汪文學(xué)， 汪 楠

結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是造成結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的重要原因，研究與結(jié)直腸癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子學(xué)機(jī)制顯得尤為重要。E-鈣粘蛋白(E-cadherin，E-cad)是介導(dǎo)細(xì)胞－細(xì)胞間互相粘附作用的跨膜糖蛋白，參與形成并維持同型細(xì)胞間的連接，一旦E-cad表達(dá)下降甚至缺失，細(xì)胞間粘附力下降，腫瘤細(xì)胞失去接觸抑制作用，將促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)64例結(jié)直腸癌組織及27例遠(yuǎn)離病灶的正常大腸組織E-cad的表達(dá)，分析其臨床意義，探討E-cad與結(jié)直腸癌細(xì)胞分化程度及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標(biāo)本來(lái)源于2006年1月至2012年12月間懷寧縣醫(yī)院及蕪湖市弋磯山醫(yī)院病理科64例結(jié)直腸癌組織蠟塊，其中男40例，女24例;年齡38～84歲，平均年齡64.5歲。所有患者術(shù)前未行放、化療。以64例結(jié)直腸癌組織為實(shí)驗(yàn)組，由于外科取材關(guān)系選取其中27例同一病例遠(yuǎn)離腫瘤的正常結(jié)直腸組織設(shè)為對(duì)照組。

1.2 方法 應(yīng)用免疫組化SP法，檢測(cè)兩組E-cad表達(dá)情況。鼠抗人E-cad單克隆抗體(濃縮型)、DAB酶底物顯色試劑盒(濃縮型)購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。蘇木素伊紅HE染色試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所。操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定 E-cad陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒;以棕黃色或棕褐色均勻顆粒狀物質(zhì)大于30%定義為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(++)，5% ～30%定義為陽(yáng)性表達(dá)(+)，＜5%或胞漿和(或)包膜無(wú)著色定義為陰性(－)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)和Fisher's精確概率法，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 E-cad在兩組中的表達(dá)情況 E-cad陽(yáng)性產(chǎn)物定位在上皮細(xì)胞－細(xì)胞接觸側(cè)的細(xì)胞膜上(見(jiàn)圖1、2)。結(jié)直腸癌、正常組織E-cad陽(yáng)性表達(dá)率分別為34.38%及100%，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=43.247，P ＜0.001)。

圖1 E-cad在高分化腺癌組織中的表達(dá)(SP，×200)

圖2 E-cad在正常大腸組織中的表達(dá)(SP，×400)

2.2 E-cad表達(dá)與結(jié)直腸癌患者病理特征的關(guān)系結(jié)直腸癌組織E-cad表達(dá)與相應(yīng)病理特征關(guān)系見(jiàn)表2。高、中分化型結(jié)直腸癌E-cad表達(dá)與低分化型結(jié)直腸癌相比有顯著性差異(P＜0.001);Dukes A、B分期與Dukes C、D分期組比較有顯著性差異(P＜0.001);伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001)。

表2 結(jié)直腸癌患者E-cad表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

3 討論

惡性腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程是復(fù)雜的多因素參與的過(guò)程，而癌細(xì)胞間粘附力降低是轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，因而腫瘤細(xì)胞表面粘附蛋白的研究始終是學(xué)術(shù)界研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)，研究者發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程常伴發(fā)上皮細(xì)胞間質(zhì)化(epithelial to mesenchymal transition，EMT)。EMT過(guò)程主要表現(xiàn)為:上皮細(xì)胞失去極性、細(xì)胞間粘附能力下降，同時(shí)獲得間質(zhì)細(xì)胞表型及運(yùn)動(dòng)和侵襲能力，具體表現(xiàn)為上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cad表達(dá)下調(diào)，而間質(zhì)標(biāo)記物波形蛋白等表達(dá)增加。多個(gè)研究表明EMT是腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的重要過(guò)程［1］，E-cad介導(dǎo)的細(xì)胞間粘附作用改變無(wú)疑也是中心環(huán)節(jié)，但EMT涉及的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

國(guó)內(nèi)蘇劍敏等［2］報(bào)道胃癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌、乳腺導(dǎo)管癌中E-cad陽(yáng)性表達(dá)率分別為30.0%、42.9%、35.0%、60.0%，E-cad 在4 種腫瘤組織表達(dá)較癌旁組織均呈下調(diào)趨勢(shì)，且E-cad表達(dá)與分化直接相關(guān)，分化越差、表達(dá)越低;E-cad表達(dá)在不同年齡、性別組無(wú)差異。新近研究也證實(shí)胃癌、卵巢癌、乳腺癌有E-cad基因的突變和等位基因的雜合性缺失［3-4］。E-cad表達(dá)缺失的腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，而向E-cad表達(dá)缺失的侵襲性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染E-cad cDNA 后，其侵襲性喪失［5］，反之，將 E-cad的反義mRNA導(dǎo)入癌細(xì)胞內(nèi)阻斷E-cad表達(dá)，又可重新誘發(fā)浸潤(rùn)反應(yīng)，該實(shí)驗(yàn)說(shuō)明E-cad確實(shí)有抑制腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的功能。另有研究表明，一些腫瘤耐藥細(xì)胞的E-cad表達(dá)呈顯著下調(diào)或缺失［7］，這也說(shuō)明E-cad可增加腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性。上述研究均表明E-cad是與惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可評(píng)估惡性腫瘤的生物學(xué)指標(biāo)。

本研究結(jié)果:E-cad在結(jié)直腸癌組織陽(yáng)性表達(dá)率為34.38%，顯著低于正常結(jié)直腸組織中的表達(dá)。進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn):E-cad在低分化癌中陽(yáng)性表達(dá)率(9.09%)明顯低于高中分化癌(39.62%);Dukes分期為C+D期的陽(yáng)性表達(dá)率(6.06%)顯著低于Dukes A+B期者(64.52%);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組E-cad陽(yáng)性表達(dá)率(3.45%)也顯著低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(60.0%)。表明E-cad表達(dá)下調(diào)與結(jié)直腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)。E-cad可作為評(píng)估結(jié)直腸癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移能力的可靠指標(biāo)。

［1］Micalizzi DS，F(xiàn)ord HL.Epithelial-mesenchymal transition in development and cancer［J］.Future Oncol，2009，5(8):1129-1143.

［2］蘇劍敏，周逸平，徐薇苓，等.E-鈣粘蛋白在四種腫瘤中表達(dá)的比較［J］.中華腫瘤雜志，2000，22(3):212-213.

［3］Makarla PB，Saboorian MH，Ashfaq R，et al.Promoter hypermethylation profile of ovarian epithelial neoplasms［J］.Clin Cancer Res，2005，11(15):5365-5369.

［4］Caldeira JR，Prando EC，Quevedo FC，et al.CDH1 promoter hy permethylation and E-cadherin protein expression in infiltraing breast cancer［J］.BMC Cancer，2006，6(1):48.

［5］Li Q，Mattingly RR.Restoration of E-cadherin in cell-cell junction requires both expression of E-cadherin and suppression of ERK MAP kinase activation in Ras-transformed breast epithelial cells［J］.Neoplasia，2008，10(12):1444-1458.

［6］Selga E，Morales C，Noe V，et al.Role of caveolin 1，E-cadherin，Enolase 2 and PKCalpha on resistance to methotrexate in human HT29 colon cancer cells［J］.BMC Med Genomics，2008，1(1):1-17.