胡凱，扈榮，許鵬慶，白海波，傅旭春

(1.浙江大學(xué)藥學(xué)院，杭州 310058；2.杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)生物工程研究所有限公司，杭州 310011；3.浙江大學(xué)城市學(xué)院藥物研究所，杭州 310015)

落新婦苷固體分散體在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究

胡凱1,2，扈榮2，許鵬慶2，白海波2，傅旭春3*

(1.浙江大學(xué)藥學(xué)院，杭州 310058；2.杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)生物工程研究所有限公司，杭州 310011；3.浙江大學(xué)城市學(xué)院藥物研究所，杭州 310015)

目的 研究大鼠口服落新婦苷固體分散體后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。方法 采用HPLC測(cè)定大鼠口服落新婦苷固體分散體后血漿中的落新婦苷血藥濃度。用Kinetica軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果 落新婦苷在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程符合二室模型。AUC0-480min為(1.98±0.60)mmol·min·L-1。結(jié)論 將落新婦苷制成固體分散體可以顯著提高其生物利用度。

落新婦苷；固體分散體；藥動(dòng)學(xué)；生物利用度

落新婦苷(3-O-α-L-鼠李糖-5，7，3′，4′-4羥基二氫黃酮醇)存在于虎耳草科植物落新婦、百合科植物土茯苓、胡桃科植物黃杞、金粟蘭科植物草珊瑚等多種植物中[1-4]。

落新婦苷具有抑制輔酶A還原酶、抑制醛糖還原酶、肝保護(hù)、抗水腫、抗氧化等活性[5]，可用于治療免疫系統(tǒng)或肝損傷等疾病。但落新婦苷難溶于水，口服吸收差，生物利用度低[6]，是研究開發(fā)其在臨床上應(yīng)用所迫切需要解決的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)用溶劑法將落新婦苷制成固體分散體，研究了落新婦苷固體分散體大鼠灌胃給藥的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)，為落新婦苷的劑型研究和臨床應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀(日本島津，LC-20AT泵、SPD-20A檢測(cè)器、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、SHIMADZU LCsolution化學(xué)工作站)；VW-80A渦旋混合器(上海醫(yī)大儀器廠)；Allegra 64R Centrifuge高速離心機(jī)(BECKMAN COULTER公司)。

1.2 藥品與試劑

落新婦苷(從黃杞葉中提取得到，純度：95.5%，由杭州華東醫(yī)藥集團(tuán)生物工程研究所提供，批號(hào)：100801)；落新婦苷對(duì)照品(成都普思生物科技有限公司，批號(hào)：PS10013001，純度＞99%)；甲醇(色譜純，J＆K SCIENTIFIC LTD，批號(hào)：LL30L01)；磷酸(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：T20090304)；磷酸二氫鉀(分析純，湖州湖試化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：100401)；無(wú)水乙醇(分析純，安徽安特生物化學(xué)有限公司，批號(hào)：1107073601)；聚維酮PVP K30(上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司，批號(hào)：05000244868)；水合氯醛(上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)五聯(lián)化工廠，批號(hào)：20100815)。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，♂，體質(zhì)量300～400 g，浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(浙)2008-0033。

2 方法

2.1 落新婦苷固體分散體的配制

稱取落新婦苷適量，以PVP為載體，乙醇為溶劑，采用溶劑法制成固體分散體。臨用前以水稀釋，使落新婦苷含量為44.4 mmol·L-1。

2.2 色譜條件

Syncronis C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-0.01 mol·L-1KH2PO4-磷酸(30∶70∶0.1)，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)291 nm。進(jìn)樣體積20 μL。

2.3 血漿樣品的處理

取血漿100 μL，加入甲醇150 μL，靜置沉淀，15 000 r·min-1離心10 min，吸取上清液進(jìn)樣分析。

2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

SD大鼠5只，禁食不禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉后，然后進(jìn)行一側(cè)頸動(dòng)脈插管手術(shù)。以落新婦苷固體分散體的水溶液灌胃，灌胃劑量以落新婦苷計(jì)均為100 mg·kg-1。并于給藥后5，10，15，20，25，30，60，120，180，240，300，360，480 min頸動(dòng)脈取血0.3 mL，所得血樣均按“2.3”項(xiàng)下方法處理，HPLC測(cè)定落新婦苷含量。

3 結(jié)果

3.1 專屬性試驗(yàn)

空白血漿和落新婦苷血漿樣品的HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。落新婦苷色譜峰的保留時(shí)間為34.2 min左右，血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)落新婦苷的測(cè)定沒(méi)有干擾。

圖1 落新婦苷大鼠血漿樣品的HPLC色譜圖A-對(duì)照品血漿樣品；B-空白血漿；C-固體分散體灌胃給藥后的血漿樣品；1-落新婦苷Fig 1 HPLC chromatograms of rat plasma samples A-plasma samples of astilbin reference substances; B-blank plasma; C-plasma sample after oral administration of solid dispersion of astilbin; 1-astilbin

3.2 線性范圍和檢測(cè)限

在空白血漿中加入落新婦苷對(duì)照品溶液，配制濃度分別為0.07，0.14，0.28，0.55，1.10，2.20，4.39，8.78和17.56 μmol·L-1的血漿樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)行HPLC分析。以落新婦苷峰面積A對(duì)落新婦苷濃度C(μmol·L-1)進(jìn)行線性回歸，得落新婦苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為A=17 955.7C+ 3 916.8，r＝0.998。在濃度0.07～17.56 μmol·L-1內(nèi)，線性關(guān)系良好。最低定量限為0.07 μmol·L-1。

3.3 回收率與精密度

配制落新婦苷對(duì)照品血漿樣品，使其濃度分別為0.09，2.38和17.56 μmol·L-1，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定落新婦苷峰面積，并與相同濃度的落新婦苷對(duì)照品甲醇溶液直接進(jìn)樣得到的色譜峰面積進(jìn)行比較，計(jì)算得到絕對(duì)回收率分別為81.2%，84.2%，86.4%(n=5)。實(shí)驗(yàn)還測(cè)定了落新婦苷濃度分別為0.09，2.38和17.56 μmol·L-1血漿樣品的日內(nèi)精密度和日間(3 d)精密度，日內(nèi)精密度RSD分別為10.4%、6.0%和3.0%(n=5)，日間(3 d)精密度RSD分別為10.1%，1.6% 和3.9%(n=5)。回收率與精密度均符合生物樣品測(cè)定方法的要求。

3.4 動(dòng)力學(xué)參數(shù)

所得血藥濃度數(shù)據(jù)經(jīng)Kinetica藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行擬合，結(jié)果表明落新婦苷固體分散體符合二室模型，其主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表1，平均血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖2。

表1 落新婦苷的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(n=5，±s )Tab 1 Phamarcokinetic parameters of astilbin(n=5,±s )

表1 落新婦苷的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(n=5，±s )Tab 1 Phamarcokinetic parameters of astilbin(n=5,±s )

AUC0-∞/mmol·min·L-12.41±0.65 Ka/min-13.23±1.63 0.27±0.19 t1/2α/min 110.7±37.5 10.0±9.20 t1/2β/min 362.2±287.5 59.6±59.6

圖2 落新婦苷的血藥濃度-時(shí)間曲線Fig 2 Plasma concentration-time curve of astilbin

4 討論

落新婦苷的口服吸收非常差，生物利用度低。有文獻(xiàn)報(bào)道，用含0.886 mol·L-1乙醇的生理鹽水配制的落新婦苷以100 mg·kg-1的劑量大鼠口服給藥，UPLC-MS測(cè)定血藥濃度，得AUC0-480min為(0.008±0.004)mmol·min·L-1[6]。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)得落新婦苷在25 ℃時(shí)的溶解度只有1.1 mmol·L-1，落新婦苷的口服吸收差可能與其水溶性差有關(guān)。通過(guò)制劑技術(shù)提高難溶性藥物的溶解度是改善其口服吸收的重要方法。

固體分散制劑是上世紀(jì)六十年代初才提出來(lái)的一種比較新的劑型，通常是將難溶性藥物分散在水溶性載體中形成高度分散的固體分散體。固體分散體具有增大溶解度(本實(shí)驗(yàn)測(cè)得落新婦苷固體分散體在25 ℃時(shí)的溶解度＞44.4 mmol·L-1)、加快溶出速率、提高生物利用度等優(yōu)點(diǎn)，在改善難溶性中藥有效成分的藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)方面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛[7-12]。

從表1可以看出，落新婦苷制成固體分散體后，口服吸收情況明顯改善。與生理鹽水配制的落新婦苷相比，相對(duì)生物利用度為250。

進(jìn)一步分析表1所列的2種劑型的落新婦苷大鼠口服給藥的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，落新婦苷固體分散體的達(dá)峰時(shí)間有所延遲，吸收速率常數(shù)和峰濃度顯著增大，分布速率和消除速率明顯減緩，表明落新婦苷固體分散體不僅具有良好的吸收性，而且還具有明顯的緩釋性。

大鼠口服落新婦苷制劑的藥動(dòng)學(xué)研究的文獻(xiàn)報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)以頸動(dòng)脈取血的方法研究了大鼠口服落新婦苷固體分散體后的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。研究結(jié)果表明：將落新婦苷制成固體分散體可以顯著提高其生物利用度。

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Study on Pharmacokinetics of Astilbin Solid Dispersion in Rat

HU Kai1,2, HU Rong2, XU Pengqing2, BAI Haibo2, FU Xuchun3*
(1.College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China; 2.Hangzhou Huadong Medicine Group Biotechnology R&D Institute Co., Ltd, Hangzhou 310011, China; 3.Institute of Materia Medica, Zhejiang University City College, Hangzhou 310015, China)

OBJECTIVE To study the pharmacokinetics of astilbin solid dispersion in rat. METHODS HPLC was used to determine the astilbin concentration in the plasma of rats. The pharmacokinetic parameters were calculated with Kinetica software. RESULTS After the rats were orally administrated with astilbin solide dispersions, the pharmacokinetic process of astilbin in rats was found to be consistent with the two-compartment model. The AUC0-480minwas (1.98±0.60)mmol·min·L-1. CONCLUSION The astilbin in solid dispersion can greatly improve its bioavailability in rat.

astilbin; solid dispersion; pharmacokinetics; bioavailability

R969.1

B

1007-7693(2013)10-1102-03

2013-03-04

胡凱，男，工程師 Tel: (0571)89918210 E-mail: hutingfish@sina.com*

傅旭春，男，博士，教授 Tel: (0571)88018711 E-mail: fuxc@zucc.edu.cn