陳 瑞，朱圣東，楊 武，薛華波，唐守運(yùn)

（1．皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽 六安 237012；2．武漢工程大學(xué)化工與制藥學(xué)院，湖北 武漢 430074；3．安徽省植物生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心，安徽 六安 237012）

0 引 言

植物纖維［1］是世界上最為豐富的可再生資源，以植物纖維為原料生產(chǎn)燃料乙醇的潛力巨大，特別是農(nóng)業(yè)與林業(yè)廢棄物，如稻草、玉米秸稈、竹屑等，以它們?yōu)樵仙a(chǎn)酒精，不僅可以增加農(nóng)民收入，提高其附加值，而且可以消除其處置不當(dāng)造成的環(huán)境污染．纖維素［2］、半纖維素［3］和木質(zhì)素［4］是竹子的主要化學(xué)組分，同時(shí)也是構(gòu)成竹子細(xì)胞壁的支持骨架．其中由D－葡萄糖以β－1，4糖苷鍵組成的大分子多糖纖維素組成微細(xì)纖維，構(gòu)成纖維細(xì)胞壁的網(wǎng)狀骨架，而半纖維素和木質(zhì)素則是填充在纖維之間的“粘合劑”和“填充劑”．半纖維素指在植物細(xì)胞壁中與纖維素共生、可溶于堿溶液，遇酸后遠(yuǎn)較纖維素易于水解的那部分植物多糖．一種植物往往含有幾種由兩或三種糖基構(gòu)成的半纖維素，其化學(xué)結(jié)構(gòu)各不相同．

纖維素不溶于水和乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑．水可使纖維素發(fā)生有限溶脹，某些酸、堿和鹽的水溶液可滲入纖維結(jié)晶區(qū)，產(chǎn)生無限溶脹，使纖維素溶解．纖維素加熱到約150℃時(shí)不發(fā)生顯著變化，超過這溫度會(huì)由于脫水而逐漸焦化．纖維素與較濃的無機(jī)酸起水解作用生成葡萄糖等，與較濃的苛性堿溶液作用生成堿纖維素，與強(qiáng)氧化劑作用生成氧化纖維素．植物纖維素的酶水解的效率受植物纖維素的可及度［5］、結(jié)晶度［6］、木質(zhì)素和半纖維素的含量及纖維素的結(jié)合方式影響．植物纖維素原料預(yù)處理的目的是解除木質(zhì)素和半纖維素對(duì)纖維素的封閉，瓦解纖維素的晶體結(jié)構(gòu)，增加其可及度，提高酶的水解效率．

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 材 料

儀器：電熱恒溫干燥箱（202－I型）、粉碎機(jī)、索氏提取器、旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器、TU3000－752型分光光度計(jì)、高速冷凍離心機(jī)、高壓滅菌鍋、振蕩培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH－2）、微波爐（LG）．

試劑：磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、氯仿、甲醇、丙酮、二甲基亞砜、草酸銨、氫氧化鉀、硼氫化鈉、硝酸、硫酸、鹽酸、蒽酮、苔黑酚、葡萄糖、木糖以上試劑均為國產(chǎn)分析純．纖維素酶采用的是上海博奧生物技術(shù)公司生產(chǎn)的李氏纖維素酶．

1．2 方 法

1．2．1 竹子化學(xué)成分的測定 將已粉碎過的竹屑在65℃條件下烘干4 h．混勻，稱取0．100 0 g干重樣品于研缽中，加入2 m L p H 7．0的0．5 mol／L磷酸緩沖液，研磨15 min，混勻后加入離心管中，定容．4 mol／L KOH提取半纖維素，于沉淀中加入5 m L 4 mol／L的KOH（內(nèi)含1 mg／m L的Na HB4），室溫下提取1 h．在這期間每隔10 min，離心，收集上清．收集所有上清液，定容，測糖含量［7］．于沉淀中加入5 m L乙酸－硝酸－水（8∶1∶2，v／v／v）在沸水浴中加熱1 h，在這期間每隔10 min 1次，離心，沉淀再用5 m L蒸餾水洗2次．收集所有上清液，定容．在纖維素沉淀中（約30 mg）加入2 m L 67%（v／v）硫酸，在30℃搖床（100 r／min）振蕩1 h，加蒸餾水至10 m L，離心，蒽酮／硫酸法測六碳糖含量［8］．

1．2．2 竹屑的預(yù)處理和糖化 稱取20 g干燥竹屑，加入盛有160 m L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的NaOH溶液中，放入微波爐中，在設(shè)定功率處理規(guī)定時(shí)間，離心，測上清液五碳糖和六碳糖含量，沉淀用作糖化的底物［9］，加入裝有20 m L p H 為4．8的0．1 mol／L的檸檬酸緩沖液中，加入纖維素酶20 U／g，于45℃、150 r／min糖化7 d，每隔24 h進(jìn)行還原糖分析［10］．

1．2．3 糖化最佳工藝條件的優(yōu)化 當(dāng)對(duì)竹屑的預(yù)處理方法發(fā)生改變時(shí)，預(yù)處理后糖化的最佳工藝條件也可能發(fā)生變化，為了得到微波與堿聯(lián)合處理的竹屑糖化最佳工藝條件［11］，按照表1設(shè)計(jì)3因素3水平的正交試驗(yàn)．

表1 糖化正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels of the orthogonal experiment

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合線性方程：

y＝107x－1．202，R2＝0．996．

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig．1 Standard curve of glucose

圖2 木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig．2 Standard curve of oxylose

2．2 木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

擬合線性方程：y＝38．98x＋0．633，R2＝0．998．

2．3 竹子的化學(xué)組成

竹子的化學(xué)組成主要是纖維素、半纖維素和木質(zhì)素．竹子各種屬的纖維形態(tài)差別不大，是一種非常好的纖維提取原料．表2為斑竹園、長嶺和江店三個(gè)地區(qū)竹子中纖維素、半纖維素、木質(zhì)素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)．

表2 竹子的化學(xué)組成Table 2 Composition of bamboo ／%

此外，實(shí)驗(yàn)測得竹子中可溶性糖的質(zhì)量含量為0．85%，竹子中淀粉的含量為2．46%，果膠的含量為1．41%，與纖維素半纖維素的含量相比較低．纖維素和半纖維素是竹子的主要化學(xué)組分，是一種較為理想的用作生產(chǎn)酒精的植物纖維素原料．

2．4 微波預(yù)處理對(duì)酶解糖化的影響

微波功率與處理時(shí)間是影響微波與堿聯(lián)合預(yù)處理竹屑的效果的2個(gè)重要因素，圖3、4、5分別給出了不同微波功率及處理時(shí)間下微波與堿聯(lián)合處理的竹屑的糖化過程．可知3個(gè)不同的功率，均有其對(duì)應(yīng)的最佳處理時(shí)間，功率越高，對(duì)應(yīng)的最佳處理時(shí)間越短．但無論微波功率如何，在最佳處理時(shí)間是還原糖的終濃度變化不大，因此選取700 W處理6 min為最佳預(yù)處理?xiàng)l件．

圖3 微波對(duì)水解糖化的影響（700 W）Fig．3 The effect of microwave／alkali pretreatment on hydrosis

圖4 微波對(duì)水解糖化的影響（500 W）Fig．4 The effect of microwave／alkali pretreatment on hydrosis

圖5 微波對(duì)水解糖化的影響（300 W）Fig．5 The effect of microwave／alkali pretreatment on hydrosis

2．5 糖化最佳工藝條件的優(yōu)化

為了對(duì)微波處理的竹屑糖化工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，按照表3設(shè)計(jì)了正交實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析見表3．表3中的因素離差平方和（S）的大小可以判斷各個(gè)因素對(duì)竹屑水解的影響程度，S值越大，表明其影響程度越大．各因素對(duì)竹屑糖化的影響順序?yàn)椋簻囟茸畲螅赣昧看沃?，p H最?。鶕?jù)表3平均還原糖得率（R值），R值越大，表明該水平還原糖得率越高，由此確定最佳工藝條件為：45℃、p H5．0、酶用量20 U／g．

表3 糖化正交試驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析Table 3 The results and analysis of orthogonal experiment

3 結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)測得竹子中纖維素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為42．51%，半纖維素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21．97%，可知纖維素和半纖維素是竹子的主要化學(xué)組分，是一種較為理想的用作生產(chǎn)酒精的植物纖維素原料．三個(gè)地區(qū)的竹子中纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等含量的不同可能是由于這三個(gè)地區(qū)土壤中C、N、P的含量不同造成的．

微波與堿的聯(lián)合預(yù)處理，可提高竹屑的糖化速度，還原糖的得率基本不變．微波與堿聯(lián)合預(yù)處理時(shí)，微波的最佳條件：700 W，6 min．糖化最佳條件：45℃，p H5．0，每克底物用酶量20 U／g．

致謝

感謝六安市科技局的資金支持．

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