巴桑卓嘎 蘭 鈞

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，西藏 拉薩 850000

HPLC法測(cè)定藏藥十五味乳鵬丸中大黃酚的含量

巴桑卓嘎 蘭 鈞

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，西藏 拉薩 850000

目的：建立藏藥十五味乳鵬丸中大黃酚的含量測(cè)定方法。方法：色譜柱為島津VP－ODS C18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）為流動(dòng)相；流速為1.0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為430nm。結(jié)果：大黃酚的線性范圍為0.015884～0.07942μg （r＝0.9992），平均回收率為100.81%， RSD%＝1.6%。結(jié)論：本方法高效，快速，靈敏，可用于藏藥催湯丸的質(zhì)量控制。

十五味乳鵬丸；HPLC；大黃酚；含量測(cè)定

藏藥十五味乳鵬丸是由乳香、寬筋藤、決明子、渣馴膏、黃葵子、藏菖蒲等15味蔵藥制成的復(fù)方藏藥制劑。具有消炎止痛，干黃水的功效，用于關(guān)節(jié)紅腫疼痛，發(fā)癢，痛風(fēng)，黃水積聚［1］。決明子為主藥，大黃酚為其主要成分。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，建立了十五味乳鵬丸中大黃酚含量的高效液相色譜（HPLC）測(cè)定法［2］。本法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為藏藥十五味乳鵬丸的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀，Waters2696泵自動(dòng)進(jìn)樣器，2998二極管陣列紫外檢測(cè)器，Waters自帶數(shù)據(jù)處理器，超聲儀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，十萬(wàn)分之一電子天平。

大黃酚（中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)：110796－2000716）；十五味乳鵬丸（西藏雄霸拉去藏藥廠，批號(hào)：20090901、20091101；西藏金珠雅礱藏藥責(zé)任有限公司，批號(hào)：090301）；陰性樣品藥材（西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所）；甲醇、磷酸為色譜級(jí)，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

島津VP－ODS C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：430nm；流速：1.0ml／mim；進(jìn)樣：10μl。

2.2 空白試驗(yàn) 按處方中藥味比例，配制不含決明子的藥群，按其工藝制成空白制劑，再按供試品溶液的制備方法制備并測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖1。表明陰性樣品溶液在與大黃酚對(duì)照品相同保留時(shí)間處未現(xiàn)色譜峰，故認(rèn)為無(wú)干擾。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 取大黃酚對(duì)照品適量，精密稱定，置容量品中，加甲醇制成1ml含8μg的溶液，即得。取寬筋藤對(duì)照藥材1g，加甲醇10ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.4 供試品溶液的制備 取本品粉末2g，精密稱定，置100ml錐形瓶中，精密加入甲醇50ml稱定重量，加熱回流1h，放冷；再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，置50ml燒瓶中，揮去甲醇；加2.5mol／l硫酸溶液20ml，超聲處理5分鐘，再加三氯甲烷20ml，加熱回流1h，冷卻；移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取2次，每次約10ml，合并三氯甲烷液，用無(wú)水硫酸鈉脫水，三氯甲烷液移置50ml燒瓶中，回收三氯甲烷，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇－醋酸乙酯（2∶1）溶解定容置10ml量瓶中，搖勻，用0.45μm超濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密量取大黃酚對(duì)照品溶液（7.942μg／ml），分別進(jìn)樣2、4、6、8、10μl，記錄色譜圖，以峰面積（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）作圖，得一直線（r＝0.9992）。大黃酚在0.015884～0.07942μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性范圍考察

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取大黃酚對(duì)照品溶液（7.924μg／ml）10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得大黃酚峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.3%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（批號(hào)：20090901）分別于0、2、4、8、12h，各進(jìn)樣10μl，測(cè)得樣品中大黃酚峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.0%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 按照擬定的含量測(cè)定方法，取同一批樣品（由雄巴拉曲藏藥廠生產(chǎn)批號(hào)：20090901）5份，分別制成供試品溶液，進(jìn)樣10μl，測(cè)得大黃酚含量，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.7%

2.9 加樣回收率 取已知含量（63.2μg／g）（批號(hào)：20090901）的樣品約1.2g，精密稱定，精密加入對(duì)照品溶液（大黃酚8.2944μg／ml）4ml，按照供試品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大黃酚對(duì)照品加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.10 樣品的測(cè)定 按上述方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液（7.942、8.36μg／ml），分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 十五味乳鵬丸中大黃酚含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本品功效消炎止痛，干黃水。用于關(guān)節(jié)紅腫疼痛，發(fā)癢，痛風(fēng)，黃水積聚。處方中決明子具有干黃水、止癢、止痛的功效［3］，涵蓋了本處方的主要功能主治。因此本標(biāo)準(zhǔn)建立了決明子中的大黃酚含量測(cè)定，并參考文獻(xiàn)建立了高效液相色譜法測(cè)定十五味乳鵬丸中大黃酚的含量，該法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于本品中大黃酚的含量測(cè)定。

對(duì)本品中大黃酚進(jìn)行相應(yīng)的提取方法考察，甲醇加熱回流提取1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，置50ml燒瓶中，揮去甲醇，再加2.5mol／L硫酸溶液和三氯甲烷加熱回流，其次用三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷液，回收溶劑，最后殘?jiān)眉状迹燃淄椋?∶1）和乙醇－乙酸乙酯（2∶1）不同的混合溶液溶解，綜合提取率、干擾背景、分離度等因素，最終確定了殘?jiān)右掖迹宜嵋阴ィ?∶1）溶解。

［1］中國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［S］.藏藥（第一冊(cè)），1995.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］占堆，趙軍寧.藏醫(yī)成方制劑現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用［M］.四川：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2009：12.

Content determination of Chrysophanol in Tibet traditional medicine Shiwuwei Rupeng pills by HPLC

BaSang Zhuoga，LAN Jun
Tibet Institute for Food and Drug Control，Lhasa 850000，China

ObjectiveTo set up a method for determining the content of chrysophanol in Shiwuwei Rupeng Wan.MethodsThe chromatogram column was SHIMADZU VP－ODS C18（4.6mm×250mm，5μm），the mobile phase composition was methanol－0.1%orthphosphoric acid（85：15），the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was at 430nm.ResultsThe linear range of chrysophanol was 0.015884～0.07942μg，r＝0.9992.The average recovery rate was 100.81%，RSD%＝1.6%.ConclusionThe method is highly effective，quick and sensitive，and suitable for quality control of Tibet traditional medicine Shiwuwei Rupeng pills.

shiwuwei Rupeng Wan；HPLC；chrysophanol；content determination

R291.406

A

1007－8517（2013）16－0004－02

2013.06.04）