劉 元宋志釗

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

HPLC法測(cè)定心葉紫金牛中巖白菜素的含量

劉 元1，2宋志釗1，2

1.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；2.廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530022

目的：建立心葉紫金牛中巖白菜素的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜法，以AQ－C18色譜柱為分離柱，以甲醇－水（22：78）為流動(dòng)相，285nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，柱溫為室溫。結(jié)果：巖白菜素在0.05～0.80μg范圍內(nèi)，峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系（r＝0.9996），平均回收率為102.7%，RSD為2.37%（n＝6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為該藥材含量測(cè)定方法。

心葉紫金牛；巖白菜素；HPLC

心葉紫金牛，又名走馬風(fēng)、紅鋪地毯，為紫金?？谱辖鹋僦参镄娜~紫金牛（Ardisia maclurei Merr.）的全株，是瑤藥 “七十二風(fēng)”中的走馬風(fēng)［1］，具有鎮(zhèn)咳祛痰，活血調(diào)經(jīng)，消腫止痛之功效，用于治療肺結(jié)核，慢性支氣管炎，咳嗽氣喘，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，產(chǎn)后惡露不盡，產(chǎn)后體弱，風(fēng)濕疼痛，跌打損傷等。目前心葉紫金牛尚未有法定標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)其有效成分及藥理學(xué)研究更是尚未涉及，本研究采用高效液相色譜法測(cè)定心葉紫金牛中巖白菜素的含量，為心葉紫金牛的質(zhì)量控制提供了檢測(cè)依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC－20ATVP高效液相色譜儀，SPD－20AVP紫外檢測(cè)儀；威瑪龍色譜工作站；AQ－C18（4.6mm× 250mm，5μm）；KQ－100VDB雙頻數(shù)控超聲清洗儀。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。巖白菜素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)1532－200202）。心葉紫金牛藥材6批：20110428（靖西）、20110527（平南）、20110612（上林）、20110819（金秀）、20110923（昭平），由本院嚴(yán)克儉同志采集；20110721，購(gòu)自金秀縣藥材市場(chǎng)。以上樣品均由本院中藥所鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：AQ－C18色譜柱（4.6mm× 250mm，5mm）；檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm；流動(dòng)相：甲醇－水（22：78）；流速：1.0mL/min；柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按巖白菜素峰計(jì)算不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取巖白菜素對(duì)照品10.0mg，置50mL量瓶中用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成200μg/mL對(duì)照品溶液，備用。精密吸取上述對(duì)照品溶液1.0mL，置10mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得（20.0μg/mL）。

2.3 供試品溶液的制備 取本品藥材粉末（過(guò)40目篩）0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相25mL，稱(chēng)定重量，超聲提取30min（90W，45KHz），放冷，再稱(chēng)定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足缺失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 精密稱(chēng)取巖白菜素對(duì)照品10.0mg，置50mL量瓶中用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成200μg/mL對(duì)照品溶液，備用。分別精密吸取200μg/mL巖白菜素對(duì)照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，分別置10m l量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10μL，測(cè)定。以巖白菜素對(duì)照品進(jìn)樣量μg為橫坐標(biāo) （X），峰面積積分值為縱坐標(biāo) （Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y＝990672X＋6554，r＝0.9996。結(jié)果表明：巖白菜素進(jìn)樣量在0.05～0.80μg之間與峰面積積分值線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別吸取同一供試品溶液，進(jìn)樣6次，依次測(cè)定，即得。測(cè)得供試品RSD為1.15%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)（20110721）樣品，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測(cè)定，即得。結(jié)果測(cè)得巖白菜素含量為1.96mg/g，RSD＝1.60%（n＝6）。表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于0、4、8、12、16h進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品中巖白菜素含量的RSD為1.70%，表明供試品溶液在16h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已測(cè)知含量（1.96mg/g，批號(hào)20110721）的供試品0.25g，精密稱(chēng)定，精密加入巖白菜素對(duì)照品溶液（200μg/m L）2.5m L，精密加入流動(dòng)相22.5m L，按供試液制備項(xiàng)下的方法制備。結(jié)果巖白菜素平均回收率為99.0%，RSD為2.37%（n＝6），結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品測(cè)定 按供試液的制備及檢測(cè)方法，測(cè)定6批心葉紫金牛藥材中巖白菜素含量，結(jié)果見(jiàn)表2。巖白菜素含量（mg/g）在0.88～2.31之間。

表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)量結(jié)果（n＝6）

表2 6批心葉紫金牛藥材中巖白菜素測(cè)量結(jié)果

3 討論

3.1 心葉紫金牛的化學(xué)成分未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)，但同科同屬植物翼莖白粉藤中含有巖白菜素［2］，對(duì)心葉紫金牛中巖白菜素的含量測(cè)定方法進(jìn)行初步研究，經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，多批心葉紫金牛藥材中均含有巖白菜素。因此探索心葉紫金牛中指標(biāo)成分巖白菜素的含量測(cè)定方法，可作為控制本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)之一。

3.2 對(duì)巖白菜素對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果其在285nm處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為285nm。參照《中國(guó)藥典》2010年版一部里有關(guān)巖白菜素含量測(cè)定方法，以甲醇－水為流動(dòng)相，考察多個(gè)比例，最后確定甲醇－水（22：78）的比例較為適合。

3.3 采用超聲處理30min，加熱回流1h，索氏提取2h進(jìn)行提取方法考察，三者結(jié)果相差不大，但超聲提取更簡(jiǎn)便、快捷，故采用超聲提取法。采用甲醇、水、流動(dòng)相作提取溶劑進(jìn)行考察，用水提取所得含量最低，甲醇、流動(dòng)相提取所得含量較高，但是甲醇提取樣品中巖白菜素峰形差，故采用流動(dòng)相作為提取溶劑。以超聲提取15、30、45min進(jìn)行提取時(shí)間考察，超聲提取15min，測(cè)得結(jié)果較低，超聲提取30～45min，兩者無(wú)明顯差別，故超聲提取時(shí)間定為30min。

［1］戴斌，李釗東，丘翠嫦，等. “虎牛鉆風(fēng)”類(lèi)傳統(tǒng)瑤藥的調(diào)查研究［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，1998，31（2）：28－34.

［2］葉君勇，徐燕云，吳曉梅.紫金牛屬植物巖白菜素研究現(xiàn)狀及開(kāi)發(fā)利用［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，15（21）：160－162.

Determination of Bergenin in Ardisia Maclurei by HPLC

LIU Yuan1，2，SONG Zhi－zhao1，2
1.Guangxi Institute of Chinese Medicine＆Pharmaceutical Scince，Nanning，Guangxi530022；2.Guangxi Key Laboratory of traditional Chinesemedicine quality standards，Nanning，Guangxi530022

Objective：To assay the content of Bergenin in Ardisia Maclurei by HPLC.Method：The AQ－C18（4.6mm× 250mm，5μm）column was used，the mobile phase consisted of Methanol－water（22：78），the detection wave length was 285nm and the column temperature was room temperature.Resuilts：Linearity of Quercitr was good at0.05～0.80μg（r＝0.9996）.The average recovery of buddleodide was99.0%with RSD less than 2.37%（n＝6）.Conclution：The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination of Bergenin in Ardisia Maclurei.

Ardisia Maclurei；Bergenin；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）14－0022－02

2013.05.08）

廣西科技攻關(guān)項(xiàng)目（桂科攻11107010－3－4）。

劉元，女，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事中藥藥理學(xué)研究與新藥開(kāi)發(fā)。E－mail：liuyuan0821＠vip.163.com