萬 霖，王養(yǎng)民，藍(lán) 天，張 斌，宋靈敏，張玉英

持續(xù)暴露在高原低氧環(huán)境下可對精液質(zhì)量產(chǎn)生一定的負(fù)面影響[1-2]，且這種負(fù)面影響隨著海拔高度的增加而加重[3]。目前，國內(nèi)外研究結(jié)果多認(rèn)為導(dǎo)致精子濃度降低可能與精子生成減少、精子DNA損傷升高及性激素水平變化等密切相關(guān)[4-8]，精子生成減少與性激素水平改變及睪丸組織損傷有關(guān)[4，7-8]。血清抑制素B(inhibin B，INHB)由睪丸支持細(xì)胞分泌，直接反映Sertoli細(xì)胞的功能，是精子發(fā)生的血清學(xué)標(biāo)志物，反映睪丸生精功能，為進(jìn)一步睪丸活檢提供相關(guān)依據(jù)[9]，是臨床評價(jià)生育能力的重要指標(biāo)。雖然血清INHB在評價(jià)男性生育功能及睪丸生精功能方面起著非常重要的作用，但目前尚未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)入高原低氧環(huán)境后人血清INHB水平的變化及意義。因此，本研究擬通過檢測生活在海拔1 500 m的健康男性與進(jìn)入高原低氧環(huán)境6個(gè)月后的健康男性的精子濃度與血清INHB水平，了解進(jìn)入高原低氧環(huán)境后睪丸功能的變化。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2010年11月—2012年5月42例進(jìn)入高原低氧環(huán)境(海拔3 200 m)生活6個(gè)月后健康男性作為試驗(yàn)組，30例生活在海拔1 500 m的健康男性作為對照組。對照組精液質(zhì)量均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)男性精液質(zhì)量正常標(biāo)準(zhǔn)。兩組受試者年齡為20～38歲。排除泌尿生殖系統(tǒng)炎癥、精索靜脈曲張、前列腺炎及隱睪癥等影響男性精液質(zhì)量的疾病。

1.2方法

1.2.1主要試劑和儀器人血清INHB ELISA試劑盒(蘭州科美特生物有限公司)；WLJY-9000精子分析儀；低速離心機(jī)；37 ℃恒溫水浴箱；酶標(biāo)儀。

1.2.2標(biāo)本的采集及處理采集兩組受試者血液及精液標(biāo)本。于早晨9：00～9：30抽取空腹外周靜脈血約3 ml，注入血清分離管，室溫自然凝固10～20 min，離心半徑13.5 cm，3 000 r/min離心20 min后收集血清，4 ℃保存待檢。精液收集采取手淫方式(禁欲5～7 d后，每日15時(shí)采集)，其中試驗(yàn)組在進(jìn)入高原低氧環(huán)境6個(gè)月后采集。精液采集后，37 ℃溫育30 min，待完全液化后檢測精子濃度。

1.2.3檢測方法按WHO男性精液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測兩組受檢者的排精量及精子濃度。采用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人血清INHB水平，試驗(yàn)過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。加樣完畢后，用酶標(biāo)儀在450 nm波長測吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度計(jì)算出兩組受檢者的血清INHB水平。

2　結(jié)果

2.1兩組精子指標(biāo)及血清INHB水平檢測結(jié)果試驗(yàn)組精子濃度符合WHO男性精液質(zhì)量正常標(biāo)準(zhǔn)者19例，精子濃度降低者23例。兩組受檢者排精量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而精子濃度及血清INHB水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

Table1Comparison of sperm indicators and serum INHB between two groups

組別例數(shù)排精量(ml)精子濃度(×109/L)血清INHB水平(ng/L)對照組303.22±0.1174±11197±21試驗(yàn)組423.01±0.0837±7156±15t值4.352.345.51P值>0.05<0.05<0.05

注：INHB=抑制素B

2.2兩組血清INHB水平與精子濃度的關(guān)系兩組受檢者血清INHB水平與精子濃度均呈正相關(guān)(對照組：r=0.82，P<0.05；實(shí)驗(yàn)組：r=0.87，P<0.05)。

3　討論

男性生殖系統(tǒng)內(nèi)分泌腺包括下丘腦、垂體和睪丸，3者組成下丘腦-垂體-性腺軸，共同調(diào)節(jié)生殖器官的生長發(fā)育和維持正常生殖功能[4]。下丘腦分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)，調(diào)控垂體促性腺激素黃體生成素(LH)和促卵泡激素(FSH)的分泌；LH作用于睪丸的間質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞增生，分泌雄激素；FSH作用于睪丸的支持細(xì)胞，促進(jìn)精子的形成。對男性及動(dòng)物血清性激素水平的檢測結(jié)果多表明長期暴露在高原低氧環(huán)境下，血清睪酮水平呈下降趨勢[4]，移居高原低氧環(huán)境生活20 d后，垂體促皮質(zhì)激素與促性腺激素增多，而靶腺激素卻未相應(yīng)升高[10]。而睪丸組織損傷目前多采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法，均提示睪丸生精上皮及間質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。但目前關(guān)于人睪丸組織損傷情況相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少。血清INHB由睪丸支持細(xì)胞分泌，是下丘腦-垂體-性腺軸的重要組成成員[11]。FSH刺激睪丸產(chǎn)生血清INHB，而血清INHB則通過負(fù)反饋抑制垂體分泌FSH。血清INHB與血清FSH呈負(fù)相關(guān)，與精子濃度、睪丸體積及生精上皮呈正相關(guān)[12]。

本研究通過對30例海拔1 500 m健康男性及42例進(jìn)入高原低氧環(huán)境6個(gè)月后健康男性的精子濃度及血清INHB水平檢測，結(jié)果顯示進(jìn)入高原低氧環(huán)境下6個(gè)月后健康男性精子濃度及血清INHB水平較海拔1 500 m健康男性降低，提示進(jìn)入高原低氧環(huán)境導(dǎo)致男性精子濃度降低，可能與高原低氧環(huán)境下睪丸生精功能受損，特別是睪丸支持細(xì)胞的損傷，引起睪丸生精功能降低，從而導(dǎo)致精子濃度降低。但是目前進(jìn)入高原低氧環(huán)境后對睪丸支持細(xì)胞和生殖細(xì)胞影響的先后次序及具體機(jī)制報(bào)道較少。目前，臨床中精液質(zhì)量常規(guī)檢測結(jié)果、體格檢查及彩色多普勒超生檢查并不能準(zhǔn)確評估睪丸的生精功能以及預(yù)測患者生精功能的改善情況。血清INHB作為睪丸支持細(xì)胞的產(chǎn)物，可以作為精子發(fā)生的精確指標(biāo)，是精子發(fā)生的血清學(xué)標(biāo)志物，可以用于臨床男性不育的評估，在男性生殖功能的調(diào)節(jié)中起著非常重要的作用。對男性血清INHB水平的檢測有助于了解進(jìn)入高原低氧環(huán)境后男性精液濃度的變化及睪丸生精功能的損傷程度，為下一步改善高原低氧環(huán)境對男性生育能力的影響提供可靠依據(jù)。

進(jìn)入高原低氧環(huán)境后引起男性精液質(zhì)量下降及睪丸細(xì)胞損傷，導(dǎo)致精子發(fā)生降低的確切機(jī)制至今尚無統(tǒng)一定論。國內(nèi)外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果多認(rèn)為曲細(xì)精管和間質(zhì)細(xì)胞受損的程度越嚴(yán)重，對精液質(zhì)量及生育能力的影響就會(huì)越大[13]。本研究觀察到進(jìn)入高原低氧環(huán)境6個(gè)月后，血清INHB水平與精子濃度呈正相關(guān)，精子濃度降低，血清INHB水平亦降低，說明睪丸生精功能受損。但目前尚不能明確進(jìn)入高原低氧環(huán)境后對睪丸功能的損傷是否為不可逆性，若為可逆性損傷，睪丸功能需多長時(shí)間可基本恢復(fù)原先水平，有待進(jìn)一步研究。但作為直接反映支持細(xì)胞功能的血清標(biāo)志物，血清INHB水平可以作為進(jìn)入高原低氧環(huán)境后男性生精功能的狀態(tài)及離開高原低氧環(huán)境后男性生精功能的恢復(fù)程度提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

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