賈國慧 呼海濤

（上海醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司中央研究院 上海 201203）

注射用頭孢曲松鈉為第三代頭孢菌素類抗生素，大量用于臨床的抗菌治療，療效好副作用小，目前國內(nèi)外有眾多企業(yè)生產(chǎn)，上海新亞藥業(yè)為其中之一。為提高產(chǎn)品質(zhì)量、上海新亞藥業(yè)早在2009年即委托上海醫(yī)藥中央研究院對(duì)其自身產(chǎn)品、原研品及業(yè)內(nèi)龍頭企業(yè)生產(chǎn)的頭孢曲松產(chǎn)品進(jìn)行了全面深入的質(zhì)量研究與評(píng)價(jià)，力求找出與同行企業(yè)間的質(zhì)量差異，取長補(bǔ)短、精益求精。本研究采用上海新亞藥業(yè)（簡稱新亞）產(chǎn)品和本品原研企業(yè)（簡稱原研）市售樣品所開展的一系列質(zhì)量對(duì)比研究。研究工作從物質(zhì)基礎(chǔ)角度對(duì)可能影響產(chǎn)品療效與安全的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行了檢測與分析。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(安捷倫1200)、液質(zhì)聯(lián)用儀(THERMO LTQ)、旋光儀(魯?shù)婪駻OTO POLⅥ)、粒度分布儀(馬爾文Mastersizer 2000)、X-粉末衍射儀（Bruker D8 Advance XRD、RIGAKU/max 2550VB/PC）、差示掃描量熱儀（DSC Q2000）、元素分析儀（Elementar Vario EL Cube）等。

甲醇、乙腈（色譜純，Merck KGaA）；純凈水[樂百氏（廣東）食品飲料有限公司]；正辛胺（分析純，批號(hào)：O5802-100G，SIGMA）；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉（分析純，批號(hào)分別為：20101109和20040818，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）：藍(lán)色葡聚糖2000（批號(hào)：10012605，GE Healthcare）；頭孢曲松對(duì)照品（批號(hào)：130480-200302，中國食品藥品檢定研究院）；注射用頭孢曲松鈉樣品（上海新亞藥業(yè)，批號(hào)：100725；原研（市售），批號(hào) ：SH1259）。

2 方法與結(jié)果

2.1 有效性相關(guān)指標(biāo)的比較

眾所周知，制劑有效性與其有效物質(zhì)的含量息息相關(guān)，因此我們圍繞該指標(biāo)，考察了兩企業(yè)樣品的原始含量、不同溶藥介質(zhì)中的含量、藥品配置后不同放置時(shí)間對(duì)含量的影響以及輸液器過濾裝置對(duì)樣品量的影響。

2.1.1 含量測定

高效液相色譜法[1]，固定相：Agilent C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流動(dòng)相：正辛胺溶液（0.02 mol/L）-乙腈＝73：27，用磷酸調(diào)pH至6.5；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：5 μl。

樣品配制：取本品約6.5 mg，精密稱定，至10 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

對(duì)照品配制方法：取頭孢曲松鈉對(duì)照品適量，同上制備。

測定結(jié)果表明新亞和原研企業(yè)生產(chǎn)的注射用頭孢曲松鈉產(chǎn)品，按無水物（C18H18N8O7S3）計(jì)，含量分別是84.94%和84.04%。測定結(jié)果無明顯差異。

2.1.2 臨床用藥穩(wěn)定性與輸液器影響

為考察活性成分進(jìn)入體內(nèi)實(shí)際有效量的一致性，我們還對(duì)產(chǎn)品臨床使用中的各環(huán)節(jié)進(jìn)行了研究。如樣品在常用稀釋液10%葡萄糖溶液中的穩(wěn)定性、0.9%氯化鈉溶液中的穩(wěn)定性，輸液器過濾前后濃度的一致性等，以避免因臨床用藥方式不同所帶來的療效差異[2-4]。

測定方法：稱取本品適量，分別用10%葡萄糖溶液、0.9%氯化鈉溶液溶解，測定過濾前后，峰面積的變化，并將過濾后樣品于0.5、1、2、4 h分別取樣測定，與過膜前樣品比較，觀察峰面積的變化。

計(jì)算公式：

過濾前后變化率=（過濾后峰面積-過濾前峰面積）/過濾前峰面積×100%

放置變化百分率=（取樣時(shí)間點(diǎn)峰面積-零時(shí)間點(diǎn)峰面積）/零時(shí)間點(diǎn)峰面積×100%

表1 稀釋劑、放置時(shí)間及過濾對(duì)本品有效量的影響

表1可見，臨床用藥過程中經(jīng)常遇到的不同種類的樣品配置溶液、配置后放置時(shí)間、輸液器過濾膜對(duì)兩產(chǎn)品的有效樣品量影響，其波動(dòng)均在±1%以內(nèi)，可忽略。

上述結(jié)果表明兩產(chǎn)品用藥過程各因素對(duì)其有效劑量的影響可以忽略。

2.2 安全性相關(guān)指標(biāo)的研究與對(duì)比

安全是藥品控制中最重要的考慮因素，除活性成分本身的特性影響外，雜質(zhì)控制是安全性控制最重要的一環(huán)。本品根據(jù)其結(jié)構(gòu)有機(jī)雜質(zhì)控制主要包括有關(guān)物質(zhì)、手性異構(gòu)體、聚合物雜質(zhì)這幾個(gè)方面。

2.2.1 有關(guān)物質(zhì)

有關(guān)物質(zhì)是雜質(zhì)控制中最重要的控制手段，我們通過紫外、質(zhì)譜兩種檢測器，對(duì)比了兩來源樣品的有關(guān)雜質(zhì)分布，未見新亞樣品有需報(bào)告的雜質(zhì)種類的不同，已有雜質(zhì)的含量未見明顯高于原研品或超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

采用高效液相色譜檢測，條件同2.1.1，流動(dòng)相梯度洗脫見表2。

表2 有關(guān)物質(zhì)流動(dòng)相梯度表

供試品配制方法：取本品約6.5 mg，精密稱定，至10 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

對(duì)照品配制方法：精密量取上述供試品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。測定結(jié)果見表3。

表3 有關(guān)物質(zhì)測定數(shù)據(jù)對(duì)比

作為HPLC-UV方法檢測有關(guān)物質(zhì)的補(bǔ)充，我們同時(shí)開發(fā)了LC-MS方法，并對(duì)兩廠家樣品進(jìn)行了檢測，測定結(jié)果顯示，新亞樣品與原研比對(duì)，在LC-MS譜圖上未見明顯的新增雜質(zhì)，已有雜質(zhì)的含量水平基本不高于原研品（圖2 A、B）。針對(duì)兩產(chǎn)品的質(zhì)譜形貌，我們對(duì)正負(fù)離子模式下獲取的信息均進(jìn)行了比對(duì)，確證了主成分正負(fù)離子模式的可靠性（圖2 C、D）。

圖1 有關(guān)物質(zhì)檢測圖（HPLC-UV）

2.2.2 聚合物雜質(zhì)

聚合物雜質(zhì)是抗生素類產(chǎn)品中容易產(chǎn)生的雜質(zhì)，同時(shí)也經(jīng)常與過敏等安全因素相關(guān)[5-6]，因此我們對(duì)兩產(chǎn)品的聚合物雜質(zhì)采用分子排阻色譜法進(jìn)行了對(duì)比測定，測定結(jié)果無差異。

方法：采用高效液相分子排阻色譜法。

流動(dòng)相A：0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液[0.1 mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol/L磷酸二氫鈉溶液（61：39），pH 7.0]，流動(dòng)相B：水，流速：1.5 ml/min，檢測波長：254 nm，進(jìn)樣量 ：100 μl。

對(duì)照品溶液的制備：取頭孢曲松對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每ml約含0.1 mg的溶液。以流動(dòng)相B進(jìn)行測定。

圖2 LC-MS檢測雜質(zhì)分布圖

供試品溶液的制備：取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋成每ml約含20 mg的溶液。以流動(dòng)相A進(jìn)行測定。

限度與計(jì)算：按外標(biāo)法以峰面積計(jì)，含頭孢曲松聚合物以峰面積計(jì)，不得過0.5%。

測定:經(jīng)系統(tǒng)適用性評(píng)價(jià)后對(duì)新亞和原研頭孢曲松鈉的聚合物進(jìn)行測定，結(jié)果分別為新亞樣品含0.39%、原研含0.32%，均符合中國藥典2010版規(guī)定（≤0.5%）。

2.2.3 比旋度與手性分析

頭孢曲松鈉結(jié)構(gòu)中存在多個(gè)手性中心，為避免手性異構(gòu)體雜質(zhì)引起的實(shí)際有效性下降或安全風(fēng)險(xiǎn)增加，各國藥典在標(biāo)準(zhǔn)中都進(jìn)行了考慮，其中中國藥典、日本藥典均采用比旋度進(jìn)行控制[1,7]。美國藥典采用手性高效液相色譜法進(jìn)行控制[8]。

我們?cè)诠ぷ髦?，?duì)比旋度和高效液相手性分離法都進(jìn)行了考查，兩樣品比旋度測定數(shù)據(jù)均符合限度要求。采用美國藥典及其他多種手性固定相分析，均未檢測到其他構(gòu)型的雜質(zhì)。比旋度測定數(shù)據(jù)見表4，高效液相E型異構(gòu)體檢測，未檢出E型異構(gòu)體（圖3）。

表4 比旋度測定數(shù)據(jù)對(duì)比

圖3 異構(gòu)體雜質(zhì)對(duì)比

上述有關(guān)物質(zhì)、聚合物雜質(zhì)、手性雜質(zhì)的數(shù)據(jù)表明，兩產(chǎn)品在有機(jī)雜質(zhì)水平上無明顯差異。

為從不同角度考察兩樣品純度、驗(yàn)證樣品結(jié)構(gòu)的正確性，我們對(duì)兩來源樣品進(jìn)行了元素分析檢測（表5），其結(jié)果均與理論量一致（圖4）。

表5 元素分析測定數(shù)據(jù)(%)

圖4 頭孢曲松鈉的化學(xué)結(jié)構(gòu)和分子式

元素分析數(shù)據(jù)表明，兩樣品在主要元素的組成上，與理論量一致，進(jìn)一步從元素組成上驗(yàn)證了兩樣品的純度和結(jié)構(gòu)的正確性。

2.3 理化相關(guān)指標(biāo)的對(duì)比與分析

首先對(duì)兩樣品的溶解度、澄清度、酸堿度進(jìn)行了考察[9-11]。

2.3.1 澄清度、酸堿度與溶解度

參照中國藥典pH測定、澄清度檢查及溶解度測定相關(guān)要求進(jìn)行測定，兩樣品上述幾項(xiàng)指標(biāo)的測定結(jié)果無明顯差異（表6）。

表6 澄清度、酸堿度、溶解度對(duì)比

2.3.2 粒度、結(jié)晶性與熱分析

從樣品理化特性差異對(duì)比的角度，我們還對(duì)兩樣品的粒度分布、X粉末衍射與差示掃描量熱的特性進(jìn)行了對(duì)比。結(jié)果顯示原研樣品95%粒徑小于9.82 μm，新亞樣品95%粒徑小于51.84 μm。x-粉末衍射與DSC測定結(jié)果無明顯差異。

3 討論

本研究從探尋注射用頭孢曲松鈉國產(chǎn)仿制制劑與原研制劑物質(zhì)基礎(chǔ)差異的角度出發(fā)，對(duì)上海新亞與原研注射用頭孢曲松鈉在含量、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體雜質(zhì)、聚合物雜質(zhì)、臨床用藥、理化特性等方面進(jìn)行了對(duì)比研究。結(jié)果顯示，兩企業(yè)產(chǎn)品在我們所考慮到的影響其有效性、安全性相關(guān)的一系列指標(biāo)上無明顯差異。粉末粒度分布的差異未影響產(chǎn)品宏觀溶解行為，應(yīng)對(duì)產(chǎn)品的有效性與安全性無影響。

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