梁新紅，孫俊良*，張永帥

(河南科技學(xué)院食品學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

響應(yīng)面法優(yōu)化甘薯果膠草酸鹽提取工藝

梁新紅，孫俊良*，張永帥

(河南科技學(xué)院食品學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

以分離淀粉后的甘薯渣為原料，研究草酸鹽法提取甘薯果膠的工藝條件。以草酸鹽為提取劑，利用單因素和響應(yīng)面法對(duì)甘薯果膠提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。響應(yīng)面試驗(yàn)分析結(jié)果表明：甘薯果膠最適提取條件為溫度95.07℃、時(shí)間1.93h、pH5.8、草酸銨質(zhì)量濃度為5.0mg/mL，此條件下，甘薯果膠理論上可以達(dá)到最高提取率11.36%，純度79.68%。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中提取率為11.19%，純度為79.95%，與理論值較為接近，表明數(shù)學(xué)模型對(duì)優(yōu)化甘薯渣果膠提取工藝是可行的。

甘薯果膠；草酸鹽提取；響應(yīng)面分析

果膠是一類富含半乳糖醛酸的多糖的總稱，果膠作為可溶性膳食纖維，具有抗癌、治療糖尿病、抗腹瀉等功效；在食品工業(yè)中，果膠是主要的穩(wěn)定劑和膠凝劑[1-4]。研究[5]表明，干的甘薯渣中含10%～30%的果膠物質(zhì)，甘薯渣是甘薯淀粉生產(chǎn)中的副產(chǎn)物，通常被作為飼料簡(jiǎn)單利用或當(dāng)作廢物丟棄，造成資源的浪費(fèi)和環(huán)境污染[6]。甘薯渣是提取果膠的良好材料。

目前國(guó)內(nèi)外食品工業(yè)用果膠主要從蘋果渣和柑橘渣中提取，常用的幾種提取果膠方法有酸解法[7-10]、離子交換樹(shù)脂法[11]、鹽析法[12]、微波法[13]等。有研究者[8,14-15]利用酸法從甘薯中提取果膠，并對(duì)果膠的物化特性、乳化特性等進(jìn)行了研究；孫俊良等[16-17]對(duì)酸提法果膠進(jìn)行了純化，并對(duì)酸提法果膠與蘋果果膠進(jìn)行了物化特性比較，發(fā)現(xiàn)酸提果膠的黏度、酯化度和凝膠度等物化特性略低于蘋果果膠。草酸鹽中草酸根離子可以和果膠酸鈣中鈣離子螯合生成可溶性鹽，增加果膠溶解性。王媛莉等[18]應(yīng)用草酸鹽法提取豆腐柴中果膠，取得了較高的提取率，而草酸鹽在甘薯果膠的提取中尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究以提取淀粉后的甘薯渣為原料，利用單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)法對(duì)甘薯果膠草酸鹽法提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)甘薯渣資源利用具有理論及實(shí)踐指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甘薯為‘徐薯18號(hào)’，采自河南科技學(xué)院生命科技學(xué)院試驗(yàn)田。

標(biāo)準(zhǔn)半乳糖醛酸(分析純) 美國(guó)Sigma-Alorich公司；咔唑(化學(xué)純) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限責(zé)任公司；高溫α-淀粉酶(20000U/mL)、糖化酶(10萬(wàn)U/mL)、普魯蘭酶(2000U/mL) 鄭州市福源生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Alphal-4LSC冷凍干燥機(jī) 德國(guó)Christ公司；RC5C型冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sorvall Znstruments公司；WFJ 7200型分光光度計(jì) 尤尼柯(上海)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 甘薯渣的制備[19]

取新鮮甘薯500g，洗凈，用粉碎機(jī)打碎，40目篩過(guò)濾，對(duì)濾液進(jìn)行淀粉分離，濾渣經(jīng)清水清洗4次，清洗后的薯渣40℃烘干。將甘薯渣稱質(zhì)量，按照渣:水為1:15加水，調(diào)整pH6.0，經(jīng)高溫α-淀粉酶在90℃酶解30min；調(diào)整pH4.5，然后依次加入糖化酶、普魯蘭酶，在60℃保溫酶解180min，去掉上清液，水洗3次，烘干，備用。

1.3.2 甘薯渣提取果膠工藝

甘薯渣提取果膠工藝流程：甘薯渣→加水→加入提取劑提取→加熱提取→紗布過(guò)濾→過(guò)濾液→離心→過(guò)濾清液→乙醇沉淀→離心→沉淀物→冷凍干燥→成品。

操作步驟：稱取一定量的甘薯渣(以干渣計(jì))，按照料液比1:50(g/mL)加入蒸餾水，然后加入提取劑草酸銨，水浴加熱一定時(shí)間后，用濾布趁熱過(guò)濾，收集濾液。濾液在6000r/min離心10min，取上清液加入乙醇(濾液中乙醇含量不低于55%(V/V))，充分混勻，靜置2h，在6000r/min離心10min，棄去上清液，沉淀進(jìn)行冷凍干燥，即為果膠成品。其中提取液pH值、提取溫度和提取時(shí)間和草酸銨質(zhì)量濃度參數(shù)按照實(shí)驗(yàn)要求設(shè)定。

1.3.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用單因素試驗(yàn)分別考察提取液pH值、提取溫度、提取時(shí)間和草酸鹽質(zhì)量濃度對(duì)甘薯果膠提取率的影響；在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)在不同參數(shù)條件對(duì)甘薯果膠進(jìn)行提取，應(yīng)用Design Expert 7.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3.4 指標(biāo)測(cè)定

1.3.4.1 甘薯果膠提取率的測(cè)定

將制取的果膠混勻之后取一部分放入稱量皿中，記總質(zhì)量為m1，在干燥箱中干燥至恒質(zhì)量之后總質(zhì)量為m2，稱量皿的質(zhì)量為m，則水分含量(X)按式(1)計(jì)算，果膠提取率按式(2)計(jì)算。

1.3.4.2 甘薯果膠純度的測(cè)定

果膠純度的測(cè)定采用咔唑比色法。參考方法NY 82.11—1988《果汁測(cè)定方法：果膠的測(cè)定》[20]。果膠的主要水解產(chǎn)物半乳糖醛酸在強(qiáng)酸中與咔唑發(fā)生縮合反應(yīng)，生成紫色物質(zhì)，然后對(duì)其紫紅色溶液進(jìn)行比色定量，其吸光度(y)與半乳糖醛酸質(zhì)量濃度(x，μg/mL)呈線性關(guān)系，測(cè)得半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.0102x-0.0059(R=0.9987)，然后進(jìn)行果膠溶液中半乳糖醛酸含量的測(cè)定。測(cè)定結(jié)果根據(jù)半乳糖醛酸含量與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出稀釋后果膠溶液中半乳糖醛酸的含量，再乘以稀釋倍數(shù)得到果膠溶液中半乳糖醛酸含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液pH值對(duì)甘薯果膠提取效果的影響

圖1 pH值對(duì)果膠提取率的影響Fig.1 Effect of pH on the yield of sweet potato pectin

在料液比1:50、溫度90℃、草酸銨質(zhì)量濃度5.0mg/mL、提取時(shí)間1.5h條件下，考察提取液pH值為3、5、7、9時(shí)對(duì)甘薯果膠提取效果的影響。由圖1可知，隨著pH值的不斷增加，果膠提取率也隨之逐漸升高，當(dāng)pH值為7和9時(shí)，草酸胺提取果膠提取率分別為(7.87±0.18)%和(8.42±0.28)%；果膠純度在pH7時(shí)達(dá)到最高(67.21±2.71)%，隨著pH值的升高，果膠純度降低，當(dāng)pH值為9時(shí)，果膠純度降至51.19%，果膠純度降低可能是因?yàn)樵趬A性條件下提取果膠，果膠中半乳糖醛酸含量較低，鼠李糖、半乳糖和阿拉伯糖等中性糖含量較高，特別是阿拉伯糖含量高。Dourado等[21]在杏仁中提取果膠，也得到了相同的結(jié)果。因此，草酸銨提取果膠最佳pH值為7。

2.2 提取溫度對(duì)甘薯果膠提取效果的影響

圖2 提取溫度對(duì)果膠提取率的影響Fig.2 Effect of extraction temperature on the yield of sweet potato pectin

在提取時(shí)間1.5h、草酸銨質(zhì)量濃度5.0mg/mL、pH7條件下，考察提取液溫度對(duì)果膠提取的影響。由圖2可知，隨著提取溫度的升高，果膠提取率和純度亦隨之增大，當(dāng)提取溫度為90℃時(shí)，果膠提取率和純度分別達(dá)到分別為(10.67±0.43)%和(79.21±3.16)%；隨著溫度升高到100℃，果膠提取率降至(70.01±3.77)%，而果膠純度沒(méi)有明顯變化，經(jīng)方差顯著性分析，溫度在90℃和100℃時(shí)，果膠純度在P＜0.05水平?jīng)]有顯著性差異，這可能是因?yàn)殡S著溫度的升高，果膠側(cè)鏈上的中性糖部分水解而使提取率降低；另外也有可能是在高溫條件下，糖類、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，乙醇沉淀果膠時(shí)，與果膠一起發(fā)生沉淀的雜質(zhì)量減少而使提取率降低。其具體提取率降低原因有待于進(jìn)一步研究。因此，提取液最佳溫度選擇90℃。

2.3 提取時(shí)間對(duì)甘薯果膠提取效果的影響

圖3 提取時(shí)間對(duì)果膠提取率的影響Fig.3 Effect of extraction time on the yield of sweet potato pectin

在料液比1:50、提取溫度90℃、草酸銨質(zhì)量濃度5.0mg/mL、pH7.0條件下，考察果膠提取時(shí)間分別為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h時(shí)對(duì)提取效果的影響。由圖3可知，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，果膠提取率逐漸升高，當(dāng)提取時(shí)間為2.0h時(shí)，果膠提取率達(dá)到(11.99±0.38)%，提取時(shí)間達(dá)到3h時(shí)，果膠提取率為(12.37±0.53)%，經(jīng)方差顯著性分析，提取時(shí)間為2.0、2.5h和3.0h時(shí)，果膠提取率在P＜0.05水平上無(wú)顯著差異；果膠純度在提取時(shí)間為2.0h時(shí)達(dá)到最大值(79.55±2.93)%，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，果膠純度逐漸下降，提取時(shí)間達(dá)到3.0h時(shí)，果膠純度降至(58.96±3.57)%，這可能是因?yàn)楣z的耐熱性能較差，在高溫條件下提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，果膠發(fā)生水解，導(dǎo)致半乳糖醛酸含量下降。故可選2.0h為最佳提取時(shí)間。

2.4 草酸鹽質(zhì)量濃度對(duì)甘薯果膠提取效果的影響

在料液比1:50、提取溫度90℃、提取時(shí)間2.0h、pH7條件下，考察草酸鹽質(zhì)量濃度為0、2.5、5.0、7.5mg/mL對(duì)果膠提取效果的影響。由圖4可知，提取液的質(zhì)量濃度對(duì)果膠的提取率及純度均有影響。隨著草酸銨質(zhì)量濃度的增加，甘薯果膠的得率也隨之逐漸增大，當(dāng)草酸鹽質(zhì)量濃度為5.0mg/mL時(shí)，果膠提取率為(11.99±0.38)%，當(dāng)鹽質(zhì)量濃度增加至7.5mg/mL時(shí)，果膠提取率達(dá)到最大值(12.26±0.49)%；而果膠純度在草酸鹽質(zhì)量濃度為5.0mg/mL時(shí)達(dá)到最大值(79.55±2.93)%，隨著草酸鹽質(zhì)量濃度的增加，果膠純度下降，這可能是因?yàn)椴菟徜@質(zhì)量濃度過(guò)高，不利于銨離子與細(xì)胞壁中鈣離子或其他金屬離子形成交聯(lián)結(jié)構(gòu)，因而果膠不易被游離出來(lái)。綜合果膠提取率和純度二者因素，草酸銨的最佳質(zhì)量濃度為5.0mg/mL。

圖4 提取劑質(zhì)量濃度對(duì)果膠提取率的影響Fig.4 Effect of ammonium oxalate concentration on the yield of sweet potato pectin

2.5 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化果膠提取工藝參數(shù)

根據(jù)前期單因素試驗(yàn)結(jié)果，綜合比較鹽提和酸提，采用鹽提取果膠的最佳條件：pH7.0、提取溫度90℃、提取時(shí)間2h、草酸銨質(zhì)量濃度5.0mg/mL。以果膠提取率為指標(biāo)，采用Design Expert 7.0軟件設(shè)計(jì)進(jìn)行了21次試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 果膠提取響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table1 Design and results for the optimization of pectin extraction

根據(jù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)，用Desgin Expert 7.1.3程序進(jìn)行二次多項(xiàng)式回歸，回歸模型方程為：

R1=－180.9835191＋3.740122611A－1.376671975B＋3.894984076C＋0.201457006D＋0.03125AB－0.0015AC－0.000825AD－0.0675BC＋0.021BD＋0.02275CD－0.01982707A2－0.437707006B2－0.397707006C2－0.00307707D2

R2=－1857.530094＋31.33908201A－26.49759554B＋60.89021338C＋16.14910111D＋0.722375AB＋0.391375AC－0.2508375AD－2.38625BC－0.142375BD＋0.165125CD－0.129287261A2－9.038726115B2－8.373726115C2＋0.061662739D2

表2為響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果的方差分析，其中提取溫度、時(shí)間對(duì)果膠提取率有顯著影響，而在試驗(yàn)設(shè)定的范圍內(nèi)pH值和草酸銨質(zhì)量濃度的影響并不明顯。

對(duì)回歸模型進(jìn)行方差分析(表2)，回歸檢驗(yàn)F=156.78，差異極顯著(P＜0.01)，失擬檢驗(yàn)F=0.13，不顯著，模型具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明模型與實(shí)際情況擬和很好。同時(shí)，方差分析表明，各因素間存在一定的交互效應(yīng)。

表2 回歸模型的方差分析表Table2 Analysis of variance (ANOVA) for the regression model

根據(jù)響應(yīng)面分析，當(dāng)提取條件為溫度95.07℃、時(shí)間1.93h、pH5.8、草酸銨質(zhì)量濃度5.0mg/mL時(shí)，理論上可以達(dá)到最高提取率11.36%，純度79.68%。用此最優(yōu)條件做驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，從甘薯渣中提取果膠得到提取率為11.19%，純度為79.95%，與理論值較為接近，表明數(shù)學(xué)模型對(duì)優(yōu)化甘薯渣果膠提取工藝是可行的。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)探討了提取條件對(duì)甘薯果膠提取率及純度的影響，先后進(jìn)行了單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)。單因素試驗(yàn)結(jié)果表明，以草酸銨為提取劑時(shí)，提取液最佳pH7、最佳提取溫度90℃、最佳提取時(shí)間2.0h、草酸銨最佳質(zhì)量濃度5.0mg/mL。根據(jù)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果，確定甘薯果膠最適提取條件為提取溫度95.07℃、提取時(shí)間1.93h、pH5.8、草酸銨質(zhì)量濃度5.0mg/mL，甘薯果膠理論上可以達(dá)到最高提取率11.36%，純度79.68%。實(shí)際提取率為11.19%，純度為79.95%，與理論值較為接近，表明數(shù)學(xué)模型對(duì)優(yōu)化甘薯渣果膠提取工藝是可行的。

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Optimization of Ammonium Oxalate Extraction of Pectin from Sweet Potato by Response Surface Methodology

LIANG Xin-hong，SUN Jun-liang*，ZHANG Yong-shuai
(College of Food, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, China)

Response surface methodology was applied to establish the optimal conditions for pectin extraction from sweet potato residues left after starch extraction using ammonium oxalate as the extraction solvent. Extraction at 95.07 ℃ for 1.93 h with 5.0 mg/mL ammonium oxalate at pH 5.8 proved optimal. The maximum predicted yield and purity of pectin under the optimized conditions were respectively 11.36% and 76.68% versus 11.19% and 79.95% obtained in validation experiments. This close agreement between the experimental and model predicted results indicates the mathematical model is valid for predicting the extraction of pectin from sweet potato residues.

sweet potato pectin；ammonium oxalate extraction；response surface methodology

TS202.3

A

1002-6630(2013)18-0061-04

10.7506/spkx1002-6630-201318013

2013-04-08

河南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(122102110037)；國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(311641/C200101)；河南科技學(xué)院博士基金項(xiàng)目(08001)

梁新紅(1971—)，女，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail：liangxinhong2005@163.com

*通信作者：孫俊良(1964—)，男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail：sjl338@163.com