畢江濤,王小霞,陳衛(wèi)民,王 靜,賀達(dá)漢

(1.寧夏大學(xué)新技術(shù)應(yīng)用研究開發(fā)中心，寧夏 銀川750021； 2.寧夏大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，寧夏 銀川 750021；3.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏 銀川 750021)

內(nèi)生真菌(Endophyticfungi)是指那些在其生活史中的某段時期生活在植物組織內(nèi)，對植物組織沒有引起病害癥狀的真菌[1]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者已在多種植物，特別是藥用植物中分離出內(nèi)生真菌[2-4]，植物內(nèi)生真菌不但對植物生長發(fā)育進(jìn)行積極調(diào)控，而且能產(chǎn)生與宿主相同或相似的生理活性物質(zhì)[5-6]，并具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、免疫抑制等生物活性，是植物天然代謝產(chǎn)物的重要來源[7-9]。從植物中分離內(nèi)生真菌，篩選具有活性的內(nèi)生真菌及其天然產(chǎn)物作為藥用植物替代資源的研究具有重要的意義[10]。

甘草(Glycyrrhizauralensis)屬于豆科甘草屬灌木狀多年生草本植物，是我國干旱、半干旱地區(qū)重要的植物資源，在我國東北、華北、西北均有分布，主產(chǎn)區(qū)主要在寧夏、甘肅、內(nèi)蒙古。甘草耐旱、耐寒、耐鹽堿、防風(fēng)、固沙固土，是干旱半干旱荒漠地區(qū)優(yōu)良的生態(tài)先鋒植物，能夠產(chǎn)生重要的生態(tài)效益。甘草作為一味古老的植物藥，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調(diào)和諸藥、有抗癌抗病毒等藥理作用[11-12]，在臨床上用于治療呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多種疾病。由于甘草對多種疾病表現(xiàn)了良好的預(yù)防和治療作用且毒副作用較小，近年來對甘草潛在的多種藥理活性的研究和挖掘一直是國內(nèi)外藥理界關(guān)注的重要議題。甘草作為我國乃至世界上重要的中藥材，國內(nèi)外需求量很大，隨著甘草供需矛盾的日益增加，甘草野生資源日漸匱乏，市場供不應(yīng)求，在這種供求矛盾緊張的情況下，對甘草資源的保護(hù)和利用勢在必行[13]。目前，人們已在甘草的育種、栽培技術(shù)等方面開展了研究，但甘草人工種植周期長、組織培養(yǎng)技術(shù)尚不成熟，尋找新的可獲取甘草有效成分的途徑具有重要的現(xiàn)實意義。近年，國內(nèi)外對于甘草內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物的研究仍然處在起步階段，王莉等[14]對烏拉爾甘草內(nèi)生真菌的分布和抑菌活性進(jìn)行了研究，劉霞等[15]采用組織塊法對陜北野生甘草根中分離出的6株內(nèi)生真菌發(fā)酵液進(jìn)行了植物病原真菌的抑制活性測定，劉建利等[16]對寧夏烏拉爾甘草中內(nèi)生真菌多樣性進(jìn)行了初步研究。本試驗在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，根據(jù)植物-內(nèi)生真菌共生理論及其甘草的生物學(xué)特性，對甘草內(nèi)生真菌進(jìn)行分離，并對其抑菌活性進(jìn)行初步研究，以期為拓展甘草資源的綜合利用途徑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1供試材料 甘草于2010年10月初采自寧夏平羅，地理位置106°30′18″ E，38°23′57″ N，海拔1 102 m。采樣時挑選無病害健康植株，采集后48 h內(nèi)利用75%乙醇和0.1%升汞進(jìn)行表面消毒處理。

1.1.2主要儀器 生化培養(yǎng)箱(STX-250)、超凈工作臺(HJ-CJ-2D)、生物顯微鏡(FL-107CCD)、濕熱滅菌器(GMSX-280)、熱空氣消毒箱(GRX-9053A)。

1.1.3培養(yǎng)基和試劑 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(蛋白胨10 g·L-1、牛肉粉3.0 g·L-1、氯化鈉5.0 g·L-1、瓊脂15.0 g·L-1)、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(馬鈴薯浸粉5.0 g·L-1、葡萄糖20.0 g·L-1、瓊脂15.0 g·L-1、氯霉素0.1 g·L-1)、乳酸石炭酸棉蘭染色液(石炭酸20 g、甘油40 mL、乳酸20 mL、棉藍(lán)0.05 g、蒸餾水40 mL)。

1.1.4供試指示菌 供試植物病原真菌為小麥全蝕病菌(Gaeumannomycesgraminisvar.tritici)、枸杞黑果病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)、黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporiumf.sp.cucumeris)和黃瓜立枯病菌(Rhizoctoniasolani)，由寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供;供試細(xì)菌為革蘭氏陽性菌枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis),由西北農(nóng)林科技大學(xué)無公害農(nóng)藥研究中心提供;革蘭氏陰性菌大腸桿菌(Escherichiacoli)、革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和革蘭氏陰性菌銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，由寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科提供。

1.2方法

1.2.1內(nèi)生真菌的分離和純化 內(nèi)生真菌的分離采用植物組織塊法。首先將采集的植物材料用自來水沖洗進(jìn)行預(yù)處理，去掉泥土和雜質(zhì)，然后隨機(jī)分別稱取植物的根部、莖部、葉片置于3個直徑為10 cm的無菌燒杯中，再依次用75%酒精漂洗1 min、無菌水漂洗3次，0.1%升汞漂洗3 min、無菌水漂洗3次，75%酒精漂洗30 s、無菌水漂洗5次進(jìn)行表面消毒。消毒后的材料用無菌手術(shù)剪剪成葉(2～5) mm×(2～5) mm、根和莖5～10 mm的片段，分別置于PDA平板上，并用封口膜將培養(yǎng)皿密封，28 ℃進(jìn)行避光培養(yǎng)3～5 d；同時，采用植物組織印記法[17]，將表面消毒的植物組織片段不經(jīng)剪切直接在培養(yǎng)基表面輕抹，相同條件下培養(yǎng)作為對照，培養(yǎng)3 d后對照培養(yǎng)基中無真菌長出，證明表面消毒徹底，分離到的真菌是植物內(nèi)生真菌。每皿接4～5個樣品，重復(fù)3次，觀察材料切口處長出的菌絲或菌落，取切口處菌絲，轉(zhuǎn)接至新的PDA培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，采用尖端菌絲挑取法對所分離的內(nèi)生真菌進(jìn)行多次分離，最后將純化后的菌株轉(zhuǎn)接到PDA斜面上編號和保存[18]。

1.2.2內(nèi)生真菌的形態(tài)觀察與初步分類 用點植法在平板中接種純化好的內(nèi)生真菌菌株，然后觀察菌落形態(tài)，并作常規(guī)鏡檢。首先從純化培養(yǎng)3～5 d的菌落上挑取菌絲，用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液染色制成玻片，置于顯微鏡下觀察菌絲形態(tài)、孢子梗形態(tài)、孢子形態(tài)以及孢子與營養(yǎng)體著生關(guān)系，對照《真菌鑒定手冊》[19]、《半知菌圖解》[20]等有關(guān)資料初步確定真菌的分類學(xué)地位至屬。

1.2.3病原菌拮抗內(nèi)生真菌的初步篩選 供試植物病原真菌的拮抗作用分析采用平板對峙培養(yǎng)法[21-23]，將5種植物病原真菌分別接種于PDA平板中央，分離的內(nèi)生真菌按3～4點接種于平板邊緣，距病原真菌25 mm，距培養(yǎng)皿邊緣距離不得小于10 mm，以只接病原真菌的平板作對照，處理和對照均設(shè)3次重復(fù)，置于28 ℃下恒溫避光培養(yǎng)4 d后觀察病原真菌菌落的變化，測定內(nèi)生真菌對病原真菌的拮抗帶寬度，以拮抗帶寬度平均值作為內(nèi)生真菌拮抗活性強(qiáng)弱的指標(biāo)[24-25]，初步篩選出對植物病原真菌生長具有拮抗作用的內(nèi)生真菌。

供試細(xì)菌的拮抗作用初步篩選采用改進(jìn)的菌塊法[26-27]，按無菌操作法分別接入2～3環(huán)供試細(xì)菌于培養(yǎng)皿中，取融化并保溫在45 ℃左右的NA培養(yǎng)基倒入90 mm無菌培養(yǎng)皿中制成平板，以手搓法輕輕搖動使其混勻，待培養(yǎng)基稍微凝固后用滅菌接種環(huán)取內(nèi)生真菌菌餅3～4塊，直徑約5 mm，分3～4點等距離均勻放置，菌餅距培養(yǎng)皿邊緣距離不得小于10 mm，小心放入培養(yǎng)基中，使菌塊帶菌絲的一面貼在培養(yǎng)基表面，用封口膜密封后將培養(yǎng)皿置低溫10 ℃以下保持12～14 h，然后將皿置于28 ℃下恒溫培養(yǎng)3～5 d，觀察內(nèi)生真菌對病原細(xì)菌的拮抗作用，測定抑菌圈的直徑，以抑菌圈直徑大小的平均值作為內(nèi)生真菌拮抗活性強(qiáng)弱的指標(biāo)[28-30]。

1.2.4數(shù)據(jù)處理 病原菌拮抗帶寬度大小和抑菌圈直徑均為3次重復(fù)試驗的平均值，以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，以對不同病原菌拮抗活性為效應(yīng)變量，不同菌株病原菌拮抗活性比較采用單因素方差分析，以檢驗不同菌株拮抗活性之間的差別是否有統(tǒng)計學(xué)意義，統(tǒng)計分析利用SPSS 13.0軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1內(nèi)生真菌菌株分布和種類構(gòu)成 從甘草根、莖、葉中總共分離到內(nèi)生真菌20株，其中根部13株、莖部6株、葉部1株，分別為分離菌株總數(shù)量的65.0%、30.0%、5.0%(表1)。

通過內(nèi)生真菌菌落和菌株顯微形態(tài)特征觀察，將分離的內(nèi)生真菌初步鑒定為2目2科5屬(表2)，其中絲孢目有內(nèi)生真菌16株，無孢目有4株，分別為所分離菌株總數(shù)的80.0%和20.0%。絲孢目中分離的菌株歸于3個屬，其中梭孢霉屬14株，為分離菌株總數(shù)的70.0%，為優(yōu)勢菌屬；無孢目菌株歸于2個屬，為束絲菌屬和組絲核菌屬。

2.2內(nèi)生真菌抑活性 拮抗試驗表明，15株內(nèi)生真菌對1種或1種以上供試植物病原真菌有不同程度的拮抗作用，為分離菌株數(shù)量的75.0%(表3)。

方差分析顯示，內(nèi)生真菌菌株對番茄灰霉病菌、黃瓜立枯病菌、小麥全蝕病菌拮抗活性差異顯著(P<0.05)，內(nèi)生真菌菌株對黃瓜枯萎病菌和枸杞黑果病菌拮抗活性差異不顯著(P>0.05)，不同菌株多重比較結(jié)果表明，內(nèi)生真菌對番茄灰霉病菌拮抗活性中，菌株RLEFR015與其他所有不同菌株比較拮抗活性差異顯著(P<0.05)，菌株RLEFR003與其他無拮抗活性的菌株相比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，但與菌株RLEFR004、RLEFR006、RLEFS001、RLEFS002、RLEFS005之間相比較，拮抗活性差異不顯著(P>0.05)。

同樣，內(nèi)生真菌對黃瓜立枯病菌拮抗活性中，菌株RLEFR002、RLEFR003、RLEFR004、RLEFR007、RLEFS001與其他菌株比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，但這5株菌之間差異不顯著(P>0.05)。

內(nèi)生真菌對小麥全蝕病菌拮抗活性中，菌株RLEFR003、RLEFR004、RLEFR007、RLEFS002、RLEFS003、RLEFS007與其他菌株之間比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，但這6株菌之間差異不顯著(P>0.05)。

所有分離的內(nèi)生真菌對5種病原真菌的拮抗活性中，菌株RLEFR015對番茄灰霉病菌拮抗活性差異顯著，拮抗帶寬度平均值為5.67 mm，為高活性菌株。

表1 甘草內(nèi)生真菌菌株分布Table 1 Distribution of isolates of endophytic fungi from Glycyrrhiza uralensis

表2 甘草分離內(nèi)生真菌菌屬構(gòu)成Table 2 The genera of fungal endophytic isolates from Glycyrrhiza uralensis

表3 甘草內(nèi)生真菌抑制植物病原真菌活性Table 3 The antifungal activities of isolated endophytic fungi from Glycyrrhiza uralensis mm

在分離的內(nèi)生真菌中19株菌對1種或1種以上供試細(xì)菌有不同程度的拮抗作用，為分離內(nèi)生真菌菌株數(shù)的95.0%(表4)。經(jīng)方差分析，菌株對供試枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌拮抗活性差異顯著(P<0.05)，不同菌株多重比較表明，在內(nèi)生真菌對枯草芽孢桿菌拮抗活性中，菌株RLEFS002與其他菌株比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，其抑菌圈直徑達(dá)40.67 mm；菌株RLEFR002、RLEFR004、RLEFR019、RLEFR006、RLEFR007、RLEFR013與其他菌株比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，但這6株菌之間比較差異不顯著(P>0.05)。

內(nèi)生真菌對大腸桿菌拮抗活性中，菌株RLEFR001、RLEFR009、RLEFR010與其他菌株比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，但這3株菌之間比較差異不顯著(P>0.05)。

內(nèi)生真菌對金黃色葡萄球菌拮抗活性中，菌株RLEFR002、RLEFS004、RLEFR005、RLEFR006、RLEFR010、RLEFR015、RLEFS005、RLEFS007與其他菌株比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)，但這8株菌之間比較差異不顯著(P>0.05)。內(nèi)生真菌對銅綠假單胞菌拮抗活性中，菌株RLEFR012與其他菌株比較，拮抗活性差異顯著(P<0.05)。

在分離的內(nèi)生真菌中，7株內(nèi)生真菌對枯草芽孢桿菌拮抗活性差異顯著(P<0.05)，占分離菌株總數(shù)的35.0%，3株菌對大腸桿菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的15.0%；8株菌對金黃色葡萄球菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的40.0%，1株菌對銅綠假單胞菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的5.0%。

表4 甘草內(nèi)生真菌拮抗病原細(xì)菌活性Table 4 The antibacterial activity of isolated endophytic fungi from Glycyrrhiza uralensis mm

2.3高活性菌株菌屬分布 抑菌活性結(jié)果顯示，內(nèi)生真菌菌株RLEFR015對供試病原真菌番茄灰霉病菌和對金黃色葡萄球菌拮抗活性差異顯著(P<0.05)，該菌株為梭孢霉屬；內(nèi)生真菌菌株RLEFR010對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌兩種供試細(xì)菌拮抗活性差異顯著(P<0.05)，為梭孢霉屬；菌株RLEFR002對枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌兩種供試細(xì)菌拮抗活性差異顯著(P<0.05)，屬于梭孢霉屬；這3株菌對供試病原菌拮抗活性差異顯著，均為梭孢霉屬。

3 討論

內(nèi)生真菌普遍存在于植物中，且具有多樣性特征[31]。不同植物體內(nèi)分離到的內(nèi)生真菌種類和數(shù)量有一定的差別，即使是同一種植物，可分離到的內(nèi)生真菌通常為數(shù)十種，有的甚至多達(dá)數(shù)百種[32]，造成這種差異可能與植物不同品種、生境、體內(nèi)微環(huán)境、表面消毒程序、分離方法、培養(yǎng)基種類等因素有關(guān)。宋素琴等[33]對采自新疆的健康野生脹果甘草(G.inflata)不同組織中內(nèi)生真菌進(jìn)行分離，純化得到兩株內(nèi)生真菌，分屬于青霉屬和鐮刀菌屬；李文軍等[34]分離了新疆脹果甘草中的內(nèi)生真菌，從甘草根、莖、葉中分離得到108株內(nèi)生真菌，分屬于6個屬；劉建利等[16]從寧夏烏拉爾甘草的根、莖、葉中分離出136株內(nèi)生真菌，對產(chǎn)孢的53株內(nèi)生真菌進(jìn)行初步鑒定，分屬于6個屬，其中鏈格孢屬、曲霉屬和青霉屬為優(yōu)勢種群。本研究從甘草根、莖、葉中共分離到內(nèi)生真菌20株，不同組織部位的內(nèi)生真菌數(shù)量存在較大差異，分布特點為根、莖、葉中數(shù)量遞減，其與劉建利等[16]所分離的內(nèi)生真菌分布結(jié)果相同；同時該研究分離得到的內(nèi)生真菌分別屬于5個屬，梭孢霉屬為優(yōu)勢種群?？梢?，不同分離方法和程序以及宿主生境的不同會在一定程度上影響分離內(nèi)生真菌的數(shù)量和種類構(gòu)成。另外，本研究僅僅采用常規(guī)培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)，且為了確保分離菌株的內(nèi)生性，消毒時間嚴(yán)格，可能因此使得很多內(nèi)生真菌被殺死，供試甘草中可能還有未分離到的內(nèi)生真菌，在后續(xù)試驗中要進(jìn)一步摸索更為合適的分離方法，保證內(nèi)生真菌分離種類的多樣性和可靠性。

本研究中所用的培養(yǎng)基均為常規(guī)分離用的培養(yǎng)基，可能有的內(nèi)生真菌不能在人工培養(yǎng)基上生長，并且對內(nèi)生真菌的鑒定只是根據(jù)菌株形態(tài)學(xué)特征初步鑒定到屬，在今后的研究中如結(jié)合非培養(yǎng)方法對內(nèi)生真菌多樣性進(jìn)行研究，可能結(jié)果會更科學(xué)[35]。

利用菌塊對峙法初步篩選病原菌拮抗菌優(yōu)點是直觀、簡便、成本低、不失為一種體外有效篩選活性內(nèi)生真菌的方法，其拮抗帶寬度或抑菌圈直徑是評價抑菌活性的重要參考指標(biāo)。王艷紅等[25]采用改進(jìn)的對峙培養(yǎng)法研究了藥用植物溫郁金(Curcumawenyujin)一株內(nèi)生真菌(ChaetomiumglobosumL18) 對幾種常見植物病原菌的拮抗作用，其中對番茄灰霉病菌平均抑菌帶寬度只有0.2 mm，但對玉米彎孢葉斑病菌平均抑菌帶寬度達(dá)到10.2 mm。本研究中分離的內(nèi)生真菌菌株RLEFR015對番茄灰霉病菌平均抑菌帶寬度達(dá)5.67 mm，對其他病原真菌抑菌帶寬度較低。因此，即使是同一菌株對不同病原真菌抑菌活性也存在差異。

王玉君等[30]通過抑菌圈擴(kuò)散法測定了遠(yuǎn)志(Polygalatenuifolia)內(nèi)生真菌對14種指示菌的抑菌活性，并將抑菌圈直徑范圍設(shè)為≤10 mm、10～15 mm、>15 mm，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志內(nèi)生真菌對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌等5種指示菌抑菌效果較好，抑菌圈直徑均大于15 mm，這與本研究中內(nèi)生真菌對枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色假單胞菌抑菌圈直徑均大于15 mm的結(jié)果相吻合。

秦盛等[36]從仙人掌(Opuntia)分離出內(nèi)生真菌進(jìn)行抑菌活性研究，發(fā)現(xiàn)3種仙人掌內(nèi)生真菌抑菌活性的分布存在一定的差別，其中元江仙人掌(O.microdasys)內(nèi)生真菌的中等活性菌株(抑菌圈直徑10～15 mm)所占比例最高，低活性菌株(抑菌圈直徑<10 mm)與高活性菌株(抑菌圈直徑>15 mm)所占比例較高，而墨西哥仙人掌(O.ficusindca)內(nèi)生真菌中3種活性菌株數(shù)目相當(dāng)，這與本研究所分離的內(nèi)生真菌抑菌活性的分布存在一定的差異相符合，是甘草內(nèi)生真菌多樣性在抑菌活性方面的體現(xiàn)。

當(dāng)然，利用菌塊對峙法進(jìn)行抑菌活性篩選，由于內(nèi)生真菌可能與供試指示菌的生長速度不同，容易造成彼此之間的干擾，同時培養(yǎng)基種類對微生物中活性物質(zhì)的產(chǎn)生有重要影響，選擇哪種或者哪幾種培養(yǎng)基的發(fā)酵液進(jìn)行活性檢測，實現(xiàn)高效篩選，還需在今后的研究工作中對初步試驗結(jié)果進(jìn)一步進(jìn)行驗證和優(yōu)化。

某些藥用植物內(nèi)生菌形成與宿主植物相同或相似的代謝途徑，產(chǎn)生一些抗菌、抗病毒等活性物質(zhì)[37]。甘草對革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陽性芽孢桿菌、一些真菌和原蟲有較強(qiáng)大的抑制活性，其中對耐藥性金黃色葡萄球菌抑菌作用在中醫(yī)臨床上具有重要意義[38]。本研究分離的20株內(nèi)生真菌中，有15株內(nèi)生真菌對1種或多種供試植物病原真菌有不同程度的抑制作用，有19株內(nèi)生真菌對1種或多種供試細(xì)菌有不同程度的抑制作用，甘草內(nèi)生真菌對真菌和細(xì)菌具有抑制作用，與以上研究結(jié)果基本一致。另外，陳麗艷等[39]研究了甘草根莖乙醇提取物對5種細(xì)菌和兩種真菌的抗菌活性，結(jié)果表明，甘草根莖乙醇提取物對革蘭氏陽性菌非常敏感，而對革蘭氏陰性菌和真菌不敏感。王麗等[40]從烏拉爾甘草的根、莖中共分離出54株內(nèi)生真菌，抑菌試驗得到20株活性菌株，其抗菌活性主要表現(xiàn)為對枯草芽孢桿菌和酒精酵母的抗性，高活性菌株對枯草芽孢桿菌的抑菌圈達(dá)27.18 mm。本研究的抑菌試驗中，有7株菌對枯草芽孢桿菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的35.0%，有8株菌對金黃色葡萄球菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的40.0%，有3株菌對大腸桿菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的15.0%，有1株菌對革蘭氏陰性銅綠假單胞菌拮抗活性差異顯著，占分離菌株總數(shù)的5.0%，說明甘草內(nèi)生真菌對革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陽性芽孢桿菌拮抗活性較強(qiáng)，對革蘭氏陰性菌敏感性較差，同時也表明甘草內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)，這可能與甘草有效成分的藥理作用有密切關(guān)系，預(yù)示著其開發(fā)和利用的可行性。

4 結(jié)論

藥用植物甘草內(nèi)生真菌具有多樣性，其不同組織部位內(nèi)生真菌的分布存在差異。甘草內(nèi)生真菌對植物病原真菌和人類病原細(xì)菌具有拮抗活性，對革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陽性芽孢桿菌拮抗活性較強(qiáng)，甘草內(nèi)生真菌具有重要的資源價值。

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