陳社帶，楊慧文

(1.中山市人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 中山 528403;2.廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院，廣東 廣州 510006)

糖尿病是一種常見的代謝性內(nèi)分泌疾病，是胰島素絕對(duì)或相對(duì)分泌不足所引起的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水及電解質(zhì)等代謝紊亂。隨著人們生活條件的改善，糖尿病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一［1］。本研究通過對(duì)大鼠體質(zhì)量，血糖水平，血、T 細(xì)胞計(jì)數(shù)，血清腫瘤壞死因子－α (TNF－α)、白細(xì)胞介素－6(IL－6)水平，以及體外巨噬細(xì)胞吞噬功能，胸腺、脾指數(shù)的測定，探討金匱腎氣丸對(duì)鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)誘發(fā)糖尿病模型大鼠免疫功能的影響，為金匱腎氣丸在治療糖尿病方面的臨床應(yīng)用提供更加詳實(shí)的理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2 月齡SD 大鼠，雌性，體重200～250 g，由廣州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物與試劑 金匱腎氣丸煎劑(自制，制法［2］:按8∶4∶4∶3∶3∶3∶1∶1 比例取干地黃、山藥、山茱萸、牡丹皮、澤瀉、茯苓、桂枝和附子(炮)共8 味中藥，粉碎混合，水煎煮，過濾，濾液濃縮制成每mL 含生藥1.0 g 即得);STZ 為Sigma 公司產(chǎn)品;血糖試劑盒為上海研生生化試劑有限公司產(chǎn)品;紅細(xì)胞裂解液、小鼠抗大鼠R－PE、小鼠抗大鼠R－PE 為Caltag 公司產(chǎn)品;IL－6、TNF－α 試劑盒由北京東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.3 主要儀器 All600 型全自動(dòng)生化分析儀(日本Olympus 公司);FACSCalibur 型流式細(xì)胞儀(美國BD 公司)。

2 方 法

2.1 糖尿病模型制備［3］用STZ 誘發(fā)大鼠糖尿病:大鼠禁食12 h 后，按劑量60 mg/kg 一次性腹腔注射STZ 液(用0.1 mol/L 檸檬酸鈉緩沖液稀釋至濃度1%，經(jīng)微孔濾膜過濾滅菌)。72 h 后取尾血檢測血糖，血糖≥16.7 mmol/L 者即為成功糖尿病模型。

2.2 動(dòng)物分組與給藥 取正常大鼠10 只為對(duì)照組，取造模成功大鼠30 只，隨機(jī)分為3 組，每組10 只:模型組，金匱腎氣丸低、高劑量組。正常組和模型組灌胃(ig)生理鹽水，金匱腎氣丸低、高劑量組分別ig 5.0、10.0 g/ (kg·d)金匱腎氣丸溶液，連續(xù)8 w。

2.3 測定體質(zhì)量、空腹血糖、TNF－α、IL－6動(dòng)物在末次給藥前禁食12 h，不禁水，給藥2 h后，稱質(zhì)量，眼球后靜脈叢毛細(xì)管取血，血液靜置后3500 r/min 離心10 min，取上清備用。按試劑盒說明書檢測血糖、TNF－α 和IL－6 水平。

2.5 檢測體外巨噬細(xì)胞吞噬功能 各組大鼠取血后分別腹腔內(nèi)注射冷1640 液5 mL，抽取腹腔液，靜置后2000 r/min 離心10 min，留上清液約5 mL，混勻，加2 mL 1% 雞血球，置恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)60 min，涂片染色，計(jì)算體外巨噬細(xì)胞吞噬百分率。

2.6 測定脾臟、胸腺指數(shù) 取腹腔液后脫頸椎處死大鼠，無菌條件下剖取胸腺和脾臟，剪去筋膜及脂肪，濾紙吸干后稱質(zhì)量，計(jì)算:脾指數(shù)=脾質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量 (g);胸腺指數(shù) = 胸腺質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)。

3 結(jié) 果

3.1 一般情況 對(duì)照組大鼠體重增加、精神好、行動(dòng)敏捷、毛發(fā)順滑光澤。模型組和金匱腎氣丸組大鼠全部成模，均有不同程度“三多一少”(即多飲、多尿、多食及消瘦)表現(xiàn)、精神萎靡、行動(dòng)遲緩、毛豎而晦暗等癥狀，與對(duì)照組比較，差異明顯。

3.2 大鼠體質(zhì)量、空腹血糖及血清TNF－α、IL－6 水平 與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著下降(P ＜0.01)，血糖、血清TNF－α、IL－6 水平則顯著升高(P ＜0.01)。給予金匱腎氣丸后，與模型組比較，金匱腎氣丸高劑量組大鼠體質(zhì)量明顯升高(P ＜0.05)，血糖、血清TNF－α、IL－6 水平明顯下降(P ＜0.05 或P ＜0.01)，見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量、空腹血糖及血清TNF－α、IL－6 水平()

3.4 大鼠體外巨噬細(xì)胞吞噬率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù) 與正常組比較，模型組大鼠巨噬細(xì)胞吞噬率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均顯著降低(P ＜0.01)。給予金匱腎氣丸后，與模型組比較，金匱腎氣丸低、高劑量組大鼠巨噬細(xì)胞吞噬率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均明顯升高(P ＜0.05 或P ＜0.01)，見表3。

表2 各組大鼠外周血、T 細(xì)胞計(jì)數(shù)和 / 值)

表2 各組大鼠外周血、T 細(xì)胞計(jì)數(shù)和 / 值)

注:* 與模型組比較P ＜0.05，＊＊與模型組比較，P ＜0.01

表3 各組大鼠巨噬細(xì)胞吞噬率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響()

4 討 論

糖尿病在中醫(yī)稱之為“消渴病”［4］，早在公元前400 年的《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有記載。金匱腎氣丸作為千年古方，最早出自《金匱要略》，載曰:“男子消渴，小便反多，以飲一斗，小便一斗，腎氣丸主之”，可謂開腎氣丸治療消渴病之先河［5］。歷代中醫(yī)普遍認(rèn)為，金匱腎氣丸適用于糖尿病及其相關(guān)病證腎虛患者，尤其是糖尿病晚期出現(xiàn)并發(fā)癥時(shí)兼有腎陰陽俱虛表現(xiàn)的患者［6］。近年來，金匱腎氣丸及其加減方用于糖尿病及其相關(guān)并發(fā)癥的臨床實(shí)踐也取得了肯定的療效。

免疫功能紊亂是糖尿病患者病程加速和病情加重的重要原因［7］，深入開展糖尿病發(fā)病過程中免疫功能的相關(guān)動(dòng)態(tài)變化的研究，有助于進(jìn)一步探討糖尿病發(fā)病機(jī)制，為臨床診斷及病情監(jiān)測提供有益的參考。

T 淋巴細(xì)胞是機(jī)體最重要的免疫細(xì)胞群，按功能分為輔助性T 細(xì)胞、細(xì)胞毒性T 細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞表面分子CD 分為和兩大亞群。代表輔助性T 細(xì)胞，代表抑制和細(xì)胞毒性T 細(xì)胞。正常情況下，/細(xì)胞比值處于動(dòng)態(tài)平衡，維持機(jī)體正常免疫應(yīng)答。糖尿病時(shí)，機(jī)體免疫力下降，細(xì)胞免疫功能也明顯下降，易致感染。有研究證實(shí)，糖尿病合并感染組比較糖尿病未合并感染組，血清中、、/明顯下降［8］。

IL－6、TNF－α 是炎癥發(fā)生及免疫病理損傷的重要介導(dǎo)物質(zhì)［9］，在促進(jìn)胰島細(xì)胞損傷和抑制胰島素分泌中起重要作用。IL－6 是一種多功能的生物性細(xì)胞因子，可作用于內(nèi)皮細(xì)胞，通過合成黏附分子和化學(xué)誘導(dǎo)分子，提高白細(xì)胞殺傷吞噬能力。糖尿病時(shí)，IL－6 過度激活和擴(kuò)增T 細(xì)胞、B 細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞凋亡而破壞胰島R 細(xì)胞。TNF－α 主要由單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，正常情況下，低水平的TNF－α 可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及促進(jìn)組織修復(fù)，起到生長因子的作用。然而，糖尿病時(shí)異常增高的TNF－α 直接作用于胰島細(xì)胞、微血管等，造成組織損傷。

［1］秦建華，陳韞梅.糖減平膠囊治療非胰島素依賴性糖尿30例［J］.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2011，11 (2):58.

［2］周智興，吳正平，鄧琴.腎氣丸對(duì)衰老模型大鼠免疫功能的作用研究［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009，25 (24):4131－4133.

［3］陳秋，夏永鵬，邱宗蔭.2 型糖尿病大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)［J］.天津醫(yī)藥，2006，6 (3):33－35.

［4］楊曉明.金匱腎氣丸治療2 型糖尿病120 例［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17 (17):261－263.

［5］金智生，潘宇清.金匱腎氣丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性2 型糖尿病胰島素抵抗大鼠血清TNF－ α、Leptin 的影響［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2008，28 (3):66－68.

［6］李盛.金匱腎氣丸治療糖尿病療效觀察［J］.中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志，2007，13 (17):2560－2561.

［7］姚旌旗，舒思潔，趙驥，等.脂糖舒對(duì)糖尿病大鼠血液T 淋巴細(xì)胞亞群和免疫器官系數(shù)的影響［J］.山東醫(yī)藥，2006，46 (7):9－11.

［8］方榮，李紅.2 型糖尿病伴感染患者T 淋巴細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞的測定及意義［J］.浙江醫(yī)學(xué)，2003，25 (5):263－265.

［9］Silveira PA，Crey ST.B cells in the spotlight:innocent bystanders or rnajor players in the pathogenesis of type 1 diabetes［J］.Trends Endocrinol Metab，2006，17 (4):128.