蘇彥文，張鳳榮，蘇彥斌

(1.吉林化工學(xué)院教務(wù)處，吉林吉林132022;2.吉林省食品藥品檢驗(yàn)所，吉林長(zhǎng)春130033，3.吉林化工學(xué)院化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林吉林132022)

5-羥甲基糠醛 (5-Hydroxymethyl furfural，5-HMF)是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物［1-2］，對(duì)人體的橫紋肌和內(nèi)臟有損害作用［3-4］，是含葡萄糖等單糖注射劑中重要的有關(guān)物質(zhì)［5］，因此，葡萄糖制劑均要控制5-HMF的限度［6］.目前，檢測(cè)5-HMF的方法主要有紫外-可見分光光度法(UV)和反相高效液相色譜法(RP-HPLC)［7］.RP-HPLC 需要高效液相色譜儀，樣品處理要求高、檢測(cè)費(fèi)時(shí)、成本高并需要對(duì)照品.UV法檢測(cè)5-HMF，最大吸收波長(zhǎng)為284 nm，樣品在該處無(wú)干擾，參照5%葡萄糖注射液的限量，可以不用對(duì)照品，直接比較.本文分別用兩種方法，測(cè)定奧拉西坦葡萄糖注射液中5-HMF的含量.

1 儀器與試藥

島津UV-1700紫外-可見分光光度計(jì)，Metter AE-163電子天平，奧拉西坦葡萄糖注射液樣品(20120801、20120802、20120803、20121101).5-羥基甲基糠醛對(duì)照品，批號(hào):BCBF6127V，Sigma公司，含量:99%.甲醇為色譜純，水為純化水，其它試劑為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外-可見分光光度法測(cè)定奧拉西坦克葡萄糖注射液中的5-HMF

2.1.1 專屬性

取5-HMF對(duì)照品，加水制成約10 μg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液;取樣品作為測(cè)試品溶液;另取奧拉西坦原料藥適量，加水制成4%的溶液，加枸櫞酸和枸櫞酸鈉適量，制成陰性對(duì)照溶液，取上述三種溶液，在200～400 nm用UV-1700紫外-可見分光光度計(jì)掃描，結(jié)果:對(duì)照品溶液在284 nm有最大吸收，奧拉西坦葡萄糖注射液也在284有吸收，陰性對(duì)照溶液在284 nm無(wú)吸收.

2.1.2 測(cè)定方法

精密量取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品20 m:(約相當(dāng)于葡萄糖1.0 g)，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為測(cè)試品溶液.另取5-HMF對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液.分別取對(duì)照品溶液和測(cè)試品溶液，在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，用對(duì)照品法計(jì)算5-HMF的含量.

2.1.3 重復(fù)性

取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品1批，分別制備6份測(cè)試品溶液，作為供試品溶液.按2.1.2項(xiàng)下的測(cè)定方法測(cè)定.結(jié)果:樣品的平均含量為0.003 0%(以葡萄糖的標(biāo)示含量計(jì)算)，RSD為4.21%，結(jié)果表明重復(fù)性較好.

急性乳腺炎主要是指乳房部最為多見的急性化膿感染性疾病。因產(chǎn)后婦女的抵抗力嚴(yán)重下降,在出現(xiàn)乳汁淤積、乳頭破損、乳管浸入乳房等情況后均會(huì)導(dǎo)致乳腺出現(xiàn)繼發(fā)感染,并因此導(dǎo)致該病發(fā)生,多出現(xiàn)在哺乳期早期階段[1]。中醫(yī)認(rèn)為哺乳期早期乳腺炎應(yīng)歸屬于“郁滯期乳癰”的范疇,多以推拿療法、外治法、針刺療法等為主要治療手段,而推拿療法是哺乳期早期乳腺炎最常見的一種特色治療方法?，F(xiàn)結(jié)合我院接診的哺乳期早期乳腺炎患者,對(duì)揉散法聯(lián)合理療治療的方法及效果,做如下總結(jié)。

2.1.4 線性關(guān)系考察

取5-HMF對(duì)照品約 15 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 0.10、0.20、0.40、1.20、2.00、2.80、3.60 mL，分別置100 ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，在284 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度(μg/ml)對(duì)吸光度(A)回歸處理，得線性方程:Y=0.1330X+0.002 3，r=0.999 8.結(jié)果表明:5-HMF溶液在0.15～5.4 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好.

2.1.5 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取5-HMF對(duì)照品約5、10、15 mg各3份，分別置100 mL容量瓶中，按處方比例，加入奧拉西坦原料，按處方加入適量(枸櫞酸25 mg，枸櫞酸鈉50 mg)輔料，加水適量使溶解，分別加入5-HMF對(duì)照品溶液15 mL(0.100 1 mg/mL)，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取濾液5 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為測(cè)試品溶液.另取重復(fù)性項(xiàng)下的對(duì)照品溶液作為對(duì)照品溶液，同法測(cè)定，計(jì)算結(jié)果:平均加樣回收率為99.56%，RSD為2.40%.

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

5-HMF對(duì)照品溶液與測(cè)試品溶液，分別于0、1、2 h，在紫外-可見分光光度計(jì)上測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果RSD為1.74%.結(jié)果顯示:測(cè)試品溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.2 RP-HPLC法測(cè)定奧拉西坦克葡萄糖注射液中的5-HMF

2.2.1 系統(tǒng)適用性與色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Agilent C18(250 ×4.6 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(10:90)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm，柱溫:30 ℃，流速:0.7 ml/min，進(jìn)樣量 10 μl，理論板數(shù)以5-HMF計(jì)為5 000以上，如圖1所示..

圖1 A:5-HMF對(duì)照品;B:奧拉西坦葡萄糖注射液測(cè)試品;C陰性

取5-HMF對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成10 μg/ml的溶液，取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品作為測(cè)試品溶液.

2.2.3 專屬性試驗(yàn)

取奧拉西坦原料藥適量，制成4%的溶液，加枸櫞酸和枸櫞酸鈉適量，制成陰性對(duì)照溶液，取溶液制備中的對(duì)照品溶液、測(cè)試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果顯示:陰性對(duì)檢測(cè)無(wú)干擾.

2.2.4 重復(fù)性

取奧拉西坦葡萄糖注射液樣品1批，按上述色譜條件，分別測(cè)定6次.結(jié)果:樣品5-HMF的平均含量為0.0030%，RSD為0.02%，表明重復(fù)性較好.

2.2.5 線性關(guān)系考察

取5-HMF對(duì)照品約 10 mg，精密稱量，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.5、10 mL，分別置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別作為線性試驗(yàn)溶液(1)和(2);精密吸取線性試驗(yàn)溶液(1)1 μL和線性試驗(yàn)溶液(2)1、5、10、20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量(μg)對(duì)峰面積(A)回歸處理，結(jié)果:5-HMF進(jìn)樣量在 0.001 494～0.199 2 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，線性方程:Y=12 694.45X-3.36，相關(guān)系數(shù)r=1.0.

表1 5-HMF含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

2.2.6 最低檢測(cè)限和定量限

取對(duì)照品溶液，稀釋至0.02 μg/mL的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，以信噪比S/N=3計(jì)算的最低檢測(cè)限為0.41 ng，以信噪比S/N=10計(jì)算的定量限 1，60 ng.

2.2.7 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取5-HMF對(duì)照品(含量:99%)約5 mg 3份，分別置100 mL量瓶中，按處方比例，加入適量輔料，加流動(dòng)相適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為測(cè)試品溶液.精密稱取5-HMF對(duì)照品(含量:99%)約 5、10、15 mg各3份，分別置100 mL量瓶中，按處方比例，加入適量輔料，加流動(dòng)相適量使溶解，分別加入對(duì)照品溶液15 mL(0.100 1 mg/mL)稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為測(cè)試品溶液，取對(duì)照品溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果:平均回收率為99.87%，RSD=1.2%(n=12)，結(jié)果精密度良好.

2.2.8 精密度實(shí)驗(yàn)

取5-HMF的對(duì)照品溶液(濃度為4.98μg/mL)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣1 μL，記錄色譜圖及峰面積，RSD為0.41%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明精密度良好.

2.2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，按以上色譜條件，分別于0、2、4 h，精密吸取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.84%.結(jié)果顯示:5-HMF對(duì)照品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定.

2.3 樣品測(cè)定

分別用紫外-可見分光光度法和高效液相色譜法，測(cè)定4批奧拉西坦葡萄糖注射液樣品，結(jié)果含5-HMF分別為0.002 8%、0.002 9%、0.002 9%、0.003 0%，兩種方法測(cè)定結(jié)果(紫外-可見分光光度法，用對(duì)照品法以吸光度計(jì)算，高效液相色譜法，用對(duì)照品法以峰面積計(jì)算，均以葡萄糖的標(biāo)示量的百分含量計(jì)算)基本一致.

3 討 論

專屬性考查結(jié)果，兩種方法陰性均不干擾實(shí)驗(yàn)，兩種方法相比，UV 方法［8］:簡(jiǎn)單、快速、不需對(duì)照品;高效液相色譜法:相對(duì)成本高、麻煩、費(fèi)時(shí)，還需要對(duì)照品等.因此，在陰性不發(fā)生干擾的前提下，應(yīng)首選紫外-可見分光光度法，兩種方法檢測(cè)結(jié)果基本一致.

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