潘紅，孫芳玲，王曉峰，王文，艾厚喜，張麗，安宜

莫諾苷對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠血液黏度的影響①

潘紅1,2，孫芳玲2，王曉峰2，王文2，艾厚喜2，張麗2，安宜1

目的 研究莫諾苷對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷后血液黏度的影響。方法Longa法制備大鼠局灶性腦缺血模型，造模后，分別給予莫諾苷(30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg)連續(xù)灌胃7 d，通過(guò)全自動(dòng)血流變儀和微量血漿測(cè)試裝置檢測(cè)其全血黏度和血漿黏度。結(jié)果與假手術(shù)組相比，模型組全血黏度和血漿黏度均顯著升高(P＜0.001)；與模型組相比，莫諾苷各劑量組全血黏度和血漿黏度顯著降低(P＜0.001)。結(jié)論莫諾苷能有效減少大鼠局灶性腦缺血模型引起的血液黏度升高。

莫諾苷；缺血/再灌注；血液黏度；血漿黏度；大鼠

[本文著錄格式]潘紅，孫芳玲，王曉峰，等.莫諾苷對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠血液黏度的影響[J].中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐, 2013,19(2):107-109.

缺血性腦血管病是一種高致死率和高致殘率的腦血管疾病，高發(fā)于中老年人群，通常是因?yàn)橐粭l或多條腦內(nèi)動(dòng)脈被血栓阻塞，進(jìn)而導(dǎo)致局部或者全腦供血不足甚至完全中斷，最終引起腦組織缺血、缺氧，甚至發(fā)生梗死等一系列病理變化[1]。血液黏度是反映血液流動(dòng)性質(zhì)的重要指標(biāo)，包括全血黏度和血漿黏度，是反映血液中各種有形成分和血漿成分異常的綜合指標(biāo)。大量研究表明，腦梗死患者存在血液黏度增高。臨床上常將血液黏度的檢查作為預(yù)測(cè)腦卒中等血栓形成的主要手段[2]。

莫諾苷是中藥山茱萸的有效單體成分。前期研究工作表明，莫諾苷對(duì)于大鼠局灶性腦缺血損傷具有神經(jīng)保護(hù)作用[3]，能減少大鼠腦梗死體積[4]，增強(qiáng)大鼠皮層抗氧化能力[5]、抗炎能力[6]，抑制腦缺血再灌注引起的神經(jīng)元凋亡[5]，改善其行為學(xué)評(píng)分[7]，而且發(fā)現(xiàn)莫諾苷具有抑制兔血小板聚集的作用[8]。本文采用線(xiàn)栓法制作局灶性腦缺血大鼠模型，旨在通過(guò)研究莫諾苷對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷后血液黏度的影響，為進(jìn)一步研究莫諾苷的腦保護(hù)作用提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 藥品與試劑

莫諾苷：由北京宣武醫(yī)院藥物研究室從山茱萸中提取制備，用高效液相色譜分析，純度98.5%，臨用前蒸餾水溶解成所需濃度的藥液。阿司匹林(acetyl salicylic acid,ASA)：SIGMA公司產(chǎn)品，臨用時(shí)蒸餾水溶解，以0.1 mol/L NaHCO3調(diào)pH至7.0左右，再加蒸餾水稀釋到所需濃度。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley大鼠，體重(260±20) g，由解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(軍)2007-004。常規(guī)飼養(yǎng)，溫度(24± 1)℃，濕度(55±5)%，手術(shù)前夜禁食，不禁水。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

尼龍栓線(xiàn)，直徑0.26 mm(2634-100)，購(gòu)自北京沙東生物技術(shù)有限公司；LBY-N6B全自動(dòng)自清洗血液流變儀和微量血漿測(cè)試裝置，均為北京普利生儀器有限公司產(chǎn)品；3.8%枸櫞酸鈉抗凝管，肝素抗凝管。

1.4 方法

1.4.1 模型制備 參照Longa法[9]并略加改進(jìn)。大鼠術(shù)前禁食12 h，用10%水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉，消毒，剪開(kāi)皮膚，鈍性分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(common carotid artery,CCA)，從CCA分叉處向上分離頸外動(dòng)脈(external carotid artery,ECA)和頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery,ICA)，結(jié)扎ECA和CCA近心端。在距CCA分叉處約2 mm處用眼科剪剪一斜行細(xì)小動(dòng)脈切口，將經(jīng)多聚左旋賴(lài)氨酸處理過(guò)的栓線(xiàn)插入，用眼科鑷輕推栓線(xiàn)，直到產(chǎn)生阻擋感，說(shuō)明栓線(xiàn)經(jīng)CCA分叉處通過(guò)ICA入顱進(jìn)入大腦中動(dòng)脈(middle cerebral artery,MCA)，到達(dá)大腦前動(dòng)脈(anterior cerebral artery,ACA)起始部，阻斷MCA的所有血供，并且造成MCA供血相關(guān)區(qū)的梗死灶，此時(shí)不可再用力推入，以免扎破血管造成蛛網(wǎng)膜下腔出血。記錄栓塞開(kāi)始時(shí)間，縫合肌肉和皮膚。栓塞30 min后，緩慢拔出栓線(xiàn)，實(shí)現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組大鼠除不插入栓線(xiàn)外，其余操作與手術(shù)組相同。

1.4.2 分組及給藥 動(dòng)物于術(shù)畢清醒后和術(shù)后第7天參照Longa法[3]進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分(1～5分)，確定造模是否成功。

隨機(jī)將動(dòng)物分為6組：假手術(shù)組，模型組，阿司匹林組(10 mg/kg)，莫諾苷低(30 mg/kg)、中(90 mg/ kg)、高劑量組(270 mg/kg)。每天灌胃給藥1次，連續(xù)7 d。假手術(shù)組和模型組給予蒸餾水灌胃。

1.4.3 全血黏度、血漿黏度測(cè)定 取末次給藥后完成神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的大鼠，用10%水合氯醛(400 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，收集入肝素抗凝管內(nèi)，常規(guī)制備血樣。測(cè)定時(shí)，輕輕搖晃血樣，使其均勻，取800μl肝素抗凝血用LBY-N6B全自動(dòng)自清洗血液流變儀分別測(cè)定低切變率(10/s)、中切變率(60/s)和高切變率(150/s)下的全血黏度。取剩余的肝素抗凝血于3000 r/min離心10 min，取上清血漿200μl用微量血漿測(cè)試裝置檢測(cè)血漿黏度[10]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果以(±s)表示。組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way analysis of variance,ANOVA)，以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與假手術(shù)組相比，模型組在低切變率(10/s)、中切變率(60/s)和高切變率(150/s)，全血黏度均有顯著升高(P＜0.001)。與模型組相比，阿司匹林組全血黏度各切率值顯著降低(P＜0.001)；莫諾苷中劑量組和高劑量組在3個(gè)切率值的全血黏度均顯著降低(P＜0.001)。見(jiàn)表1。

表1 不同切變率下各組大鼠全血黏度比較

與假手術(shù)組相比，模型組血漿黏度顯著增加(P＜0.001)。與模型組相比，阿司匹林組血漿黏度顯著降低(P＜0.001)；而莫諾苷低、中和高劑量組血漿黏度均顯著降低(P＜0.001)。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血漿黏度比較

3 討論

由于供血不足導(dǎo)致供氧和能量不足，腦缺血可引起細(xì)胞內(nèi)興奮性神經(jīng)毒性、酸中毒、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等。也有臨床研究表明，血液黏度的不正常升高是導(dǎo)致腦梗死發(fā)生的原因之一。血液黏度的升高與血流速度呈負(fù)相關(guān)，血流速度的降低，會(huì)導(dǎo)致血液中凝血因子以及各種血細(xì)胞在腦血管內(nèi)沉積，成為腦梗死發(fā)病的基礎(chǔ)[11]。缺血性腦卒中引起血液流變異常而導(dǎo)致微循環(huán)灌注不足是疾病進(jìn)一步發(fā)展的重要原因[12]，如嚴(yán)重缺氧造成酸中毒時(shí)，紅細(xì)胞膜變硬，使血液黏度升高，形成微血栓，導(dǎo)致微循環(huán)障礙[13]。

目前，在心腦血管疾病中廣泛應(yīng)用的藥物如抗血小板聚集的藥物能抑制血栓形成，降低血液黏度。其中阿司匹林在心腦血管疾病中廣泛應(yīng)用，低劑量使用可以預(yù)防動(dòng)脈血栓。鹽酸丁咯地爾是一種血管活性劑，已經(jīng)用于腦血管病的治療，臨床數(shù)據(jù)顯示其具有改善微循環(huán)的作用[14]。

有研究表明，紅花、刺五加、防風(fēng)、銀杏葉、絞股藍(lán)、燈盞花素等中藥也有降低血液黏度的功效，但還停留在起始階段，很少涉及單體成分[15]。本研究室從山茱萸中自行提取有效單體化合物莫諾苷，在線(xiàn)栓法制作局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠模型上給藥7 d后，觀察血液黏度的變化，發(fā)現(xiàn)莫諾苷能顯著降低局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠的全血黏度和血漿黏度，并且作用具有劑量依賴(lài)性。劑量越大，改善越明顯。

本研究提示，莫諾苷在體內(nèi)能降低大鼠局灶性腦缺血模型引起的血液黏度升高，結(jié)合前期研究，將為缺血性腦卒中機(jī)制研究及臨床治療提供重要依據(jù)。

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Effect of Morroniside on Blood Viscosity in Focal Cerebral Ischemia/Reperfusion in Rats

PAN Hong,SUN Fang-ling,WANG Xiao-feng,et al.Beijing Institute of Technology,Beijing 100081,China

ObjectiveTo explore the effect of morroniside on blood viscosity in focal cerebral ischemia/reperfusion in rats.MethodsThe animal model was induced with occlusion of middle cerebral artery(MCAO),and morroniside(30 mg/kg,90 mg/kg,270 mg/kg)was then administered intragastrically for 7 d.Whole blood viscosity and plasma viscosity were detected with auto-hemorheological instrument and microplasma testing device.ResultsCompared with sham-operated group,both whole blood viscosity and plasma viscosity significantly increased in ischemic rats(P＜0.001);however,morroniside reduced whole blood and plasma viscosity noticeably(P＜0.001).ConclusionMorroniside can inhibit the increase of blood viscosity induced by focal cerebral ischemia/reperfusion in rats.

morroniside;ischemia/reperfusion;blood viscosity;plasma viscosity;rats

R743

A

1006-9771(2013)02-0107-03

2012-11-29

2012-12-06)

1.科技部“十二五”重大創(chuàng)新藥專(zhuān)項(xiàng)(No.2012ZX09102-201-016)；2.國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81173575)；3.國(guó)家自然科學(xué)基金(No. 30740053)；4.北京市自然科學(xué)基金(No.7062031)；5.北京市教委科研基地-科技創(chuàng)新平臺(tái)(No.111219)；6.北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才(No. 2011-3-097)。

1.北京理工大學(xué)，北京市100081；2.首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院藥物研究室，北京市100053。作者簡(jiǎn)介：潘紅(1990-)，女，漢族，山東棗莊市人，碩士研究生，主要研究方向：神經(jīng)藥理。通訊作者：安宜。

10.3969/j.issn.1006-9771.2013.02.003