李懷斌 王 毅 陜西省咸陽市食品藥品檢驗所（咸陽712000）

丹芍生脈膠囊是用來治療心氣不足，心陰虛引起的心悸氣短，胸悶作痛等癥的中藥復(fù)方制劑，由丹參、赤芍、麥冬、五味子等組成。丹酚酸B 與芍藥苷分別為該制劑中主藥丹參和赤芍的主要有效成分［1，2，3，4］，為了能有效的控制該制劑的質(zhì)量。本文將丹酚酸B與芍藥苷作為該制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)，采用高效液相色譜法對其進(jìn)行含量方法學(xué)考察，為該制劑的質(zhì)量控制與評價提供依據(jù)，現(xiàn)將其報道如下。

1 儀器與試藥 1.1 儀器 島津Lc－10ATVP型高效液相色譜儀；Sartorius AGME235S 型電子分析天平；超聲波清洗器（無錫超聲電子設(shè)備有限公司）。

1.2 對照品及試劑 丹酚酸B（批號：111562－200302，供含量測定用），芍藥苷對照品（批號：110736－200321，供含量測定用）均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純（天津四友）；水為二次蒸餾水；其它試劑均為分析純。

1.3 陰性對照樣品 系按處方和生產(chǎn)工藝自制分別不含丹參與赤芍的制劑。

2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件：色譜柱：Kromassil C18（5μm ，250mm×4.6mm）；流速：1.0mL／min。丹酚酸B以乙腈－甲醇－甲酸－水（10：30：1：59）為流動相，檢測波長為286nm；芍藥苷以甲醇－0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動相，檢測波長為230nm。進(jìn)樣量均為5μL。

2.2 供試品溶液的制備 2.2.1丹酚酸：B測定供試品溶液的制備［5］：取本品10粒內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.2g，精密稱定，置50mL 量瓶中，加甲醇－水（1：1）適量，超聲處理（功率80W，工作頻率40KHz）20min，放冷，加甲醇－水（1：1）至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

2.2.2芍藥苷測定供試品溶液的制備：取本品10粒內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取1g，精密稱定，加水5mL溶解后，加于已處理好的氧化鋁柱（內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g，干法裝柱，并先用無水乙醇約20mL 預(yù)洗）上，用無水乙醇20mL 分次洗脫，收集洗脫液，置25mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性關(guān)系的考察 2.3.1丹酚酸B：精密稱取丹酚酸B 對照品10.00mg，置50mL 量瓶中，加水至刻度，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液1、2、3、4、5、6mL 分別置10mL 量瓶中，加水至刻度，其濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12mg／mL。

2.3.2芍藥苷：精密稱取芍藥苷對照品25.00mg，置25mL 量瓶中，加無水乙醇至刻度，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液2、4、6、8、10mL，分別置10mL量瓶中，分別加入無水乙醇至刻度，其濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1mg／mL

2.3.3測定與計算：分別吸取上述溶液各5μL 注入液相色譜儀，按2項下方法測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得丹酚酸B回歸方程為Y ＝1E＋07X－2743（r＝0.9998），芍藥苷回歸方程為Y ＝8E＋0.6X－14882（r＝0.9999）；其線性范圍分別為0.1～0.6μg與1 ～5μg。表明線性良好。

2.4 專屬性試驗 按測定用樣品的處方和生產(chǎn)工藝，分別制備不含丹參的陰性對照樣品和不含赤芍的陰性對照樣品，同法制備空白供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μl，結(jié)果在丹酚酸B 與芍藥苷色譜峰對應(yīng)的位置上，均未檢測出對應(yīng)色譜峰。說明其它藥材中成分在該供試品的制備方法及色譜條件下對所測定成分不產(chǎn)生干擾。

2.5 精密度試驗 取供試品溶液（批號20110201），按2項下方法和條件提取測定，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積值，結(jié)果丹酚酸B RSD 為0.5%，芍藥苷RSD 為1.0%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取本品（批號20110301），按2項下方法，于0h、2h、4h、6h、8h各進(jìn)樣一次，分別測定其丹酚酸B 與芍藥苷峰面積積分值，結(jié)果RSD 分別為1.0%與1.4%。表明樣品溶液制備后8h內(nèi)進(jìn)樣穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實驗 按2 項下方法，對同一樣品（批號20110301）分別制備5份供試品溶液，測丹酚酸B與芍藥苷的含量，其RSD 分別為1.5%和2.2%，表明重復(fù)性較好。

2.8 加樣回收率試驗 2.8.1丹酚酸B：取已知含量的樣品（批號20110301），平均含丹酚酸B8.7619mg／粒，精密稱定5 份，分別加入濃度為0.145mg／mL 的丹酚酸B 對照品溶液10mL，按2項下方法和條件制備加樣回收供試品溶液，并注入高效液相色譜儀，測定分析，結(jié)果見表1。

表1 丹酚酸B加樣回收率實驗結(jié)果

2.8.2芍藥苷：精密稱取已測知含量的樣品（批號20110301，平均含芍藥苷6.5561mg／粒）0.4g，精密稱定，共5份，分別精密加入5mL芍藥苷對照品溶液（1.35mg／mL），按2項下方法和條件方法制備加樣回收供試品溶液，并注入高效液相色譜儀，測定分析，計算回收率。結(jié)果見表2。

表2 芍藥苷加樣回收率實驗結(jié)果

2.9 樣品的含量測定 對本品3批樣品進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品中丹酚酸B含量測定結(jié)果

3 小結(jié) 3.1 丹酚酸 B 提取時，曾用超聲處理10、20、30min（功率80W，頻率40KHz）結(jié)果10、20、30min測定結(jié)果相近，為確保提取完全，故選擇超聲處理20min。

3.2 芍藥苷曾嘗試以甲醇20mL 稱定重量 浸泡4h，超聲20min，取續(xù)濾液測定與2.2.2項下方法比較，結(jié)果2.2.2項下方法分離較好。

3.3 參照有關(guān)資料［6］芍藥苷測定用甲醇－0.05mol／L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）和磷酸鹽緩沖液－乙腈（65∶10）分別為流動相進(jìn)行比較，結(jié)果后者出峰時間較晚、測定結(jié)果不理想，故采用了前者。

3.4 本實驗確定的方法測定丹酚酸B 和芍藥苷含量，結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定，可作為本產(chǎn)品的質(zhì)量控制項目。

［1］ 周 丹，權(quán) 偉，關(guān) 月，等；丹酚酸B 通過AkteNOS通路對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究＊［J］.陜西中醫(yī)，2013，34（1）：104－107.

［2］ 陳昕琳，章怡祎，顧仁樾.丹參多酚酸B 對動脈粥樣硬化大鼠OX40／OX40L免疫通路研究［J］.陜西中醫(yī)，2012，33（6）：758－761.

［3］ 張 良，袁冬平，徐 立，等.丹酚酸B對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機制研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2008，6（19）：467－469.

［4］ 孫 蓉，呂麗莉，郭守東，等，芍藥苷對局灶性腦缺血模型及血腦屏障的影響［J］.中國藥學(xué)雜志，2006，（11）：78－89.

［5］ 畢躍峰，賈陸，張小娟，等，不同提取方法對丹參中丹參酮ⅡA 和丹酚酸B 含量測定的影響［J］.藥物分析雜志，2009，（07）：54.

［6］ 中國藥典委員會.中國藥典［M］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：120.