付士龍等

摘 要：采用葉碟法測定了半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾3齡幼蟲的選擇性拒食活性和非選擇性拒食活性。結(jié)果表明：半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾3齡幼蟲具有明顯的拒食作用，拒食率與濃度呈正相關(guān)，當(dāng)濃度為100mg/mL時(shí)，其24h選擇性拒食率可達(dá)85.37%，非選擇性拒食率為86.78%。在選擇性拒食試驗(yàn)中，提取物對(duì)3齡幼蟲的AFC50分別為32.107mg/mL（24h）和43.594mg/mL（48h）；在非選擇性拒食試驗(yàn)中，提取物對(duì)3齡幼蟲的AFC50分別為14.459mg/mL（24h）和21.527mg/mL（48h）。以上結(jié)果表明，半夏乙醇提取物具有很好的研究價(jià)值和實(shí)踐意義。

關(guān)鍵詞：半夏；乙醇提取物；甜菜夜蛾；殺蟲活性

中圖分類號(hào) Q969.436.4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1007-7731（2013）09-24-03

甜菜夜蛾Spodoptera exigua（Hübner）屬鱗翅目夜蛾科灰翅夜蛾屬，是一種世界性多食性農(nóng)業(yè)害蟲，可取食35科108屬138種植物，包括多種作物和蔬菜[1-2]。該蟲于20世紀(jì)80年代中后期在我國危害嚴(yán)重，現(xiàn)已成為大田作物和蔬菜作物的主要害蟲之一，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3]。長期以來，對(duì)該蟲的防治主要依靠化學(xué)農(nóng)藥，頻繁用藥造成該蟲抗藥性越來越高，因此篩選高效低毒防效持久的新型農(nóng)藥對(duì)其治理有重要意義[4-5]。

從植物中篩選和發(fā)現(xiàn)化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎、對(duì)環(huán)境安全、選擇性高的殺蟲活性物質(zhì)，進(jìn)而開發(fā)出具有一定作用特點(diǎn)的植物源農(nóng)藥是新農(nóng)藥開發(fā)研究的一個(gè)重要方面[6-7]。半夏的原植物為天南星科植物半夏Pinelliu ternata Breit，以塊莖入藥，是我國的傳統(tǒng)中藥，其性溫、味辛、有毒，不僅具有降逆止嘔、燥濕化痰、消痞散節(jié)的功效，而且具有抗早孕、驅(qū)蚊、殺蟲等功效[8-10]。課題組已報(bào)道半夏提取液對(duì)小菜蛾、菜青蟲、棉蚜、桃蚜等有較好的殺蟲活性[11-16]，但有關(guān)半夏對(duì)甜菜夜蛾的生物活性研究目前國內(nèi)外未見報(bào)道。本文選擇暴食性甜菜夜蛾為供試?yán)ハx，對(duì)其進(jìn)行拒食活性研究，為半夏作為生物農(nóng)藥的開發(fā)提供了一定的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)與理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲源 甜菜夜蛾采自淮北市無公害蔬菜種植基地，用人工飼料飼養(yǎng)至第三代，測試時(shí)選擇3齡期生理狀態(tài)一致的健康幼蟲。室內(nèi)溫度控制在（26±1）℃，光周期L∶D=14∶10h，相對(duì)濕度RH70%～80%。

1.2 半夏及提取物制備

1.2.1 提取物制備 半夏采自淮北師范大學(xué)半夏試驗(yàn)基地，自然晾干，然后將半夏塊莖用多功能食品粉碎機(jī)粉碎，過40目篩制成干粉；采用索式提取法提取，即準(zhǔn)確稱取干粉50g，用95%乙醇溶劑索式提取10h，然后分別將提取液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)減壓濃縮至稠膏狀。將稠膏用丙酮稀釋定容至50mL（1mL中含1g干粉），然后分別裝入棕色廣口瓶置于冰箱中備用。

1.2.2 提取液稀釋 將供試半夏95%乙醇提取物用濃度為0.1%十二烷基硫酸鈉水溶液稀釋100.0、75.0、50.0、25.0和12.5mg/mL，對(duì)照為0.1%十二烷基硫酸鈉水溶液稀釋后的丙酮溶液。

1.3 拒食活性測定 采用浸漬葉碟法[13]，即將新鮮甘藍(lán)葉片用圓形打孔器（φ=1.5cm）打成葉碟，分別放人處理藥液和對(duì)照溶液中浸漬5s，待葉碟上溶液揮發(fā)后，放入直徑為9cm的保濕培養(yǎng)皿中。選擇性拒食作用試驗(yàn)中，每皿內(nèi)等距離放4個(gè)葉碟，對(duì)照、處理葉碟各2個(gè)，十字交叉型排列；非選擇性拒食作用試驗(yàn)中，每皿內(nèi)放4個(gè)處理葉碟，另設(shè)對(duì)照。放入饑餓了3h的3齡中期幼蟲，每皿5頭作為1次重復(fù)，重復(fù)6次。然后把供試幼蟲放入溫度（26±1）℃，光周期L∶D=14∶10h，相對(duì)濕度70%～80%的培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)，分別于24h、48h后用座標(biāo)紙測量出被取食的葉面積，根據(jù)下式計(jì)算拒食率，然后將拒食率轉(zhuǎn)化為幾率值、濃度轉(zhuǎn)化成對(duì)數(shù)后進(jìn)行線性回歸，計(jì)算拒食中濃度（AFC50）。

選擇性拒食率（%）=[對(duì)照取食量-處理取食量對(duì)照取食量+處理取食量×100]

非選擇性拒食（%）=[對(duì)照取食量-處理取食量對(duì)照取食量×100]

1.4 數(shù)據(jù)處理 用SPSS19.0和EXCEL2007軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)分組分析，數(shù)據(jù)之間的差異用DMRT法進(jìn)行比較。直線回歸的參數(shù)采用最小二乘法估計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾的選擇性拒食活性 半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾選擇性拒食活性測定結(jié)果見表1，提取物對(duì)甜菜夜蛾的選擇性拒食活性隨濃度升高而增強(qiáng)，取食面積隨濃度升高而減少，當(dāng)濃度為100mg/mL時(shí)，其24h選擇性拒食率可達(dá)85.37%。提取物對(duì)甜菜夜蛾3齡幼蟲選擇性拒食作用毒力回歸方程分別為Y=-0.545+0.017x（24h）和Y=-0.600+0.014x（48h），拒食中濃度AFC50分別為32.107mg/mL（24h）和43.594mg/mL（48h）（見表3）。試驗(yàn)中觀察到，經(jīng)24h饑餓處理的試蟲放入培養(yǎng)皿后，大部分首先取食對(duì)照葉碟，而后開始嘗試取食藥液處理葉碟，但取食速度越來越慢；極少數(shù)試蟲首先取食藥液處理葉碟。

2.2 半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾的非選擇性拒食活性 在非選擇性拒食活性試驗(yàn)中，半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾3齡幼蟲拒食作用明顯，拒食率與濃度呈正相關(guān)，當(dāng)濃度為100mg/mL時(shí)，其24h非選擇性拒食率為86.78%（見表2）。提取物對(duì)甜菜夜蛾3齡幼蟲非選擇性拒食作用毒力回歸方程分別為Y=-2.170+0.015x（24h）和Y=-0.307+0.014x（48h），拒食中濃度AFC50分別為14.459mg/mL（24h）和21.527mg/mL （48h）（見表3）。在非選擇性拒食活性試驗(yàn)中，饑餓處理的試蟲在放入培養(yǎng)皿后，對(duì)照組葉碟很快被取食，而藥液處理葉碟雖被取食但速度較慢。經(jīng)過一段時(shí)間后，對(duì)照組葉碟試蟲未見異常，但處理葉碟組試蟲出現(xiàn)中毒癥狀。

3 結(jié)論與討論

拒食活性是殺蟲植物對(duì)植食性昆蟲普遍具有的作用方式[6、13、17-20]。在實(shí)驗(yàn)室，一般通過選擇性試驗(yàn)和非選擇性試驗(yàn)來測定提取物的拒食活性[13]。本試驗(yàn)首次報(bào)道了半夏提取物對(duì)甜菜夜蛾的拒食活性，驗(yàn)結(jié)果表明，半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾3齡幼蟲具有較強(qiáng)的拒食作用，無論是在選擇性拒食條件下，還是在非選擇性拒食條件下，隨著提取物濃度的升高，甜菜夜蛾的采食量逐漸減少，拒食活性逐漸增強(qiáng)。表明半夏乙醇提取物中存在某類或幾類物質(zhì)，可能使甜菜夜蛾取食帶藥葉碟后，中腸結(jié)構(gòu)遭到破壞、昆蟲中毒、蟲體內(nèi)營養(yǎng)條件惡化等一系列生理生化狀態(tài)改變，也可能是化學(xué)物質(zhì)直接作用于甜菜夜蛾的神經(jīng)系統(tǒng)，造成神經(jīng)系統(tǒng)的不正常放電，阻止其獲得正確的味覺信息，從而不能做出正確的取食反應(yīng)，這些機(jī)理還有待于研究。

根據(jù)昆蟲對(duì)拒食劑引起的行為反應(yīng)及相應(yīng)的時(shí)間因素，可將其分為絕對(duì)拒食劑和相對(duì)拒食劑兩種類型。絕對(duì)拒食劑指昆蟲對(duì)其表現(xiàn)出持續(xù)性，最后因饑餓而死；相對(duì)拒食劑指在一定的時(shí)間內(nèi)可抑制昆蟲的取食，但當(dāng)受試?yán)ハx饑餓到一定程度時(shí)又開始取食[17-19]。本試驗(yàn)中半夏乙醇提取物的拒食活性均隨處理時(shí)間的延長而逐漸減弱，故認(rèn)為該類物質(zhì)的拒食作用類型應(yīng)屬于第二類，其拒食作用效果減弱的原因可能是隨處理時(shí)間的推移，甜菜夜蛾3齡幼蟲的化學(xué)感受器的敏感性會(huì)隨接觸特定刺激的延長而明顯下降，其具體原因有待進(jìn)一步研究。

在實(shí)際應(yīng)用中，拒食劑可與其他防治藥劑聯(lián)合使用，采取“拒、誘、殺”（Push-Pull-Kill）策略控制害蟲，這一策略已經(jīng)在一些森林害蟲和農(nóng)業(yè)害蟲的防治工作中進(jìn)行了嘗試，并取得了成功[20]。本試驗(yàn)結(jié)果表明半夏乙醇提取物對(duì)甜菜夜蛾的拒食作用較好，具有一定的應(yīng)用前景。

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