唐維宏 滕美春 廖紅蘭 張 如 馬健雄

1.廣西壯族自治區(qū)北海市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 北海 536000;2.廣西壯族自治區(qū)婦幼保健醫(yī)院，廣西 南寧 530003; 3.廣西金海堂藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 南寧 530313

穿心蓮為爵床科穿心蓮屬植物Andrographis paniculata (Burm.f.)Nees，以全草或葉入藥，具有清熱解毒、涼血消腫等功效［1］。穿心蓮的主要有效成分為二萜內(nèi)酯類成分，主要包括穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯等［2］。清火梔麥片是我公司常年生產(chǎn)的國家基本藥物品種之一，對其組方成分之一的穿心蓮需求量甚大。為滿足生產(chǎn)需求，我們開展了1000多畝穿心蓮藥材GAP規(guī)范化種植基地試驗。為檢驗藥材質(zhì)量，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)和藥典標(biāo)準(zhǔn)［3～4］，對產(chǎn)自廣西南寧、玉林、梧州GAP基地及普通產(chǎn)地的穿心蓮藥材進(jìn)行對比研究。

1 實驗材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀 (SHIMADZU，SPD－10A VP Plus)、電子天平 (SHIMADZU，AUW120D型)、超聲波清洗儀 (昆山市超聲儀器有限公司，KQ2200型)。

1.2 試劑 甲醇為色譜純;水為重蒸餾水，自制;穿心蓮內(nèi)酯對照品 (批號:110797－200307，中國藥品生物制品檢定所);脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品 (批號:110854－200306，中國藥品生物制品檢定所)

1.3 藥材 穿心蓮，于2011年9月分別采自廣西南寧、玉林、梧州GAP基地及廣西其他普通產(chǎn)地。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及溶液的制備

2.1.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil－ODS C18(250mm× 4.6mm，5μ);流動相為甲醇－水 (65:35);流速為0.8ml/min;檢測波長為225nm(0～15min)用于檢測穿心蓮內(nèi)酯;254nm(15～25min)用于檢測脫水穿心蓮內(nèi)酯;柱溫:25℃。

2.1.2 對照品溶液的制備［4］精密稱取穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含穿心蓮內(nèi)酯0.1146mg，脫水穿心蓮內(nèi)酯0.1037mg的對照品混合溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備［4］取60℃ 下干燥至恒重的穿心蓮藥材粉末 (過四號篩)0.5g，精密秤定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%甲醇25ml，稱定重量，浸泡1h，超聲處理 (功率250W，頻率33KHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用40%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10ml，置中性氧化鋁柱 (200～300目，5g，內(nèi)徑1.5cm)上，用甲醇15ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm有機(jī)相微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2 系統(tǒng)適用性考察 分別取“2.1.2”項下對照品溶液，供試品溶液及陰性對照溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。由圖可見，陰性對照溶液圖譜在穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰位置處無干擾，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰與其他組分峰完全分離;理論塔板數(shù)N(穿心蓮內(nèi)酯)= 2136，N(脫水穿心蓮內(nèi)酯)=3024，符合中國藥典要求［4］。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取“2.1.2”項下對照品溶液1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml、9.0ml，分別置于25ml容量瓶中，加甲醇定容稀釋至刻度，分別進(jìn)樣 (各進(jìn)3針)，以平均峰面積積分值為縱坐標(biāo) (y)，以濃度 (mg/ml)為橫坐標(biāo) (x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線:y= 45087796.68x+37058.3，r=0.9999;脫水穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=44899658.63x－25400.4，r=0.9999。線性范圍:穿心蓮內(nèi)酯為0.11～1.03mg/ml;脫水穿心蓮內(nèi)酯為0.10～0.93mg/ml。

2.4 精密度試驗 精密吸取上述“2.1.2”項下對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件重復(fù)測定5次，每次進(jìn)樣量為20μl，記錄峰面積，RSD(穿心蓮內(nèi)酯)= 0.18%，RSD(脫水穿心蓮內(nèi)酯)=0.35%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗 取同批號 (GAP基地－廣西玉林)樣品6份，按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件重復(fù)測定6次，每次進(jìn)樣量為20μl，外標(biāo)兩點法計算含量，RSD(穿心蓮內(nèi)酯)=0.25%，RSD(脫水穿心蓮內(nèi)酯)=0.28%，說明該方法重復(fù)良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品溶液 (GAP基地－廣西玉林)，分別于0、2、4、6、8、10h各進(jìn)樣20μl，記錄峰面積，RSD(穿心蓮內(nèi)酯)=0.96%，RSD(脫水穿心蓮內(nèi)酯)=0.85%，表明該樣品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的穿心蓮藥材粉末 (GAP基地－廣西玉林)約0.25g，共6份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液適量，混勻后按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，分別進(jìn)樣20μg，計算回收率，結(jié)果見表1、表2，RSD(穿心蓮內(nèi)酯)= 1.32%，RSD(脫水穿心蓮內(nèi)酯)=1.12%，表明該方法回收率較好。

表1 穿心蓮內(nèi)酯加樣回收率試驗結(jié)果

表2 脫水穿心蓮內(nèi)酯加樣回收率試驗結(jié)果

2.8 GAP基地與普通產(chǎn)地穿心蓮樣品含量測定 取來源于廣西南寧、玉林、梧州GAP基地及廣西其他普通產(chǎn)地共10批穿心蓮藥材，按“2.1.3”項方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定含量，結(jié)果見表3，從表中可以看出產(chǎn)自GAP基地的穿心蓮藥材所含穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯總量普遍高于普通產(chǎn)地。

表3 不同產(chǎn)地穿心蓮藥材中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量

3 討論

3.1 檢測波長的確定 分別比較了225nm、254nm及 225nm(0～15min)和254nm(15～25min)條件下穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分段檢測其值最大，故選擇檢測波長為225nm(0～15min)，用于檢測穿心蓮內(nèi)酯，254nm(15～25min)用于檢測脫水穿心蓮內(nèi)酯，所確定的檢測波長與國家藥典［4］收載的數(shù)據(jù)一致。

3.2 流動相的選擇 曾采用乙腈－水 (65:35)、甲醇－水 (60:40)等多種溶劑體系作為流動相，色譜分離效果和峰形均不理想。綜合考慮峰形、分離度、出峰時間等因素，經(jīng)反復(fù)摸索，發(fā)現(xiàn)甲醇－水 (65:35)作為流動相最為理想。

3.3 通過我們的研究證明，產(chǎn)自GAP規(guī)范化種植基地的穿心蓮藥材有效成分普遍高于普通產(chǎn)地，且相對較穩(wěn)定，該法是提高藥材質(zhì)量的有效途徑，值得推廣。

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典 (下冊).［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986.

［2］王國才，胡永美，張曉琪，等.穿心蓮的化學(xué)成分［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2005，36(5):405～407.

［3］謝青，陳珠靈，洪培山，等.反相高效液相色譜法同時測定穿心蓮藥材中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20(5): 1194～1195.

［4］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2010版一部).［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.