（山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030001）

溴氰菊酯（deltamethrin）是一種常見擬除蟲菊酯類低毒性農(nóng)藥，農(nóng)業(yè)上多與其他種類的殺蟲劑混配使用。由含溴氰菊酯的殺蟲劑引起中毒或服用溴氰菊酯自殺的事件時(shí)有報(bào)道[1-2]。目前，溴氰菊酯的檢測大多局限于水樣、水產(chǎn)品及果蔬等農(nóng)藥殘留量的測定，部分學(xué)者[3]還對溴氰菊酯代謝物的檢測進(jìn)行了研究，而動(dòng)物體內(nèi)溴氰菊酯的研究少有報(bào)道。本研究建立溴氰菊酯灌胃急性中毒大鼠模型，氣相色譜-電子捕獲檢測器法（gas chromatography-electron capture detector，GCECD）定量檢測，探討溴氰菊酯在急性中毒大鼠體內(nèi)的分布情況。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試劑

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性大鼠24只，體質(zhì)量約200g，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品（2mg/mL）購自公安部物證鑒定中心；溴氰菊酯乳油（25 g/L）購自拜耳生物科學(xué)（中國）有限公司；石油醚、丙酮、乙醚、甲醇、無水硫酸鈉、中性氧化鋁等均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 氣相色譜條件

Agilent 7890A氣相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司），色譜柱為Agilent HP-5毛細(xì)管柱（30 m×320μm×0.25μm），柱溫 100℃，保持 1min，以 35℃/min程序升溫至260℃，保持1min；再以5℃/min升溫至280℃，保持 5min；進(jìn)樣口溫度 250℃；載氣（N2）流速6 mL/min；分流模式進(jìn)樣，分流比 20∶1；檢測器（μ-ECD）溫度300℃。

1.2.2 動(dòng)物模型及樣品提取

雄性大鼠24只，隨機(jī)分成4組，實(shí)驗(yàn)前隔夜禁食，其中2組分別以512mg/kg和1024mg/kg劑量溴氰菊酯灌胃染毒，另2組為空白對照，分別以等量生理鹽水灌胃，實(shí)驗(yàn)前隔夜禁食。灌胃1.5h后，乙醚麻醉致死，迅速解剖，取血液、心、肝、肺、腎、腦等，4℃保存待檢。

1.2.3 樣品處理

取血液1mL或組織1g于研缽內(nèi)，少量多次加入無水硫酸鈉研磨至干砂狀，移至150mL碘量瓶中，加入混合溶劑［V（石油醚）∶V（丙酮）=4∶1］ 25 mL，振蕩浸提10 min，提取液過凈化柱（無水硫酸鈉、中性氧化鋁）過濾，濾液于30℃水浴中揮發(fā)至干，殘留物用20μL甲醇定容，1μL進(jìn)樣，GC-ECD分析。

1.2.4 工作曲線

分別取空白血液1 mL、空白肝1 g若干份，添加溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成溴氰菊酯質(zhì)量濃度（或質(zhì)量分?jǐn)?shù)）分別為 0.1、0.5、1、2、5、10、20、40μg/mL（或μg/g）的系列質(zhì)控樣品，按1.2.3項(xiàng)處理并檢測。以溴氰菊酯峰面積（y）對血液（或肝）中溴氰菊酯質(zhì)量濃度（或質(zhì)量分?jǐn)?shù)）（x）進(jìn)行線性回歸（溴氰菊酯以兩個(gè)峰面積之和計(jì)）。

1.2.5 回收率和精密度

取空白血液1mL共15份，分別添加溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成溴氰菊酯質(zhì)量濃度分別為0.5、5、40μg/mL的質(zhì)控樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度點(diǎn)5份，按1.2.3項(xiàng)方法處理并檢測，計(jì)算方法回收率。計(jì)算每個(gè)質(zhì)量濃度點(diǎn)5份質(zhì)控樣品中溴氰菊酯質(zhì)量濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)差，作為日內(nèi)精密度；再重復(fù)測定3日，計(jì)算溴氰菊酯質(zhì)量濃度的相對標(biāo)準(zhǔn)差，作為日間精密度。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，結(jié)果以±s進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 氣相色譜圖

空白對照組肝、溴氰菊酯添加肝和溴氰菊酯染毒肝的氣相色譜圖分別見圖1～3。通過空白對照樣品、添加樣品以及染毒樣品的氣相色譜圖比較，表明大鼠肝中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾目標(biāo)物的測定。

圖1 空白對照組肝氣相色譜圖

圖2 添加溴氰菊酯（20μg/g）肝氣相色譜圖

圖3 染毒大鼠肝氣相色譜圖

2.2 工作曲線

溴氰菊酯在血液和肝中的線性方程、線性范圍及定量限（LOQ）見表1。

表1 血液和肝中溴氰菊酯的線性方程、線性范圍和定量限

2.3 回收率和精密度

溴氰菊酯在血液中的回收率和精密度見表2。從表2中可以看出，血液中溴氰菊酯的回收率為91.55%～134.37%，日內(nèi)精密度和日間精密度均小于5.67%。

表2 血液中溴氰菊酯的回收率和精密度 （ ±s，%）

表2 血液中溴氰菊酯的回收率和精密度 （ ±s，%）

溴氰菊酯添加量/（μg/mL） 溴氰菊酯實(shí)測值/（n=6，μg/mL） 回收率 日內(nèi)精密度（n=5） 日間精密度（n=3）0.5 0.67±0.03 134.37±6.84 2.53 3.58 5 4.58±0.50 91.55±10.04 4.12 5.67 40 41.76±6.22 104.41±15.55 3.64 4.45

2.4 中毒癥狀

以512 mg/kg劑量溴氰菊酯灌胃染毒大鼠時(shí)，在給藥約30min后，大鼠興奮狀態(tài)消失，出現(xiàn)流涎或嘔吐、呼吸頻率減慢、行動(dòng)緩慢、站立不穩(wěn)等癥狀。以1 024 mg/kg劑量溴氰菊酯灌胃染毒大鼠時(shí)，在給藥約10 min后，大鼠即出現(xiàn)流涎、行動(dòng)緩慢、全身震顫等中毒癥狀。

2.5 溴氰菊酯在急性中毒大鼠體內(nèi)分布

將提取的染毒大鼠樣品按1.2.3項(xiàng)處理并檢測，測得各生物檢材中溴氰菊酯含量，結(jié)果見表3。

表3 溴氰菊酯在不同劑量染毒大鼠體內(nèi)含量（n=6， ±s，μg/g）

表3 溴氰菊酯在不同劑量染毒大鼠體內(nèi)含量（n=6， ±s，μg/g）

器官 512mg/kg 1024mg/kg心1.4950±0.3239 1.1582±0.3399肝1.6678±0.9126 0.3204±0.0455肺2.2709±1.3223 2.7916±1.3343腎0.7786±0.2208 1.1555±0.7773腦0.3195±0.0683 0.4004±0.0964血液/（μg/mL） 0.6340±0.0012 1.5465±0.6427

3 討 論

3.1 方法學(xué)建立

溴氰菊酯是含苯醚和環(huán)丙烷結(jié)構(gòu)及鹵素的有機(jī)物，氣相色譜分析時(shí)，電子捕獲檢測器（ECD）只對含有電負(fù)性強(qiáng)的元素（如鹵素）的物質(zhì)有選擇性地產(chǎn)生信號，可摒除生物樣品中內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾。本研究建立的溴氰菊酯GC-ECD檢測方法靈敏度較高，可滿足農(nóng)藥中毒案件生物檢材中溴氰菊酯的檢測。此外，擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在合成過程中因藥物中間體的存在或順反異構(gòu)體的影響，溴氰菊酯在本研究色譜條件下出現(xiàn)兩個(gè)色譜峰，經(jīng)氣質(zhì)聯(lián)用法確證，兩個(gè)色譜峰均為溴氰菊酯。

3.2 染毒劑量選擇

溴氰菊酯大鼠急性經(jīng)口LD50為128mg/kg[4]，但用市售溴氰菊酯乳油灌胃大鼠LD50劑量和2倍LD50劑量時(shí)，大鼠未出現(xiàn)明顯中毒癥狀。農(nóng)藥中毒致死案例以口服自殺居多，自殺者一般服用藥物劑量較大。本研究以4倍LD50劑量（512 mg/kg）和8倍LD50劑量（1 024 mg/kg）溴氰菊酯灌胃染毒大鼠，中毒癥狀明顯。

3.3 溴氰菊酯在大鼠體內(nèi)分布特征與法醫(yī)學(xué)意義

從表3可見，不同劑量溴氰菊酯在大鼠體內(nèi)分布不盡相同。4倍LD50或8倍LD50劑量溴氰菊酯灌胃染毒1.5 h后，溴氰菊酯在大鼠體內(nèi)含量由高至低順序分別為：肺＞肝＞心＞腎＞血液＞腦；肺＞血液＞心＞腎＞腦＞肝（P＜0.05）。兩個(gè)劑量組中均在肺組織中檢出較高濃度的溴氰菊酯，可能是因給藥后大鼠出現(xiàn)嘔吐、胃內(nèi)容物反流進(jìn)入氣管所致。有文獻(xiàn)[5]報(bào)道口服溴氰菊酯中毒者消化道癥狀較明顯，多出現(xiàn)嘔吐、腹瀉，并伴有流涎、肌肉震顫。本研究大鼠模型也符合報(bào)道所述。馬曉梅等[6]研究發(fā)現(xiàn)溴氰菊酯慢性染毒大鼠后，大鼠肝有較明顯的毒性損傷。而肝和腎分別作為藥（毒）物的轉(zhuǎn)化和排泄器官，不同劑量灌胃后可能導(dǎo)致其代謝轉(zhuǎn)化速度不同，8倍LD50劑量染毒組大鼠排泄更快，提示溴氰菊酯在體內(nèi)分布存在劑量依賴。張?jiān)隼萚7]研究了氰戊菊酯與辛硫磷等毒配比后在小鼠體內(nèi)的代謝和分布，發(fā)現(xiàn)氰戊菊酯在小鼠肺中分布最高，其次為肝、心和腦。這也與本研究8倍LD50劑量灌胃大鼠后在體內(nèi)分布情況一致。因此建議法醫(yī)在提取檢材時(shí)應(yīng)盡早，且應(yīng)注意劑量不同所致體內(nèi)濃度分布不一致的現(xiàn)象。

譚滇湘等[8]對溴氰菊酯在山羊體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行了研究，表明溴氰菊酯在山羊組織中分布廣泛、組織濃度低、體內(nèi)殘留時(shí)間長，組織中溴氰菊酯含量由高至低順序?yàn)槟I＞脂肪＞肌肉＞血漿＞肝。本研究用大鼠作動(dòng)物模型，盡管給藥量較大、檢測方法回收率高，但樣品中檢出量依然較低，這可能與溴氰菊酯在體內(nèi)代謝、排泄快，不易從器官內(nèi)檢出溴氰菊酯原體有關(guān)[1，9]。

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