、具有高度免疫原性的純化抗原（Purified Circo Antigen,PCATM）?？乖挥眉兹┤芤簻缁?。抗原PCATM 與專利佐劑茵培萊Impran FLEXTM（多聚纖維形成海綿狀基質）交互聯接，具有緩慢釋放抗原的效果。免疫機體后產生快速、高效和持久的免疫反應，非常安全、非常穩(wěn)定，并具有卓越的通針性。每頭份抗原含量用相對效力表達，每頭份相對效力≥1.0。免疫后未見機體不良反應。商品豬群只免疫一針，免疫保護期4個月以上。疫苗保存有效期24個月，該產品是目前所有豬圓環(huán)病毒疫苗中唯一的單針疫苗，具有抗原緩釋效果，應用時不必加強免疫。

4 豬圓環(huán)病毒2型疫苗免疫效果

4.1 國外使用疫苗的情況

美國C Charreyre 等通過對后備母豬以滅活的PCV－2 佐劑疫苗免疫，其子代在3～4周齡進行強毒攻毒獲得保護，受免疫的后備母豬所產仔豬比對照母豬所產仔豬的PCV－2 感染的相關臨床癥狀和病變大幅減少，如果從提高仔豬健康和生產性能來看，這些結果強烈支持母豬應以滅活的油佐劑疫苗進行免疫。C Charreyre 還對仔豬血和糞便中使用定量PCR 檢測PCV－2 DNA 和用免疫組織化學檢測腸系膜淋巴結中PCV－2 抗原表明免疫后備母豬所產仔豬比對照仔豬病毒復制明顯減少，所有結果表明仔豬被動免疫具有一定的效果。F Joisel 等在梅里亞疫苗破格允許使用過程期間，在德國實地評價PCV－2 疫苗(CIRCO.VAC)的效果，在注射用CIRCO.VAC 免疫期間觀察到哺乳仔豬、保育仔豬和育肥豬死的亡率和用藥明顯減少，各種與PCV－2 相關的臨床癥狀明顯減少。法國V Auvigne 等用CIRCO.VAC疫苗免疫預防PCV－2，結果表明免疫前和免疫期間內保育階段的總死亡率明顯降低，育肥階段的死亡率大幅降低。美國C Charreyre 等在實地條件下研究PCV－2 感染豬場用PCV－2 滅活疫苗免疫母豬所產仔豬的PMWS 發(fā)生情況，觀察到免疫母豬所產豬的PMWS 病例明顯降低，免疫組抗體滴度明顯升高，而對照組和以前相同，證明母豬和仔豬的抗體滴度之間明顯相關，在PCV－2 污染的實地環(huán)境中，CIRCO.VAC 對PMWS 引起的死亡率起明顯的預防作用，用PCR 證實在仔豬生命周期的前幾周PCV－2糞便排毒減少，CIRCOVAC 免疫誘導后備母豬和母豬產生高滴度的PCV－2 抗體，這些抗體通過采食初乳而傳給子代。美國T Opriessnig 等的研究得出血清治療方案不能有效控制PCV－2 病毒血癥或相關病變。能證明PCV1－2 嵌合疫苗能有效控制PCV－2病毒血癥和減輕PCV2 引起的淋巴組織病變的嚴重性。美國A Urniza 等研究在PCV－2 歐洲株攻毒前用嵌合的PCV1－2 滅活疫苗免疫豬，在免疫后18～132d 之間，在免疫組和對照組間抗體滴度差異顯著，免疫后任何豬都沒有檢測到PCV－2 病毒血癥，當在3周齡注射1次cPCV1－2 疫苗后，能預防PCV－2 病毒血癥，在免疫后4個月攻毒，也能預防PCV－2 感染引起的典型顯微病變。PCV1－2 疫苗的免疫期至少4個月。菲律賓、意大利等國也做了相關實驗，實驗結果也顯示注射PCV－2 疫苗對仔豬有很好的保護效果[7，8]。

4.2 國內使用疫苗的情況

據銳奇數據中心（鄭楚雄）對我國上千個規(guī)?；B(yǎng)豬場調查發(fā)現，目前在我國規(guī)?；i場使用PCV－2 疫苗的豬場所占比例僅為20%，通過問卷調查發(fā)現大約70%的規(guī)?；i場會考慮將來使用。其中對211個使用圓環(huán)病毒疫苗的豬場調查了解到，FLEX 系列茵格發(fā)豬圓環(huán)病毒疫苗的使用比例達到31%，其次是洛陽普萊柯（23%）、上海海利（19%）、南農高科（5%），還有其他試用產品。而中小型豬場使用PCV－2 疫苗比例相對更低，不到5%，大部分豬場甚至沒有考慮過使用。通過了解發(fā)現，未使用PCV－2 疫苗的豬場的原因是疫苗的價格比較高，并非沒有認識到豬圓環(huán)病毒2型的重要性。所以降低疫苗的生產成本將成為動物保健公司下一步努力的方向。這樣才會降低疫苗的價格，為廣大養(yǎng)殖戶所接受。

調查發(fā)現不管是進口疫苗還是國產疫苗對仔豬的保護都非常理想。張立昌等將120頭仔豬分為三個組分別注射進口疫苗、國產疫苗和對照組。發(fā)現從初始體重來看，國產疫苗組、進口疫苗組和對照組3 組間差異不顯著。從豬群86日齡結束試驗的平均終末體重來看，國產疫苗組、進口疫苗組顯著高于對照組，兩疫苗組間差異不顯著。國產疫苗組和進口疫苗組的增重變異系數極顯著小于對照組，國產疫苗組顯著小于進口疫苗組，表明注射豬圓環(huán)病毒疫苗能極顯著提高豬群均勻度。在提高豬群均勻度上，試驗中國產疫苗的早期效果優(yōu)于進口疫苗[9]。從張立昌實驗表明PCV－2 疫苗對仔豬的增重有明顯的效果。

對江西省南昌市30個較大規(guī)?；i場進行調查，發(fā)現30個豬場中注射豬圓環(huán)病毒2型疫苗的有5個約占17%。調查顯示注射了豬圓環(huán)病毒2型疫苗的豬場死亡率僅為4.6%，之前沒有注射疫苗的年份豬場的死亡率為9%，縱向對比發(fā)現，注射了PCV2 疫苗豬場的死亡率有了明顯的下降。橫向對比，在所調查的30個豬場中沒有注射疫苗的豬場的死亡率為9.2%也明顯高于注射疫苗的豬場。這些結果表明PCV－2 疫苗對豬場的保護效果非常理想。

5 結論

5.1 調查結果顯示豬圓環(huán)病毒2型疫苗對豬的保護效果非常明顯。而且對仔豬的增重非常顯著。

5.2 目前市場上的豬圓環(huán)病毒疫苗既有進口疫苗也有國產疫苗，研究發(fā)現兩類疫苗的防治效果都很理想，而且國產疫苗的防治效果還略微優(yōu)于進口疫苗。

5.3 近些年不少養(yǎng)殖戶已經認識到了豬圓環(huán)病毒病的重要性，進行疫苗防治的豬場也越來越多，但目前從注射疫苗的情況看仍就不夠重視。隨著PCV－2流行逐年上升、流行范圍逐步擴大、各生長階段感染會更加嚴重。PCV－2 對豬場的危害會更大。也會得到廣大養(yǎng)殖戶的高度重視，對PCV－2 的預防將更加重視，目前豬圓環(huán)病毒疫苗已在預防PCVD 上發(fā)揮了顯著的效果。所以對于PCV－2 的疫苗防治將會比較普遍。

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