徐 超楊少軍*

（1 甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2 甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州 730000）

慈菇消脂膠囊對非酒精性脂肪肝病大鼠肝組織P4502E1及血脂代謝的影響

徐 超1楊少軍2*

（1 甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2 甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州 730000）

目的探討慈菇消脂膠囊治療非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）的作用機制。方法雄性SD大鼠60只，隨機分成6組，正常組喂以標準飼料；其余組給予高脂飼料喂養(yǎng)12周復(fù)制NAFLD大鼠模型。對照組喂以吡格列酮0.135mg/kg，慈菇消脂膠囊各組分別喂以0.162g，0.324g，和0.648g/kg。6周后，觀察慈菇消脂膠囊對NAFLD大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血清鐵蛋白（SF）水平，和細胞色素P4502E1（CYP2E1）表達的影響。結(jié)果與模型組相比，慈菇消脂膠囊組及吡格列酮組，TC，TG，SF均不同程度的降低（P＜0.05），肝組織P4502E1的表達與肝細胞脂肪變性程度一致。與吡格列酮組相比，慈菇消脂膠囊高劑量組大鼠肝組織P4502E1的表達顯著降低（P＜0.05），同時TC，TG，SF指標也恢復(fù)接近正常水平。結(jié)論慈菇消脂膠囊可明顯抑制NAFLD大鼠肝組織P4502E1的表達，改善血脂代謝異常，從而發(fā)揮治療NAFLD的作用。

慈菇消脂膠囊；非酒精性脂肪肝?。桓谓M織P4502E1；血脂

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征[1]，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“二次打擊”學(xué)說認為，以細胞色素P4502E1（CYP2E1）為中心形成的氧自由基、脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致肝實質(zhì)損傷是NAFLD的重要發(fā)病機制[2]。據(jù)此，我們運用慈菇消脂膠囊對高脂飼料誘導(dǎo)的NAFLD大鼠進行干預(yù)，觀察其對大鼠肝組織P4502E1及血脂的影響作用，以探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取同批成年雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量約（200±20）g，大鼠（SPF級）均由甘肅中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證為：SCXK2004-006。

1.2 藥物與試劑

慈菇消脂膠囊（主要以山慈菇、澤瀉、山楂、決明子等十五味中藥組成）由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心提供（0.5g×60粒，批號：120412）。吡格列酮片：15mg/片，成都恒瑞制藥有限公司（批準文號：國藥準字H20040631，批號：20120402）。相關(guān)生化指標測定試劑盒均購自南京建成生物研究所，兔抗大鼠肝P4502E1抗體，SP免疫組化染色試劑盒（SPkit）均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 復(fù)制模型與分組處理

取60只SD雄性大鼠，先以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，然后將所有大鼠按體質(zhì)量進行編號，使用隨機數(shù)字表法抽取10只空白組，繼續(xù)用普通飼料喂養(yǎng)；剩余50只都喂以高脂飼料（2%膽固醇；5%蔗糖；18%豬油；2%蛋黃粉；71.3%基礎(chǔ)飼料等）開始造模。自由飲水。至第8周末，隨機處死兩只造模大鼠，剖肝證實模型復(fù)制成功。造模成功后，空白組繼續(xù)以普通飼料喂養(yǎng)，高脂飼料喂養(yǎng)的48只大鼠，按體質(zhì)量隨機分成模型組、吡格列酮組、慈菇消脂丸組（包括高劑量、中劑量、低劑量組）5組，繼續(xù)喂以高脂飼料4周，造模時間共12周。根據(jù)人與大鼠體表面積比，慈菇消脂膠囊組按等效劑量的12倍，6倍，3倍（分別喂以0.162g，0.324g和0.648g/kg。）灌胃給藥。吡格列酮組喂以0.135mg/kg?？瞻捉M每日灌胃等劑量的生理鹽水。實驗期間觀察體質(zhì)量、飲食及尿量。

1.4 樣本處理

灌胃6周后處死所有大鼠，取血剖肝。分離血清，測定血清TC，TG，SF含量。稱取肝臟濕質(zhì)量，計算肝指數(shù)（肝指數(shù)＝肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）。常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色備用。按照試劑盒要求采取免疫組化法（SP）測定肝組織P4502E1含量。

1.5 結(jié)果判定

采用BH-2型顯微鏡（美國，Nikon）拍攝，在高倍鏡(×40)下，每張切片隨機選擇5個視野，圖像采用彩色病理圖文分析系統(tǒng)（成都泰盟，BI-2000型）分析，表達強度用平均吸光度值（A）表示。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析。計量資料用（χ—±s）表示。顯著性檢驗采用單因素方差分析，檢驗水準為0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 慈菇消脂膠囊對NAFLD大鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)的影響

與治療前相比，慈菇消脂膠囊高劑量組治療后大鼠體質(zhì)量降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其余各組治療后體質(zhì)量均增高。與對照組相比，模型組肝指數(shù)增高。與模型組相比，慈菇消脂膠囊組及吡格列酮組肝指數(shù)均降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 慈菇消脂膠囊對NAFLD大鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)的影響[（χ—±s），n=10]

2.2 慈菇消脂膠囊對NAFLD大鼠血脂的影響

模型組血清TC、TG、SF水平明顯高于正常組(P＜0.05)，與模型組相比，慈菇消脂膠囊組及吡格列酮組均有不同程度的降低（P＜0.05）。慈菇消脂膠囊高劑量組作用顯著（P＜0.05），見表2。

2.3 肝組織P4502E1蛋白的表達

空白組可見少量P4502E1蛋白表達；模型組P4502E1蛋白呈高表達；慈菇高劑量組P4502E1蛋白表達與正常組相似，在極少數(shù)脂肪滴周圍呈少量表達。慈菇中、低劑量組P4502E1的表達與肝細胞脂肪變性程度一致；與吡格列酮組相比，慈菇高劑量組P4502E1的表達顯著降低（P＜0.05）。見表3。

表2 慈菇消脂膠囊對NAFLD大鼠血清TG，TC，SF的影響[（χ—±s），n=10]

表3 慈菇消脂膠囊對NAFLD大鼠肝組織P4502E1表達的影響

3 討 論

近年來，隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，NAFLD的發(fā)病率不斷攀高，發(fā)病年齡也逐漸趨向低齡化，嚴重威脅著人類健康。目前，西醫(yī)在治療上尚缺乏理想藥物，主要是他汀類降脂藥，但副作用較多。而中藥防治該病具有一定優(yōu)勢[3]。慈菇消脂膠囊為我科研制的院內(nèi)制劑，多年來運用于臨床取得了較滿意的療效[4]。

慈菇消脂膠囊主要是以山慈菇為君藥，佐以決明子、山楂、澤瀉、丹參、土鱉蟲等15味中藥配伍而成，方中以山慈菇為君藥，具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效，民間用其以化脂肪，已使用良久[5]。澤瀉、山楂以化濁消脂，丹參、土鱉蟲以化瘀通絡(luò)，決明子清肝化濁?，F(xiàn)代藥理研究表明[6]，丹參能有效抑制和減輕肝細胞脂肪變性、壞死以及炎癥反應(yīng)，并可改善肝臟血液循環(huán)等作用，澤瀉能降低對外源性TG、TC的吸收和抑制肝內(nèi)TG的合成，決明子可使HDL增高、TC降低，預(yù)防脂肪沉積。全方共奏化痰解毒、消降濁脂、祛瘀散結(jié)的功效.

細胞色素P450酶是肝臟主要代謝酶，主要存在于肝細胞微粒體中。在正常大鼠肝組織中，表達是很少的。研究發(fā)現(xiàn)[7,8]，在NAFLD中P4502E1高水平表達，并參與NAFLD的形成，在非酒精性脂肪肝的發(fā)病中起到重要作用。脂肪性肝病發(fā)病過程中P4502E1的誘導(dǎo)表達可加重肝內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，并參與肝細胞的氧應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化、細胞凋亡、炎性因子形成及星狀細胞激活等過程。通過抑制肝P4502E1表達，從而中斷肝細胞脂質(zhì)過氧化損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從而達到治療NAFLD的目的。

本研究結(jié)果顯示慈菇消脂膠囊能顯著降低NAFLD大鼠肝細胞P4502E1的表達，高劑量組效果優(yōu)于吡格列酮組（P＜0.05）。并能下調(diào)TC，TG，SF水平，提示其機制是通過減少P4502E1的表達，阻止脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，阻止肝細胞變性和肝臟損傷，提高肝臟分解TG，TC，SF的能力，恢復(fù)肝內(nèi)正常的脂質(zhì)代謝。從而發(fā)揮治療NAFLD的作用。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.非酒精性肝病診療指南(2010年修訂版)[J].中華肝臟病雜志,2010,18(3):163-166.

[2] 王悅之,張玉胃.CYP2E1與非酒精性脂肪肝[J].腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2012,21(4):384-386.

[3] 孫曉波.現(xiàn)代方劑藥理與臨床[M].天津:天津科技翻譯出版公司, 2005.

[4] 楊少軍,孟陸亮,張立清,等.慈菇消脂丸治療脂肪肝的臨床研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2009,16(5):343-344.

[5] 沈瑾秋.山慈菇的臨床應(yīng)用及藥理研究纂要[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2008,22(10):3-4.

[6] 任萍,鞠萍.對肝臟有保護作用單味中藥[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2011,5(17):15-17.

[7] 胡輅,陳東風(fēng),史洪濤,等.肝細胞色素P4502E1在大鼠非酒精性脂肪肝發(fā)生中的作用[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2004,26(17):1561-1563.

[8] 劉樹軍,黃靜娟,車念聰.活血化痰基礎(chǔ)方對大鼠非酒精性脂肪肝模型CYP2E1活性的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2008,18 (2):109-111.

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1671-8194（2013）12-0076-03

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