鄔恩榮，李 莎，何大勇，王宗沛 ，張才喬

(1.浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310058;2.寧海縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心;3.寧波市振寧牧業(yè)有限公司)

禽流感(AI)侵襲多種禽類的呼吸道、消化道或神經(jīng)系統(tǒng)，在感染高致病性禽流感H5 或低致病性禽流感H7 后，通常會導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失［1］。研究表明，禽類感染高致病性禽流感的發(fā)病規(guī)律與當(dāng)?shù)禺?dāng)時(shí)的氣溫、海拔高度及經(jīng)緯度等環(huán)境因素相關(guān)。中國大陸禽流感疫情大都發(fā)生在各省的省會所在地及其周邊地區(qū)，并主要分布于沿海地區(qū)、一級河流和湖泊周邊，具有明顯的地域聚集性［2］。此外，不同禽類品種之間禽流感疫苗免疫效果也有差異［3］。鑒于養(yǎng)殖環(huán)境和禽類品種對禽流感疫情的影響，本研究對寧?？h振寧黃雞養(yǎng)殖場戶開展禽流感疫苗免疫后抗體監(jiān)測，研究不同飼養(yǎng)條件對振寧黃雞禽流感疫苗免疫效果的影響，從養(yǎng)殖場環(huán)境因素考慮來提高禽類抵抗力，降低養(yǎng)殖戶損失的具體措施，同時(shí)也為振寧黃雞免疫功能和社會公共衛(wèi)生安全研究提供生產(chǎn)層面的數(shù)據(jù)，特進(jìn)行本試驗(yàn)，供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 按照國家動物防疫要求，對振寧黃雞實(shí)施高致病性禽流感免疫，具體免疫程序如下:商品雞分別在18日齡和48日齡實(shí)施禽流感疫苗免疫，皮下注射重組禽流感病毒滅活疫苗(H5N1，Re-5+Re-4，遼寧某生物科技有限公司生產(chǎn))。2009年6月至2011年6月對172 個(gè)振寧黃雞商品雞場的免疫雞群進(jìn)行隨機(jī)采血，每羽翅下靜脈采血3 ml，分離血清，共采集血樣3573 份。

1.2 抗體檢測 禽流感病毒抗體測定參照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T 18936-2003)“血凝抑制試驗(yàn)(HI)”進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 按照養(yǎng)雞場地理位置將養(yǎng)殖場粗略分為道路旁、居民區(qū)、偏遠(yuǎn)區(qū)三類;按放養(yǎng)場地類型分為耕地、草林地、沙灘地三類;按照活動場放養(yǎng)密度分為低(＞667 m2/千羽)、中(333～667 m2/千羽)和高(＜333 m2/千羽)三類?？贵w水平值所占比例% =抗體水平值所占統(tǒng)計(jì)數(shù)/該類型樣本檢測總份數(shù)× 100% 。用GraphPad Prism 5 軟件的Wilcoxon Signed Rank Test(Wilcoxon 符號檢驗(yàn))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同季節(jié)禽流感抗體水平比較 詳見表1。

表1 不同季節(jié)90日齡振寧黃雞禽流感抗體滴度分布

由表1可見，3～5月振寧黃雞禽流感抗體水平呈上升趨勢，可能與當(dāng)?shù)貧鉁剞D(zhuǎn)暖，冷應(yīng)激逐步減輕有關(guān);6～8月為高溫高濕季節(jié)，抗體總體水平呈下降趨勢;9～10月天氣逐漸轉(zhuǎn)涼，雞群抗體水平處于較高水平，此后氣溫轉(zhuǎn)冷，抗體水平有所下降。5月是振寧黃雞禽流感免疫水平最好時(shí)期。

2.2 不同放養(yǎng)密度禽流感抗體水平比較 詳見表2。

表2 不同飼養(yǎng)條件90日齡雞禽流感疫苗抗體滴度的分布

由表2可見，采自活動場放養(yǎng)密度較低的振寧黃雞(血樣1865 份)和采自放養(yǎng)密度中等的振寧黃雞(血樣1338 份)的禽流感免疫抗體水平相近，前者抗體水平明顯高于來自活動場放養(yǎng)密度較高的振寧黃雞(血樣110 份，P ＜0.05)。

2.3 不同地理位置禽流感抗體水平比較 詳見表2。

由表2可見，禽流感疫苗抗體水平較高的采自道路附近的雞場，309 份血樣的平均滴度為7.5log2，其次為采自偏遠(yuǎn)地帶養(yǎng)雞場，其2661 份血樣的平均滴度為7.2log2，較差的為位于居民生活區(qū)雞場，其110 份血樣的抗體平均滴度為7.0log2。道路旁雞場的雞群禽流感抗體水平曲線頂峰出現(xiàn)在8.0log2 處，偏遠(yuǎn)地區(qū)和居民生活區(qū)的頂峰都出現(xiàn)在7.0log2 處。來自道路附近、偏遠(yuǎn)區(qū)和居民區(qū)的雞群免疫抗體水平差異顯著(P ＜0.05)。

2.4 不同類型放養(yǎng)場地禽流感抗體水平比較 詳見表2。

由表2可見，禽流感抗體水平較高的采自耕地放養(yǎng)雞場，1364 份血樣的平均值為7.3log2，其次為草林地放養(yǎng)雞場，1580 份血樣的平均值為7.12log2，較差的為沙灘地放養(yǎng)雞場，369 份血樣的禽流感抗體平均值為7.09log2。耕地、草林地、沙灘地3 條曲線的峰值均出現(xiàn)在7.0log2 處、且出現(xiàn)頻率比例相當(dāng)，在8.0log2 處出現(xiàn)頻率比例差異明顯。放養(yǎng)耕地的振寧黃雞血樣中的禽流感免疫抗體水平和草林地及沙灘地的差異顯著(P ＜0.05)，放養(yǎng)草林地和放養(yǎng)沙灘地之間差異不顯著。

3 小結(jié)與討論

氣候?qū)游餀C(jī)體的免疫功能與自然環(huán)境等因素密切相關(guān)。日光和干燥對多數(shù)病原體具有致死作用。反之，適宜的溫度和濕度則有利于病原微生物的生長繁殖，抑制雞群的免疫系統(tǒng)，影響免疫效果［4］。牛愛軍等(2006)［5］研究表明，高溫環(huán)境下肉仔雞的免疫功能明顯低于常溫環(huán)境;黃炎坤等(2012)［6］研究表明，低溫季節(jié)雞群死淘率顯著高于常溫季節(jié)。本研究的監(jiān)測結(jié)果表明，在氣溫適宜的季節(jié)，振寧黃雞的禽流感免疫抗體水平處于最佳水平。

生產(chǎn)實(shí)踐表明，放養(yǎng)有助于恢復(fù)雞群原始的棲息習(xí)性，放養(yǎng)密度大小是動物福利的重要指標(biāo)。放養(yǎng)密度越小，通風(fēng)、自然光照良好，場內(nèi)相對濕度較低，動物糞便病原無害化處理效果增強(qiáng)，霉菌、球蟲等病原微生物繁衍能得到有效抑制。從雞群自身來看，放養(yǎng)密度越小，活動空間越大，運(yùn)動量和青飼料、野外昆蟲隨機(jī)采食量增大，機(jī)體營養(yǎng)水平和免疫水平就越高［7］。但有文獻(xiàn)報(bào)道，15 羽/m2、20 羽/m2或25 羽/m2的放養(yǎng)密度之間雞群免疫抗體水平變化不顯著［8］，其原因有待進(jìn)一步研究。

外界環(huán)境因素對禽類機(jī)體的影響是較為復(fù)雜的。環(huán)境中的噪聲、人類日常生活及微生物氣溶膠等各類應(yīng)激因素都會對雞體的生產(chǎn)性能、免疫功能產(chǎn)生影響，重者引發(fā)疫病甚至死亡［9］。居民生活區(qū)周圍飼養(yǎng)的家禽與人類毗鄰而居，雞群受人類日常生活近距離影響較大，燥聲、震動等都可能給雞體造成驚嚇，所以免疫效果較差。道路附近交通帶來的噪聲、過往畜禽散發(fā)的微生物氣溶膠對雞體免疫功能有一定影響。本研究表明偏遠(yuǎn)地區(qū)雞群抗體水平不如道路附近，其原因可能是偏遠(yuǎn)地區(qū)養(yǎng)殖場野鳥活動較多，而野鳥與放養(yǎng)雞之間的疫病傳播機(jī)率比道路附近養(yǎng)殖場要高。有研究表明，遷徙的鳥類在新病原生物的引入中起著關(guān)鍵的作用［10］。雞白天大部分時(shí)間都會在放養(yǎng)場地自由活動、采食，作為放養(yǎng)場的耕地、草林地、沙灘地的土壤松軟程度、地表植被覆蓋等均有較大差異。耕地松軟，地力最為肥沃，各類生物容易繁衍;沙灘地堅(jiān)硬，土地貧瘠，植物生長困難，環(huán)境中昆蟲等活物較少;草林地則居中;土地肥力越肥沃，植被就越豐富，青綠飼料采食量就越多，就越能提高雞群的抗應(yīng)激能力。

以上結(jié)果表明，環(huán)境條件可影響禽流感疫苗的免疫效果，其中在氣候適宜的季節(jié)、以較小或適中的放養(yǎng)密度、在道路附近且以耕地作為放養(yǎng)場地的飼養(yǎng)場都有利于明顯提高振寧黃雞禽流感疫苗的免疫效果。

［1］Chmielewski R，Swayne DE.Avian influenza:public health and food safety concerns ［J］.Annu.Rev.Food Sci.Technol.，2011，2:37－57.

［2］方立群，曹春香，陳國勝，等.地理信息系統(tǒng)應(yīng)用于中國大陸高致病性禽流感的空間分布及環(huán)境因素分析［J］.中華流行病學(xué)雜志，2005，26(11):839－842.

［3］張根祥，劉曉瑛，戚一鳴，等.余姚市高致病性禽流感免疫抗體的檢測與分析［J］.浙江畜牧獸醫(yī)，2009，34(3):28.

［4］劉忠琛，逢金良，劉寶才.非疫苗因素對雞免疫效果的影響［J］.湖北畜牧獸醫(yī)，2000(2):32.

［5］牛愛軍.不同溫度的高溫環(huán)境對肉仔雞免疫功能的影響［J］.濰坊學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，6(2):85－86.

［6］黃炎坤，劉 健，范佳英，等.雞舍內(nèi)環(huán)境季節(jié)性變化與雞群死淘率的關(guān)聯(lián)分析［J］.中國畜牧雜志，2012，48(6):57－60.

［7］Mustafa MY，Muneer MA，Anjum AA，et al.Influence of stocking density on immune response of broilers against newcastle disease virus ［J］.Pak.J.Life Soc.Sci.，2010，8(1):7－10.

［8］Turkyilmaz MK.The effect of stocking density on stress reaction in broiler chickens during summer［J］.Turk.J.Vet.Anim.Sci，2008，32(1):31－36.

［9］張紅雙，秦 梅，柴同杰，等.不同養(yǎng)殖環(huán)境對商品肉雞免疫功能的影響［J］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，30(1):34－38.

［10］Hoye BJ，Munster VJ，Nishiura H，et al.Reconstructing an annual cycle of interaction:natural infection and antibody dynamics to avian influenza along a migratory flyway［J］.Oikos，2011，120:748－755.