解世全 ，孟 輝 ，王一淞 ，趙煥君，趙 琳

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600；2.沈陽斯佳生物制藥有限公司，遼寧 沈陽 110168）

川芎為常用的活血化瘀藥,來源于傘形科植物川芎Ligusticumchuanxiong Hort的干燥根莖。臨床用于治療心腦血管、高血壓、粥樣動脈硬化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等。

60年代開始，輻照滅菌法應(yīng)用于食品行業(yè)。輻照滅菌大量應(yīng)用于醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)，現(xiàn)在應(yīng)用的輻照滅菌通常利用60Co輻射源放出的γ-射線，γ-射線穿透力強，不僅絕大多數(shù)生物體對射線敏感，而且適用于較厚樣品，特別是已包裝密封物品的滅菌，滅菌效果可靠，并且可有效防止“二次污染”。輻照過程中，被滅菌的物品溫度變化小，一般溫度只升高2～3℃，適用于含揮發(fā)性成分或不耐熱藥品的滅菌。用輻照滅菌法對中藥進行滅菌處理是解決中成藥微生物污染問題的有效途徑，已受到重視，并被廣泛應(yīng)用。

輻照滅菌法的應(yīng)用越來越廣泛，但是對其在藥物滅菌方面的使用情況還有很多問題需要明確，什么藥物不能使用輻照滅菌法，可以應(yīng)用輻照滅菌法滅菌的藥物應(yīng)該選擇什么輻照劑量進行滅菌。進而可以加以深入研究輻照滅菌的影響因素，可能引起藥物成分發(fā)生化學(xué)變化的原因，繼而尋找避免或減少藥物成分被破壞的方法等等。

本課題選擇川芎藥材飲片及粉末分別進行一定劑量的輻照滅菌，然后對藥材中阿魏酸成分進行含量測定，比較滅菌前后阿魏酸的含量變化，考察應(yīng)用輻照滅菌法進行滅菌，是否會導(dǎo)致川芎中阿魏酸含量變化，為今后的深入研究打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器及試劑

agilent 1100型安捷倫高效液相儀（美國安捷倫公司）；CP225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；DS3120型超聲波清洗器（Tianjin Do-Chrom Technology Co.Ltd）；手提式粉碎機（浙江中藥機械有限公司）。

無水甲醇（A.R.）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；無水甲醇（C.P.）（天津市科密歐化學(xué)制劑有限公司）；H3PO4（A.R.）（津市大茂化學(xué)制劑廠）

1.2 藥材及對照品

川芎藥材，購于安徽亳州藥材市場，為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort的干燥根莖，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)許亮副教授鑒定為正品。

阿魏酸對照品（購于中國藥品生物制品檢定所）。

2 實驗內(nèi)容

2.1 色譜條件

色譜柱：Accurasil-C18（250mm×4.6mm 5um）色譜柱；流動相：甲醇-水-磷酸（30∶70∶0.05）；檢測波長：320nm；體積流量：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

在該色譜條件下,阿魏酸色譜峰達到基線分離。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的阿魏酸適量置于5mL容量瓶內(nèi)，加甲醇定容，制成6.67μg·mL-1的阿魏酸對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 藥品的處理 取川芎飲片若干克，分為3份，將其中一份粉碎約80目，然后將粉末與一份飲片經(jīng)10K格瑞劑量滅菌制成經(jīng)輻照滅菌的粉末及飲片，另一份為未滅菌飲片。

2.3.2 供試品的制備 取3份川芎樣品粉末，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30min，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性范圍考察

取阿魏酸樣品溶液，依選定的色譜條件進樣測定，進樣量在4、8、12、16、20μL記錄色譜圖，讀取峰面積，以進樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸,得回歸方程為Y=5012.3X+21.596，r=0.9994。

結(jié)果表明，阿魏酸含量在0.02268～0.11340μg范圍內(nèi)，阿魏酸的含量與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度考察 取未滅菌的川芎藥材0.5g，按照上述供試品溶液配制的方法制備成供試品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄阿魏酸的峰面積值，計算其RSD值為1.66%，結(jié)果表明精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性考察 取川芎粉末，按上述供試品溶液配制的方法制備成供試品溶液，密閉、避光于室溫放置，分別于0、2、4、6、8、10h進樣，測定阿魏酸峰面積值，計算RSD值為1.43%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫避光放置10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.3 重復(fù)性試驗 取川芎粉末，精密稱取6份，每份約0.5g，精密稱定，按2.3.2項下方法制備成供試品溶液，進行測定，計算RSD值為1.17%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.5.4 加樣回收率 取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同批川芎粉末約0.25g，精密稱取6份，置50mL具塞錐形瓶中，加入0.4 mL阿魏酸對照品溶液（6.67μg·mL），再精密加入70%甲醇25mL，按上述供試品溶液配制的方法制備成6份供試品溶液，進樣，測定，根據(jù)阿魏酸原有量、測得量、加入量計算平均回收率為101.387%，其RSD為1.52%。結(jié)果表明，加樣回收率良好。

2.6 含量測定

分別各取3種川芎藥材粉末，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲30min，再稱定稱質(zhì)量，用70%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得樣品，進樣，測定，數(shù)據(jù)見表1。

表1 含量測定Tab.1 Content determination

2.7 結(jié)果分析

采用excel軟件進行分析，通過滅菌藥材與未滅菌藥材阿魏酸含量方差分析可知，F(xiàn)值大于F臨界值，P值小于0.05，說明兩組數(shù)據(jù)之間存在著顯著性差異。

通過滅菌藥材與滅菌粉末中阿魏酸含量方差分析表可知，F(xiàn)值大于F臨界值，P值小于0.05，說明兩組數(shù)據(jù)之間有顯著性差異。

3 結(jié)果與討論

（1）將阿魏酸對照品溶液在紫外分光光度計上掃描,發(fā)現(xiàn)在320nm處有最大吸收且干擾較少,故選擇320nm為檢測波長。阿魏酸對照品不穩(wěn)定,受溫度、光線等影響易發(fā)生轉(zhuǎn)化,含量測定時加入一定量的酸可增加阿魏酸的穩(wěn)定性。

（2）在提取溶劑的考察上，分別比較了體積分?jǐn)?shù)50%、60%、70%、80%、90%和100%的甲醇及水等,優(yōu)選出70%的甲醇為溶劑。另外全面考察了不同提取方式、溫度、時間、次數(shù)等諸多因素。所建立的方法簡便可行,易于操作,重現(xiàn)性好。

4 結(jié)論

（1）說明通過輻射滅菌法對川芎進行滅菌，其中阿魏酸含量會發(fā)生顯著性降低。故以阿魏酸為指標(biāo)說明川芎藥材不適宜于采用10K格瑞劑量的輻照滅菌法進行滅菌。

（2）以粉末形式與藥材形式進行滅菌，阿魏酸含量亦有明顯差異，與輻射滅菌穿透力強的特點不吻合。有待于進一步研究。

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