李明松陳 懿許 青

1.安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 安順 561000；2.貴州省安順市人民醫(yī)院，貴州 安順 561000

纖維素酶在苦參堿提取中的應(yīng)用

李明松1陳 懿1許 青2

1.安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 安順 561000；2.貴州省安順市人民醫(yī)院，貴州 安順 561000

目的：比較加酶組和未加酶提取苦參堿的差別。方法：酶提取工藝即每克生藥加入50U（0.25g）纖維素酶，充分?jǐn)嚢瑁渌に囃に?。結(jié)果：加酶組提高了苦參堿的收率，與未加酶組相比有顯著性差異。結(jié)論：纖維素酶的加入使苦參堿的收率提高。

纖維素酶；酶解技術(shù)；苦參堿

1814年俄國(guó)科學(xué)院K.Ckirchoff發(fā)現(xiàn)了淀粉酶，并初步認(rèn)識(shí)了酶的催化作用。20世紀(jì)50年代，酶化學(xué)由于多學(xué)科的相互滲透得到了迅速發(fā)展，使工業(yè)化用酶廣泛涉及醫(yī)藥、食品、釀酒、飼料、紡織、洗滌、造紙、皮革及污水處理等眾多領(lǐng)域。90年代中后期，我國(guó)開(kāi)始將酶用于天然藥物及中藥的提取分離，并取得了一些成果［1］。

植物的有效成分往往包裹在細(xì)胞壁內(nèi)，細(xì)胞壁由纖維素構(gòu)成，而纖維素則是由β－D－葡萄糖苷鍵以β－1，4－葡萄糖苷鍵連結(jié)，而纖維素酶可以破壞β－D－葡萄糖苷鍵，使植物細(xì)胞壁被破壞，有利于藥物有效成分的提取，較大幅度地提高收率。選用苦參提取苦參堿［2］作為研究對(duì)象，并對(duì)加酶組和未加酶組進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，來(lái)驗(yàn)證纖維素酶對(duì)苦參提取苦參堿的影響。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品

高效液相色譜儀（LC5A），日本島津；PHS－3CW微機(jī)型酸度計(jì)，中國(guó)上海梅特勒公司；電子分析天平AE240，中國(guó)上海理達(dá)儀器廠。所用試劑均為分析純。纖維素酶粗品（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20050512，活力單位10000μ／g）；苦參堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110805－200306）?？鄥⑺幉馁?gòu)于貴陽(yáng)市花果園藥材批發(fā)市場(chǎng)，經(jīng)中藥鑒定教研室劉芃教授鑒定為豆科槐屬（Leguminosae）植物苦參Sophora flavescens Ait的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品的制備方法［3］稱取苦參塊約50g，精密稱定，加入8倍量pH＝4.5的酸水，置于50℃的恒溫水浴內(nèi)浸泡15 min，電爐加熱至沸，微沸30min，取出濾液；藥渣再分別煎煮兩次，每次加入8倍量的酸水，煎煮30min，合并三次濾液，濃縮至250mL左右，3000r／min離心10min，轉(zhuǎn)移到250mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻，用10mL移液管精密吸取10mL水提液倒入分液漏斗中，加入氨水用酸度計(jì)調(diào)pH＝10左右，用60mL氯仿分三次萃取，合并氯仿層，揮干，加入甲醇溶解，定容到10mL容量瓶中，即得。

2.2 加酶提取苦參堿［4－5］先在藥材飲片中加入400mL水，用HCL調(diào)pH4.5，以每克生藥材50U的量加入纖維素酶，充分?jǐn)嚢?，置?0℃恒溫水浴15min，水浴期間適時(shí)攪拌，酶處理后提取工藝同原工藝，為了除去水浸影響，在原工藝前亦加了一步水浸，pH4.5及50℃水浴15min，而只是沒(méi)有加酶。

2.3 含量測(cè)定方法［6］

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Zorbax NH3（4.6mm×1.5mm）；柱溫：50℃；流動(dòng)相：乙腈－無(wú)水乙醇－水（80：10：10），磷酸調(diào)pH＝2；流速：1.0mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，得到濃度為0.4024mg／mL的苦參堿對(duì)照品溶液，然后精密吸取1mL對(duì)照品溶液至100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，最終得到濃度為4.024μg／mL的苦參堿對(duì)照品溶液。精密吸取0.5、3.5、6.5、9.5、12.5、15.5、18.5、21.5μL，按色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以苦參堿對(duì)照品（x，mg·mL－1）為橫座標(biāo)，峰面積積分值（y）為縱座標(biāo)進(jìn)行線性回歸，見(jiàn)圖2，得回歸方程為Y苦＝1.2829×10－4X－2.1811×10－4，r＝0.9962，苦參堿在0.0141～0.0865 mg／mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3.3 加酶組與未加酶組提取比較 取苦參樣品按供試品溶液的制備方法制備得到加酶組和未加酶組，按色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

由表1可知，加酶組與未加酶組提取的苦參堿的收率有顯著性差異，加酶組苦參堿的收率優(yōu)于未加酶組。

表1 苦參堿收率測(cè)定結(jié)果

3 討論

從實(shí)驗(yàn)中可以看出在纖維素酶參與作用下，苦參堿的收率提高。與對(duì)照組相比有顯著性的差異。中藥大部分屬于植物類藥材，特別是富含纖維素的根、莖、皮類藥材，應(yīng)用纖維素酶可以破壞植物的細(xì)胞壁而使有效成分提取率提高，使藥材得到充分利用。當(dāng)然，能否將纖維素酶推廣應(yīng)用于其它天然產(chǎn)物的提取中，還需要根據(jù)有效成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)而定，以保證有效成分結(jié)構(gòu)完整，保證藥材的醫(yī)療作用。但酶的濃度、底物的濃度、溫度、酸堿度、抑制劑和激動(dòng)劑等對(duì)提取物的影響，還有待進(jìn)一步的深入研究。

［1］韓麗.實(shí)用中藥制劑新技術(shù)［M］.化學(xué)工業(yè)出版社，2002：118.

［2］李曉海.HPLC法在生物堿分析中的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2002，33 （4）：368.

［3］金莉霞，崔燕巖.苦參生物堿的高效液相色譜法測(cè)定［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1993，28（2）：136.

［4］楊慶隆，許順榮.淺談酶在中藥制劑中的應(yīng)用［J］.中成藥，1995，17（6）：4.

［5］馬桔云，趙晶巖，姜穎，等.纖維素酶在黃連提取工藝中的應(yīng)用［J］.中草藥，2000，31（2）：103.

［6］國(guó)家藥典委員會(huì)編著.中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.化學(xué)工業(yè)出版社，2005：161.

The Application of the Cellulase－Method to extract matrine from Sophora Flavescens

Li Ming－song1，Chen yi1，Xu qin2
1.Anshun Vocational and Technical College，Guizhou，561000；2.The people，s Hospital of Anshun City，Guizhou，561000，China

ObjectiveTo extract matrine from Sophorae Flavexcentis and do omparative experiments between adding enzymes to Sophorae Flavexcentis and not adding enzymes to Sophorae Flavexcentis.MethodsEnzymes extracting process，adding cellulase 50U （0.25g）and stirring.Other process is the same as the original process.ResultsThe extracting ration of matrine has been improved by the enzymatic hydroysis of cellulose.comparec with those without the enzymatic hydrolysis，it has remarkable differences.ConclusionThe extracting ratio of matrine can be improved by the adding of cellulase.

cellulase；enzymatic hydrolysis；matrine

R284.2

A

1007－8517（2013）16－0022－02

2013.06.23）