吳少明，傅武勝*，傅海慶，方勤美，華 娟

(1.福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建省疾病預(yù)防控制中心，福建 福州 350001；2.福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350002；3.福建農(nóng)林大學(xué)金山學(xué)院，福建 福州 350002；4.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，福建 福州 350003；5.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002)

多同位素內(nèi)標(biāo)氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定食品中4種氯丙醇含量

吳少明1,2，傅武勝1,*，傅海慶3，方勤美4，華 娟5

(1.福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建省疾病預(yù)防控制中心，福建 福州 350001；2.福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350002；3.福建農(nóng)林大學(xué)金山學(xué)院，福建 福州 350002；4.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，福建 福州 350003；5.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350002)

采用多同位素內(nèi)標(biāo)法，結(jié)合七氟丁酰基咪唑(HFBI)衍生化的氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)，建立了食品中4種氯丙醇含量的檢測(cè)方法。對(duì)比了不同來(lái)源HFBI衍生試劑的作用性能，對(duì)定量?jī)?nèi)標(biāo)物和校正標(biāo)準(zhǔn)的選擇進(jìn)行了比較。結(jié)果表明：僅用2種同位素內(nèi)標(biāo)(3-氯-1,2-丙二醇-d5(或2-氯-1,3-丙二醇-d5)和1,3-二氯-2-丙醇-d5)校正，同樣可達(dá)到準(zhǔn)確測(cè)定食品中4種氯丙醇含量的要求；若采用3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)為標(biāo)準(zhǔn)物定量測(cè)定2-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)時(shí)，所得2-MCPD結(jié)果偏低，僅為以2-MCPD為標(biāo)準(zhǔn)物定量結(jié)果(真實(shí)值)的52.1%～77.8%。在最佳條件下進(jìn)行了方法學(xué)指標(biāo)的系統(tǒng)驗(yàn)證。4種氯丙醇的最低檢出限為2.5～10μg/kg；在100～2000ng范圍內(nèi)，氯丙醇與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值和質(zhì)量呈線性關(guān)系(R2＞0.9990)。以醬油和方便面調(diào)料粉為基質(zhì)，進(jìn)行100、200、400μg/kg三個(gè)水平的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，4種氯丙醇的回收率均值為90.1%～107%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.37%～10.4%(n=6)，均滿足痕量分析的要求。

食品；氯丙醇；基質(zhì)分散固相萃取法；同位素稀釋技術(shù)；氣相色譜-質(zhì)譜法

氯丙醇是某些食品中存在的一類化學(xué)污染物[1]，主要包括單氯取代的3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)與2-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)和雙氯取代的1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)與2,3-二氯-1-丙醇(2,3-DCP)。3-MCPD具有生殖毒性和腎臟毒性，為潛在致癌物，1,3-DCP為動(dòng)物遺傳毒性致癌物[2]，JECFA制定了3-MCPD的每日最大耐受劑量(PMTDI)為2μg/(kg bw?d)[3]，尚無(wú)其他3種氯丙醇的PMTDI值。氯丙醇為酸水解植物蛋白(HVP)生產(chǎn)中容易形成的污染物[4]，配制醬油、方便面調(diào)料粉等食品通常添加HVP以增加產(chǎn)品鮮味，由此造成這些食品氯丙醇的污染[5]。許多國(guó)家已對(duì)HVP、醬油等食品制定了氯丙醇的限量標(biāo)準(zhǔn)。2012年開始，我國(guó)規(guī)定固態(tài)、液態(tài)調(diào)味品(含配制醬油等) 3-MCPD須分別低于1.0、0.4mg/kg[6]，歐盟甚至要求低于0.02mg/kg[7]，這對(duì)氯丙醇的檢測(cè)提出了很高的要求。

目前的檢測(cè)方法主要針對(duì)氯丙醇中的3-MCPD和(或)1,3-DCP[8-19]，國(guó)際公認(rèn)的方法為穩(wěn)定性同位素稀釋氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[4,8,10,15,19]。但食品中可能還伴隨著另外兩種氯丙醇(2-MCPD和2,3-DCP)的存在[20]，由于2-MCPD與3-MCPD、1,3-DCP與2,3-DCP互為同分異構(gòu)體，因此它們可能具有相似的毒性作用，這使得研究同時(shí)準(zhǔn)確測(cè)定4種氯丙醇的方法成為必要。而目前僅見少量文獻(xiàn)[21-22]報(bào)道以d5-3-MCPD、d5-1,3-DCP為校正內(nèi)標(biāo)，同時(shí)測(cè)定醬油等食品中的4種氯丙醇。但氯丙醇的化學(xué)性質(zhì)存在差異，僅用2種內(nèi)標(biāo)是否可準(zhǔn)確測(cè)定4種氯丙醇，還需進(jìn)一步驗(yàn)證。此外，以3-MCPD為標(biāo)準(zhǔn)物測(cè)定2-MCPD的含量可能不準(zhǔn)確[23]。因此，本實(shí)驗(yàn)以4種氯丙醇各自對(duì)應(yīng)的同位素(4種)為內(nèi)標(biāo)，建立同時(shí)測(cè)定食品中4種氯丙醇的方法，同時(shí)評(píng)估了內(nèi)標(biāo)物和標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性等指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

釀造醬油和方便面調(diào)料粉購(gòu)自福州當(dāng)?shù)爻小?/p>

3-氯-1,2-丙二醇(CAS號(hào)：96-24-2)、2,3-二氯-1-丙醇(CAS號(hào)：616-23-9)、3-氯-1,2-丙二醇-d5(同位素純度97%)、1,3-二氯-2-丙醇-d5(同位素純度98%)、2,3-二氯-1-丙醇-d5(同位素純度98%) 美國(guó)Aldrich公司；2-氯-1,3-丙二醇(CAS號(hào)：497-04-1)、2-氯-1,3-丙二醇-d5(同位素純度98%) 加拿大TRC公司；雙氯取代的1,3-二氯-2-丙醇(CAS號(hào)：96-23-1) 德國(guó)Fluka公司；氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉(560℃烘烤6h后使用)、無(wú)水乙醚(經(jīng)重蒸餾后使用)(均為分析純) 中國(guó)國(guó)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司；硅藻土(編號(hào)29111) 美國(guó)Agilent公司；正己烷(色譜純) 美國(guó)Fisher公司；異辛烷(色譜純) 英國(guó)Pooled公司；七氟丁酰基咪唑(HFBI)購(gòu)自Regis、TCI、Addams、Sigma、Alfa等公司以及實(shí)驗(yàn)室合成；聚丙烯固相萃取柱(45mL/支)福州勤鵬生物技術(shù)公司。

1.2 儀器與設(shè)備

3800型氣相色譜儀和Saturn2000型質(zhì)譜儀 美國(guó)Varian公司；DB-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mm，0.25μm)美國(guó)Agilent公司；G-560E型漩渦混合器 美國(guó)Scientific Industries公司；KQ-500B型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器公司；DHG-9123A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海精宏試驗(yàn)設(shè)備公司；DFY40型搖擺式高速萬(wàn)能粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械公司；TM-0912P型馬弗爐 北京盈安美誠(chéng)科學(xué)儀器公司；CP225D型電子天平(準(zhǔn)確至0.01mg，用于稱量標(biāo)準(zhǔn)品) 德國(guó)Sartorius公司；YP202型電子天平 上海精密科學(xué)儀器公司；EYELA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 日本東京理化公司；0.5mL氣密針 美國(guó)Hamilton公司；移液器4把(最大量程分別為20、100、200μL和1000μL) 法國(guó)Gilson公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取0.5～1.0mg各氯丙醇及內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品于8支10mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解、定容至刻度線，充分混勻得到質(zhì)量濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，于－24℃冰箱中放置。

標(biāo)準(zhǔn)中間液：取適量上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于同一支10mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，得到質(zhì)量濃度為20μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。按照同樣方法，配制混合內(nèi)標(biāo)中間液。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量上述標(biāo)準(zhǔn)中間液用正己烷稀釋，配制4.0?g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；同樣取上述內(nèi)標(biāo)中間液適量，以正己烷稀釋定容至10mL，得到4.0?g/mL的混合內(nèi)標(biāo)工作液。

標(biāo)準(zhǔn)系列：分別取上述標(biāo)準(zhǔn)工作液25、50、125、250、500μL于5支5mL玻璃試管中，并加入75μL混合內(nèi)標(biāo)工作液(4.0?g/mL)，然后補(bǔ)加正己烷至體積約為1.0mL，制得氯丙醇質(zhì)量濃度為100、200、500、1000、2000ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。此系列溶液經(jīng)HFBI衍生后，以GC-MS進(jìn)樣分析。

1.3.2 樣品前處理

1.3.2.1 加入內(nèi)標(biāo)

醬油等液體樣品：稱取3.0g樣品于50mL塑料離心管中，加入75μL混合內(nèi)標(biāo)溶液(4.0?g/mL)，超聲5min，混勻后待凈化用。調(diào)料粉樣品：稱取1.0g高速粉碎均勻的樣品于15mL塑料離心管中，加入75μL混合內(nèi)標(biāo)溶液(4.0?g/mL)，然后加入4.0g飽和氯化鈉溶液，超聲5min，使粉末充分分散于液體中，混勻后以5000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，將上層溶液轉(zhuǎn)移至50mL塑料離心管中，待凈化用。

1.3.2.2 基質(zhì)分散固相萃取凈化

于上述溶液中加入3.0g硅藻土，拌勻后，將其全部轉(zhuǎn)入預(yù)先裝有1.5g硅藻土的固相萃取柱中。先以30mL正己烷淋洗，棄去淋洗液，再以80mL重蒸無(wú)水乙醚分3～4次加入萃取柱中，洗脫氯丙醇，流速不超過(guò)8mL/min，洗脫液以預(yù)先裝有約10g無(wú)水硫酸鈉的250mL三角瓶收集。洗脫結(jié)束后，每隔10min振搖三角瓶，以打散結(jié)塊的硫酸鈉，最大程度脫除洗脫液中的水分。

1.3.2.3 濃縮

將上述經(jīng)充分脫水的洗脫液轉(zhuǎn)入250mL雞心瓶中，再以10mL正己烷洗滌無(wú)水硫酸鈉層，洗液一并轉(zhuǎn)入雞心瓶中。溶液減壓濃縮至約0.5mL，并小心將之轉(zhuǎn)移至5.0mL磨口玻璃刻度試管中，再用少量正己烷洗滌雞心瓶2～3次，洗液一并轉(zhuǎn)入試管中，至體積約為1.2mL，供衍生用。

1.3.2.4 衍生

于上述盛有濃縮液或標(biāo)準(zhǔn)液的刻度試管中，快速加入50μL HFBI衍生試劑，迅速蓋上磨口塞并渦旋混勻，于75℃恒溫烘箱中保溫15min后，逐一檢查每一試管，如發(fā)現(xiàn)試管內(nèi)液體少于0.8mL，則補(bǔ)加正己烷至1.2mL，并在75℃條件下繼續(xù)加熱15min。反應(yīng)結(jié)束后，取出試管，待其冷卻至室溫后，用異辛烷定容至1.0mL，并加入2mL飽和氯化鈉溶液，充分渦旋，使得下層液體澄清。靜置后，取上層液體于事先裝有約0.3g無(wú)水硫酸鈉的2mL進(jìn)樣瓶中，供GC-MS分析。

1.3.3 GC-MS分析條件

氣相色譜條件：DB-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mm，0.25μm)；進(jìn)樣口溫度：280℃；程序升溫條件：50℃保持1min，再以2℃/min的速度升至78℃，最后以30℃/min的速度升至300℃，保持5min；載氣：高純氦，流速0.8mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1μL。質(zhì)譜條件：電子電離(electron ionization，EI)源；電子倍增器增益：＋250V；燈絲電流：100μA；阱溫：230℃；傳輸線溫度：250℃；歧盒溫度：50℃；溶劑延遲：3min；質(zhì)譜采集時(shí)間：3～29min；掃描質(zhì)量數(shù)范圍：m/z 90～300；掃描速率：0.65s/次。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量離子的選擇

將質(zhì)量為5000ng的氯丙醇及其同位素內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)液?jiǎn)为?dú)衍生，對(duì)衍生物進(jìn)行全掃描。3-MCPD、2-MCPD的m/z 253的靈敏度最高，m/z 289、m/z 453次之，文獻(xiàn)大多采用m/z 253定量[10,13,15-17]3-MCPD，但在本體系中，以m/z 253得到的提取離子色譜圖，在待測(cè)目標(biāo)物處有明顯的干擾峰，因此選擇m/z 289作為3-MCPD、2-MCPD的定量離子；d5-3-MCPD與d5-2-MCPD均采用m/z 257；1,3-DCP采用m/z (275＋277)靈敏度明顯優(yōu)于文獻(xiàn)[10,13,15-17]的m/z 275定量，對(duì)于其同位素內(nèi)標(biāo)d5-1,3-DCP，則采用m/z (278＋280)定量；2,3-DCP以m/z (75＋77)同樣優(yōu)于文獻(xiàn)[15]的m/z 75，d5-2,3-DCP則采用m/z 79。表1列舉了氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)的監(jiān)測(cè)離子和定量離子，提取離子色譜圖見圖1。

圖1 氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)衍生物提取離子色譜圖Fig.1 Extracted ion chromatograms of the derivatives of chloropropanols and internal standards

表1 氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)衍生物的監(jiān)測(cè)離子和定量離子Table1 Quantitation and monitoring ions for the derivatives of chloropropanols and internal standards

2.2 HFBI衍生試劑性能對(duì)比

表2 不同品牌HFBI衍生后氯丙醇峰面積的對(duì)比((n=3)Table2 Comparison of the peak areas of chloropropanols and internal standards after derivatized by different brands of HFBI (

以醬油為基質(zhì)，加入氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)液和對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)混合液各600ng，按1.3.2節(jié)進(jìn)行預(yù)處理，洗脫液濃縮至約7mL。準(zhǔn)確移取6份于編號(hào)的5mL刻度試管中，每份體積為1.0mL，分別加入50μL不同品牌的HFBI衍生試劑，衍生液用GC-MS進(jìn)樣分析，每個(gè)條件重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，結(jié)果見表2。對(duì)比6種品牌HFBI的衍生作用，同一目標(biāo)物質(zhì)的峰面積(響應(yīng))相差不大，3次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在1.1%～6.1%之間，但實(shí)驗(yàn)室合成HFBI產(chǎn)品與TCI公司HFBI衍生時(shí)目標(biāo)物響應(yīng)稍低。比較不同衍生劑，對(duì)于每一氯丙醇，其與對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積的比值均較為接近，RSD為1.2%～2.2%。Regis公司產(chǎn)品衍生后氯丙醇峰形最好，而實(shí)驗(yàn)室合成衍生劑產(chǎn)品氯丙醇峰形略差。從包裝上看，Regis公司產(chǎn)品瓶口采用橡膠塞密封，更有利于氣密針穿刺取液，而且潮氣不易進(jìn)入試劑瓶?jī)?nèi)，使衍生操作更簡(jiǎn)便，且該公司產(chǎn)品價(jià)格也較低，本實(shí)驗(yàn)選用Regis公司HFBI試劑。

2.3 同位素內(nèi)標(biāo)的使用和選擇

2.3.1 同位素內(nèi)標(biāo)的使用

將氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)及其同位素內(nèi)標(biāo)加入到20% NaCl溶液中，按照1.3.2節(jié)樣品前處理步驟進(jìn)行操作。若采用外標(biāo)法計(jì)算氯丙醇的結(jié)果，并與以正己烷為介質(zhì)的相同質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)液衍生物進(jìn)行比較，4種氯丙醇的絕對(duì)回收率僅為35.2%～59.1%；而采用內(nèi)標(biāo)法計(jì)算時(shí)，其相對(duì)回收率則為91.2%～106%，滿足測(cè)定要求。此外，在對(duì)醬油以及方便面調(diào)料粉進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)時(shí)，單氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)的絕對(duì)回收率僅為38.1%～56.5%，而雙氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)的回收率更低，僅為6.34%～15.3%。由此可見，采用本實(shí)驗(yàn)操作步驟，必須使用內(nèi)標(biāo)法才可獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。

2.3.2 同位素內(nèi)標(biāo)的選擇

表3 內(nèi)標(biāo)物對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響((n=6)Table3 Effect of internal standards on analysis results (n==66))

表4 定量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)加標(biāo)醬油和方便面調(diào)料粉樣品中2-MCPD含量的影響Table4 Effect of calibration standard of 3-MCPD and 2-MCPD on 2-MCPD content in spiked soy sauce and instant noodle seasoning powder

之前，由于國(guó)際上缺乏2-MCPD標(biāo)準(zhǔn)品和d5-2-MCPD和d5-2,3-DCP內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品出售，因此文獻(xiàn)[19,21-22]方法僅以d5-3-MCPD和d5-1,3-DCP為內(nèi)標(biāo)物校正3～4種氯丙醇，因此所測(cè)得結(jié)果可能不夠準(zhǔn)確，需要對(duì)此予以重新評(píng)估。本實(shí)驗(yàn)以市售釀造醬油和方便面調(diào)料粉為基質(zhì)，進(jìn)行3種水平(100、200μg/kg和400μg/kg)的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表3。當(dāng)以d5-3-MCPD或d5-2-MCPD作為單氯丙醇的定量?jī)?nèi)標(biāo)時(shí)，單氯丙醇的回收率為86.9%～107%，RSD為3.37%～11.4%，皆滿足痕量分析的要求。這說(shuō)明d5-3-MCPD或d5-2-MCPD皆可作為單氯丙醇(3-MCPD和2-MCPD)測(cè)定的定量?jī)?nèi)標(biāo)。以d5-1,3-DCP作為雙氯丙醇的定量?jī)?nèi)標(biāo)時(shí)，目標(biāo)物(1,3-DCP和2,3-DCP)的回收率均較為理想，在83.1%～101%之間，RSD為5.62%～11.5%。以d5-2,3-DCP作為雙氯丙醇的定量?jī)?nèi)標(biāo)時(shí)，2,3-DCP的回收率和RSD分別為90.6%～103%、4.79%～9.36%，滿足要求；而1,3-DCP的回收率僅為36.2%～73.2%，RSD高達(dá)17.1%～61.5%。這說(shuō)明僅d5-1,3-DCP可作為2種雙氯丙醇測(cè)定的定量?jī)?nèi)標(biāo)，而d5-2,3-DCP作為1,3-DCP的定量?jī)?nèi)標(biāo)時(shí)，所得結(jié)果不滿足要求。

2.3.3 2-MCPD測(cè)定時(shí)標(biāo)準(zhǔn)物的對(duì)比

之前，由于國(guó)際上缺乏商品2-MCPD標(biāo)準(zhǔn)品出售，文獻(xiàn)[22]報(bào)道以3-MCPD的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算2-MCPD的含量。由于不同物質(zhì)的響應(yīng)不同，以此方法所得2-MCPD含量可能不夠準(zhǔn)確。因此需要對(duì)該法的可靠性重新進(jìn)行驗(yàn)證。在上述醬油和方便面調(diào)料粉氯丙醇加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)中，采用2-MCPD、3-MCPD兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算、對(duì)比2-MCPD的含量，并以2-MCPD為標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果作為真值進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果見表4。以3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得2-MCPD結(jié)果均偏低，釀造醬油、方便面調(diào)料粉中，以3-MCPD為標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得2-MPCD含量分別為真值的52.6%～77.8%、52.1%～63.1%，均不滿足測(cè)定的準(zhǔn)確度要求。因此為了精確定量，必須以2-MCPD為標(biāo)準(zhǔn)物計(jì)算2-MCPD的含量。

2.4 方法學(xué)指標(biāo)的考察

2.4.1 檢出限和定量限

表5 氯丙醇的檢出限和定量限、線性回歸方程Table5 Regression equation, and detection and quantification limits of chloropropanols

如表5所示，在醬油基質(zhì)與方便面調(diào)料粉基質(zhì)中，4種氯丙醇的檢出限(LOD，RSN=3)在2.5～10μg/kg之間，定量限(LOQ，RSN=10)為8.0～33μg/kg。由于雙氯取代氯丙醇極性較單氯取代氯丙醇更小，在基質(zhì)分散固相萃取(SPE)中，部分被正己烷淋洗造成靈敏度損失，因此其LOD和LOQ為單氯取代氯丙醇的2～3倍，但均滿足食品中痕量氯丙醇的分析要求。

2.4.2 線性范圍

以氯丙醇與各自內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值Y和氯丙醇質(zhì)量X(ng)計(jì)算線性回歸方程。在最優(yōu)條件下進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，在100～2000ng范圍線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R均大于0.9990(表5)，滿足分析要求。

2.4.3 精密度和準(zhǔn)確度

以醬油和方便面調(diào)料粉(12種常見品牌方便面調(diào)料粉混勻)為基質(zhì)，在最優(yōu)條件下進(jìn)行100、200、400μg/kg三個(gè)水平的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)6次。結(jié)果如表3所示，分別以各自對(duì)應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)校正時(shí)，4種氯丙醇的回收率均為90.1%～107%，RSD為3.37%～10.4%，重復(fù)性(精密度)和準(zhǔn)確度均較為理想，滿足痕量分析的要求。

2.5 實(shí)際樣品分析

利用本方法調(diào)查了市售8種品牌方便面調(diào)料粉和7種品牌醬油氯丙醇的含量。結(jié)果表明，均未檢出雙氯丙醇(小于LOD)；方便面調(diào)料粉和醬油樣品各有一份檢出單氯丙醇，方便面調(diào)料粉中3-MCPD、2-MCPD含量分別為0.97、0.05mg/kg，醬油中3-MCPD、2-MCPD含量分別為1.3、0.11mg/kg。3-MCPD含量超過(guò)我國(guó)限量要求(固態(tài)和液態(tài)分別為1.0、0.4mg/kg)，均高于歐盟的限量值(0.02mg/kg)。

3 結(jié) 論

采用多同位素內(nèi)標(biāo)法，結(jié)合基質(zhì)分散固相萃取法(MSPD)，以氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定，建立了同時(shí)測(cè)定醬油和方便面調(diào)料粉中4種氯丙醇含量的方法。該方法明顯較GB/T 5009.191—2006《食品中氯丙醇含量的測(cè)定》法簡(jiǎn)便，減少了取樣量和硅藻土、有機(jī)溶劑的消耗，靈敏度基本一致，精密度和準(zhǔn)確性得到了進(jìn)一步提高，并將該方法成功應(yīng)用于實(shí)際樣品的分析。結(jié)果表明僅需2種內(nèi)標(biāo)(d5-1,3DCP和d5-3-MCPD或d5-2-MCPD)即可達(dá)到食品中4種氯丙醇準(zhǔn)確定量的目的。同時(shí)若以3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)曲線定量2-MCPD值時(shí)，2-MCPD僅為真實(shí)值的52.1%～77.8%。

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Determination of 4 Kinds of Chloropropanols in Foods by Gas Chromatography-Mass Spectroscopy Coupled with Multi-Isotopic Internal Standard Technique

WU Shao-ming1,2，F(xiàn)U Wu-sheng1,*，F(xiàn)U Hai-qing3，F(xiàn)ANG Qin-mei4，HUA Juan5

(1. Fujian Provincial Key Laboratory of Zoonosis Research, Center for Disease Control and Prevention, Fuzhou 350001, China；2. Fujian Inspection and Research Institute for Product Quality, Fuzhou 350002, China；3. College of Jinshan, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China；4. Biotechnology Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China；5. College of Food Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China)

An analytical method was developed to determine 4 kinds of chloropropanols in foods using gas chromatography mass spectrometer coupled with the multi-isotopic internal standard technique. The performance difference between different brands of HFBI as a derivativization reagent and internal standard selection for quantification were discussed. Under the optimal conditions, the limits of detection (LOD) were 2.5–10 μg/kg for 4 kinds of chloropropanols. According to the internal standard calibration, an excellent linearity between 100 ng and 2000 ng of chloropropanols (R2 ＞ 0.9990) was obtained. When chloropropanols were spiked at levels of 100, 200, 400 mg/kg in soy sauce and seasoning powder of instant noodles, the average recovery rates were 90.1%–107%, with relative standard deviation (RSD) of 3.37%–10.4% (n = 6). The application of only 2 kinds of internal standards (chloropropane-1,2-diol-d5or 2-chloropropane-1,3-diol-d5and 1,3-dichloro-2-propanol-d5) can reveal accurate and precise determination for 4 kinds of chloropropanols. When 3-chloropropane-1,2-diol (3-MCPD) was used to calibrate 2-MCPD in foods, the level of 2-chloropropane-1,3-diol (2-MCPD) was only 52.1%–77.8% of the real content.

O657

A

1002-6630(2013)18-0131-06

10.7506/spkx1002-6630-201318026

2013-06-11

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81172671)；衛(wèi)生部公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(200902009)；福建省杰出青年基金項(xiàng)目(2011J06011)；福建省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新課題(2011-CX-21)

吳少明(1986—)，男，檢驗(yàn)員，碩士，研究方向?yàn)槭称窓z測(cè)。E-mail：280257959@qq.com

*通信作者：傅武勝(1971—)，男，主任技師、副教授，博士，研究方向?yàn)槲廴疚锘瘜W(xué)與食品安全。E-mail：fwsfqm@126.com

Key words：food；chloropropanol；dispersion matrix solid-phase extraction；isotopic internal standard technique；gas chromatography-mass spectrometer (GC-MS)