黃小花，廖詠玲，許 鋒 ，程水源 ，王 燕

（1. 長江大學(xué) 園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025；2. 黃岡師范學(xué)院 經(jīng)濟林木種質(zhì)改良與資源綜合利用湖北省重點實驗室，湖北 黃岡 438000；3. 湖北省林業(yè)廳 科教處，湖北 武漢 438007）

銀杏葉萜內(nèi)酯具有重要的藥用價值，主要用于治療肺虛咳嗽、冠心病、心絞痛、高脂血癥等[1]。萜內(nèi)酯的含量是銀杏葉及其制劑質(zhì)量控制的關(guān)鍵指標(biāo)。其含量較低，一般在0.25%以下[2]。銀杏萜內(nèi)酯按照結(jié)構(gòu)大致可分為銀杏內(nèi)酯（銀杏內(nèi)酯A、B、C和J，縮寫為GA、GB、GC和GJ）和白果內(nèi)酯（BB）2類[3]。有報道稱，銀杏植株不同器官中萜內(nèi)酯含量差異明顯，芽中萜內(nèi)酯含量最高，其次為葉片，莖中含量最低，不同器官中GA、GB、GC和BB 4 種萜內(nèi)酯所占比例差異明顯[4]；萜內(nèi)酯含量與植株性別、樹齡、光照、水肥管理以及不同采收季節(jié)等緊密相關(guān)[5-9]。但目前對不同枝型和葉位銀杏葉萜內(nèi)酯含量變化進(jìn)行的系統(tǒng)研究鮮有報道，本試驗中以銀杏家佛手為研究對象，通過對不同枝型的萜內(nèi)酯含量分布及年周期變化進(jìn)行研究，找到適宜采葉枝型、適宜的采葉期，旨在為銀杏葉分級采收提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗中所選銀杏品種為“家佛手”，來自于長江大學(xué)園藝園林學(xué)院銀杏基地的15年生嫁接樹，樹勢中等，正常掛果，株行距為2 m×3 m。從2006年5月15日至2006年11月18日，每隔15 d采樣1次，每次采樣時間為上午7:00～8:00，防止溫度差異和節(jié)奏現(xiàn)象對萜內(nèi)酯含量的影響。在試驗樹冠外圍中部各方位采摘大小均勻、葉色一致、無傷病的葉片。采樣后，迅速將葉片放入冰盒中30 min內(nèi)帶回實驗室，將葉片洗凈，置105 ℃烘箱中殺酶15 min，轉(zhuǎn)至80 ℃烘干至恒質(zhì)量。所有樣品粉碎，分別用干燥器貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

不同枝條類型即雄葉叢枝、雌葉叢枝、雄長枝、雌長枝、雌短枝的銀杏葉總萜、GA、GB、GC和BB含量均采用大口徑毛細(xì)管氣相色譜法[10-12]測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用Excel 2003和DPS 7.0（Data Processing System）軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，差異顯著性分析采用Duncan’s新復(fù)極差檢驗法。

2 結(jié)果與分析

2.1 雄葉叢枝銀杏樹葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律

雄葉叢枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律如圖1所示。從5月15日采樣開始，雄葉叢枝的銀杏葉總萜內(nèi)酯含量呈遞增趨勢，9月初達(dá)到1年中的最大值，即0.31%，之后含量下降；1年之中僅有1個最高峰值，沒有高峰期；在8月初到9月中旬，總萜內(nèi)酯的含量均在0.25%以上，達(dá)到文獻(xiàn)[1]中規(guī)定的藥用銀杏葉萜內(nèi)酯含量標(biāo)準(zhǔn)。在所測定的4種萜內(nèi)酯中，BB含量先緩緩上升，在7月初達(dá)到1年中最大值（0.06%），此后含量緩緩下降（0.06%～0.04%），10月中旬下降到檢測限以下。GA含量豐富，其含量占總萜內(nèi)酯的40%～56%。GA含量變化規(guī)律與總萜內(nèi)酯的變化規(guī)律基本一致，即先增加，9月初達(dá)到最大值（0.15%），然后緩緩下降至最低值0.05%。GB、GC含量均維持在較低水平，且變化不顯著。但是GC和GB含量在9月初到11月初均在峰值上下波動，差異不大，即高峰期。

圖1 雄葉叢枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的季節(jié)變化Fig.1 Seasonal variation of the terpene lactones contents in leaves from male leafage branch in Ginkgo biloba

2.2 雌葉叢枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律

雌葉叢枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律如圖2所示。雌葉叢枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的變化規(guī)律總體上呈先升后降的趨勢。6月初無論是GA、GB、BB還是總萜含量均迅速下降，到6月中旬除BB以外，均下降到全年最低值，然后又迅速上升，直至出現(xiàn)最大值。但各種萜內(nèi)酯含量到達(dá)高峰值的時間各異，BB為7月中旬（0.06%），GA為9月初（0.13%），GB為10月中旬（0.07%），GC和總帖為9月中旬（0.05%、0.29%）。除BB外，其它萜內(nèi)酯含量均有1個高峰期，總萜和GA含量從9月初至10月初在最大值周圍波動；而GB、GC的高峰期較長，從8月初一直到11月初。

圖2 雌葉叢枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的季節(jié)變化Fig.2 Seasonal variation of the terpene lactones contents in leaves from female leafage branch in Ginkgo biloba

雌葉叢枝銀杏葉4種萜內(nèi)酯的變化規(guī)律與雄葉叢枝類似，變化曲線較雄葉叢枝平緩。GA含量最為豐富，其含量占總萜內(nèi)酯含量的35%～61%。GB和GC含量低，變化規(guī)律較一致，落葉前含量基本穩(wěn)定，變化差異不顯著。不同的是雌葉叢枝的銀杏葉萜內(nèi)酯含量存在高峰期。

2.3 雄長枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律

雄長枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律如圖3所示。圖3中結(jié)果表明，GA含量最為豐富，占總萜內(nèi)酯的29%～58%，其含量變化規(guī)律可以代表總萜內(nèi)酯的變化規(guī)律，在9月初，GA和總萜內(nèi)酯含量分別達(dá)到1年中的最大值（0.14%，0.27%），而后含量開始下降，無高峰期。除9月初外，其它時期總萜內(nèi)酯的含量均在0.25%以下，低于文獻(xiàn)[1]中規(guī)定的藥用銀杏葉萜內(nèi)酯含量標(biāo)準(zhǔn)。BB的含量在8月以前穩(wěn)中有升，8月中旬達(dá)全年最大值0.06%，然后迅速下降，至10月中旬下降到檢測值以下；GB含量在采樣初期為1個高峰值（0.05%），然后下降，在9月初達(dá)到第2個高峰值（0.05%），此后再下降。GC含量先穩(wěn)中有升，在9月初達(dá)到全年的最大值，落葉前基本穩(wěn)定。

圖3 雄長枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的季節(jié)變化Fig.3 Seasonal variation of the terpene lactones contents in leaves from male long branch in Ginkgo biloba

2.4 雌長枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律

雌長枝銀杏葉總萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律如圖4所示。圖4中結(jié)果表明，從采樣開始雌長枝總萜內(nèi)酯含量逐漸增加，到9月初達(dá)到1年中的最大值（0.31%），而后開始下降，雌長枝的總萜內(nèi)酯含量在8月初到10月初基本穩(wěn)定（0.27%～0.31%），即有一個較長時間的高峰期，且高峰期總萜內(nèi)酯的含量均在0.25%以上，達(dá)到文獻(xiàn)[1]中規(guī)定的藥用銀杏葉萜內(nèi)酯含量標(biāo)準(zhǔn)；雌長枝總萜內(nèi)酯含量到達(dá)1年中最大值的時間與雌葉叢枝相一致，且均有1個高峰期，但雌長枝的高峰期持續(xù)時間更長。4種萜內(nèi)酯含量中，GA含量最為豐富，其含量占總萜內(nèi)酯的33%～52%，GA和GC含量均在9月初達(dá)高峰值（0.13%、0.06%），且持續(xù)到11月初；GB在10月初達(dá)最大值（0.07%），但是從8月初到11月初，GB含量一直在高峰值左右微小波動，這與雌葉叢枝相類似；BB的含量先平穩(wěn)上升，在8月中旬達(dá)到1年中的最大值，此后含量逐漸下降到檢測限以下。

圖4 雌長枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的季節(jié)變化Fig.4 Seasonal variation of the terpene lactones contents in leaves from female long branch in Ginkgo biloba

2.5 雌短枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律

雌短枝銀杏葉總萜內(nèi)酯含量的年變化規(guī)律如圖5所示。由圖5可知，從7月3日采樣開始，雌短枝總萜內(nèi)酯含量呈上升趨勢，到10月初達(dá)到1年中的最大值（0.25%），而后含量開始下降。除高峰值外，其它時期總萜內(nèi)酯的含量均在0.25%以下，低于文獻(xiàn)[1]中規(guī)定的藥用銀杏葉萜內(nèi)酯含量標(biāo)準(zhǔn)。在所測定的4種萜內(nèi)酯中，BB的含量先平穩(wěn)上升，在8月中旬達(dá)到1年中的最大值（0.09%），此后含量逐漸下降到檢測限以下。GA含量最為豐富，其含量占總萜內(nèi)酯含量的26%～45%。GA含量的變化規(guī)律與總萜內(nèi)酯的變化規(guī)律基本一致，10月初達(dá)到最高值（0.11%），而后開始下降。GB和GC含量較低，其變化規(guī)律較一致，在10月初達(dá)到1年中的最大值（0.06%、0.04%），此后含量逐漸下降。

圖5 雌短枝銀杏葉萜內(nèi)酯含量的季節(jié)變化Fig.5 Seasonal variation of the terpene lactones contents in leaves from female short branch in Ginkgo biloba

3 結(jié)論與討論

由本試驗中銀杏葉各萜內(nèi)酯含量年周期變化可知，不同枝型的不同萜內(nèi)酯含量不同，最大值出現(xiàn)的時間也不同，經(jīng)分析可以得知，GA含量是所有枝型中所測內(nèi)酯含量最為豐富的，其高峰值出現(xiàn)的時間也相對比較集中，除雌短枝在10月初到達(dá)含量的高峰外，其它均在9月初達(dá)到高峰，而雄樹GA的含量高于雌樹，無論雌、雄樹，葉叢枝的含量高于長枝，雌短枝的含量最低。雌樹銀杏葉GB含量高于雄樹，與GA的結(jié)果相反；葉叢枝GB含量高于長枝，與GA的結(jié)果相同。雄葉叢枝、雄長枝、雌長枝GC含量高峰到達(dá)時間（9月初）較雌葉叢枝（9月中旬）和雌短枝（10月初）早半個月到1個月，雌長枝GC含量最高，雄長枝GC含量最低。雄葉叢枝的BB含量高峰時間到達(dá)最早，為7月初，雄長枝、雌長枝和雌短枝為8月中旬；不同枝型銀杏葉BB含量高峰值最大的是雌短枝，最小的是雌葉叢枝。不同枝型中，除雌短枝外，其它枝類葉總萜內(nèi)酯含量均在9月達(dá)到1年中的最大值，雄葉叢枝與雌長枝總萜內(nèi)酯含量顯著高于雌葉叢枝與雄長枝，雌短枝總萜內(nèi)酯含量值顯著低于雌葉叢枝和雌長枝。

關(guān)于雌、雄銀杏樹葉萜內(nèi)酯含量，文獻(xiàn)研究報道不一，陳學(xué)森等[9]、范怡梅等[10]認(rèn)為雌株的銀杏萜內(nèi)酯含量高于雄株；van Beek[13]認(rèn)為二者之間沒有差異或差異不明顯。從本研究結(jié)果來看，這些觀點均有失偏頗，不同枝型銀杏葉萜內(nèi)酯的含量不同，就最高峰時總萜的絕對含量來說，雄葉叢枝葉最高，雌長枝葉、雌葉叢枝葉、雄長枝葉、雌短枝葉含量依次減小。所以，不能絕對地說雄樹葉萜內(nèi)酯含量高于雌樹葉，或者說雌樹葉萜內(nèi)酯含量高于雄樹葉，也不能武斷地說葉叢枝葉萜內(nèi)酯含量高于長枝葉。

不同枝型葉發(fā)育進(jìn)程不同，各銀杏葉萜內(nèi)酯到達(dá)含量高峰的時間和含量值也不同。本試驗結(jié)果表明，無論是雌樹還是雄樹，各萜內(nèi)酯含量最大值的出現(xiàn)時間主要集中在9月，這與陳學(xué)森等[9]的研究結(jié)果相一致。生產(chǎn)上若以內(nèi)酯為主要目的成分，采收的最適宜季節(jié)為9月，這與戚向陽[14]的研究結(jié)果一致，但與郁青等[15]、陳學(xué)森等[9]的結(jié)果有一定的差異，這可能與銀杏葉的產(chǎn)地、品種、樹齡以及生長期等條件的不同有關(guān)。所以具體采收時間還應(yīng)視生產(chǎn)需求以及品種自身的條件和生長環(huán)境等情況而定，不同萜內(nèi)酯含量在不同周期出現(xiàn)最大值的時間不同。另外，本試驗中結(jié)果顯示，雌樹長枝的萜內(nèi)酯含量要高于短枝，雄樹從枝的萜內(nèi)酯含量要高于長枝，生產(chǎn)上一般以總萜含量的高低作為采收的標(biāo)準(zhǔn)，因此，建議在生產(chǎn)上采取對雄樹控制長枝，對雌樹整合多發(fā)長枝的修剪方案，這有利于提高銀杏葉萜內(nèi)酯含量的，這與程水源提高銀杏葉黃酮含量的修剪方案相一致[16]。

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