魏必 潘珊珊

上海體育學(xué)院運(yùn)動(dòng)科學(xué)學(xué)院（上海200438）

短時(shí)間內(nèi)對心肌進(jìn)行一次或反復(fù)多次的缺血再灌注，可增加心肌保護(hù)物質(zhì)的表達(dá)，減輕心肌組織的缺血再灌注損傷，誘導(dǎo)強(qiáng)大的內(nèi)源性保護(hù)作用，這一過程被稱為缺血預(yù)適應(yīng) （ischemicpreconditioning，IP）［1］。IP的發(fā)現(xiàn)為臨床心血管疾病的治療提供了新的思路，雖在臨床應(yīng)用上仍存在局限，但預(yù)適應(yīng)的理念得到了很好的擴(kuò)展。首先，預(yù)適應(yīng)的方式得到豐富，從最初冠狀動(dòng)脈結(jié)扎發(fā)展到藥物刺激、肢體結(jié)扎、溫度、低氧、運(yùn)動(dòng)等，出現(xiàn)了藥物預(yù)適應(yīng)、溫度預(yù)適應(yīng)、低氧預(yù)適應(yīng)、運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)等新型預(yù)適應(yīng)；其次，基礎(chǔ)研究手段推陳出新，從藥物阻斷、離體灌注到細(xì)胞培養(yǎng)、基因敲除等，明確了預(yù)適應(yīng)相關(guān)物質(zhì)的生物學(xué)作用；第三，研究思路不斷開拓，從對心臟的器官水平研究發(fā)展到心臟與各器官及四肢的系統(tǒng)水平研究，即遠(yuǎn)程預(yù)適應(yīng)，預(yù)適應(yīng)的時(shí)間也從缺血再灌注（I/R）前擴(kuò)展到I/R后，即缺血后適應(yīng)。其中，運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)（exercise preconditioning，EP）是短時(shí)間內(nèi)通過一次持續(xù)或反復(fù)多次間歇的大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)，造成心肌相對或絕對的缺血缺氧，從而增加保護(hù)效應(yīng)物質(zhì)表達(dá)，提高心肌組織對隨后長時(shí)間缺血的耐受，減輕缺血再灌注損傷，誘導(dǎo)心肌保護(hù)作用［2］。EP作為一種獨(dú)特的預(yù)適應(yīng)方式，在充分調(diào)動(dòng)人體各系統(tǒng)功能的前提下，發(fā)揮心肌保護(hù)作用，具有創(chuàng)傷性小、簡便易行、強(qiáng)度可控的特點(diǎn)。

EP與IP所涉及的物質(zhì)，根據(jù)其在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用，可初步分為觸發(fā)物質(zhì)、中介物質(zhì)和效應(yīng)物質(zhì)三類。蛋白激酶C（proteinkinaseC，PKC）作為IP和EP心肌保護(hù)效應(yīng)的中介物質(zhì)，發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用，且主要涉及α、δ、ε三個(gè)PKC亞型。目前相關(guān)研究認(rèn)為：δPKC主要介導(dǎo)心肌損傷，但其激活是發(fā)揮EP保護(hù)作用的前提［32-36］；εPKC主要通過改善細(xì)胞能量供應(yīng)、維持細(xì)胞離子平衡、增加效應(yīng)物質(zhì)表達(dá)，介導(dǎo)EP保護(hù)效應(yīng)［38-40］；αPKC的功能尚存爭議：部分學(xué)者認(rèn)為［24-27］αPKC可增加效應(yīng)物質(zhì)表達(dá)，介導(dǎo)心肌保護(hù)，而另一部分學(xué)者［21］認(rèn)為αPKC在EP心肌保護(hù)效應(yīng)中作用較小，主要在心肌肥大和心衰過程中發(fā)揮作用。本文通過對EP保護(hù)效應(yīng)中PKC亞型的相關(guān)研究進(jìn)行總結(jié)，并結(jié)合IP心肌保護(hù)效應(yīng)中PKC亞型的相關(guān)研究，為今后EP心肌保護(hù)效應(yīng)中PKC的研究提供一些參考和思路，有利于更好地明確EP過程中α、δ、εPKC的生物學(xué)功能及α、δ、εPKC各亞型間關(guān)系。

1 PKC的生物學(xué)特征

1.1PKC的分類

PKC是一種廣泛分布于人體的絲氨酸/蘇氨酸（Ser/Thr）激酶，可通過磷酸化多種蛋白質(zhì)的Ser/Thr殘基，調(diào)節(jié)組織細(xì)胞的代謝、生長、增殖和分化等過程。 PKC家族共有11個(gè)成員，可分為三類［3］：（1）傳統(tǒng)型PKC（conventionalPKC，cPKC）包括α、βI、βII、γ，可被磷脂酰絲氨酸（PS）、Ca2+、二?；视停―AG）或豆蔻酸212佛波醇213乙醇脂 （phorbol212-myristate 213-acetate，PMA）等激活；（2）新型PKC（novelPKC，nPKC）包括δ、ε、η、θ，其不被Ca2+激活，可被DAG和PMA激活；（3）非典型PKC（atypicalPKC，aPKC）包括ζ、λ、τ，其不被Ca2+、DAG或PMA激活，可被脂類衍生的第二信使激活。μPKC，因其結(jié)構(gòu)與功能，已被歸入蛋白激酶D（proteinkinaseD，PKD）家族。

1.2PKC的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)

PKC均為單鏈多肽結(jié)構(gòu)，N端為調(diào)節(jié)域，C端為催化域，通過絞鏈區(qū)相連。cPKC有4個(gè)保守區(qū)（C1~C4）和5個(gè)可變區(qū) （V1~V5）。C1區(qū)有PS和DAG的結(jié)合位點(diǎn)，PMA也作用于該域，PKC可通過C1區(qū)前的假底物位點(diǎn)，調(diào)節(jié)自身活性；C2區(qū)為cPKC特有的Ca2+結(jié)合位點(diǎn)；C3、C4區(qū)為ATP和底物的結(jié)合位點(diǎn)。nPKC缺失C2區(qū)，不可被Ca2+激活；aPKC因C1區(qū)部分缺失和C2區(qū)封閉，不可被Ca2+和DAG激活。V3區(qū)連接PKC調(diào)節(jié)域（C1、C2區(qū)）和催化域（C3、C4區(qū)），V3區(qū)暴露時(shí)可被蛋白酶水解，使PKC激活。

PKC未激活時(shí)溶于胞質(zhì)，當(dāng)?shù)谝恍攀古cGq蛋白結(jié)合，可激活磷酸酯酶Cβ（phospholipaseCβ，PLC-β）， 從 而 將 膜 上 的 脂 酰 肌 醇4，5-二 磷 酸（phosphatidylinositolbiphosphate，PIP2） 分解為兩個(gè)細(xì)胞內(nèi)的第二信使：DAG和三磷酸肌醇（IP3），再激活PKC，引起級聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)行細(xì)胞的應(yīng)答。該通路也稱IP3-DAG-Ca2+信號通路。PKC可增加相關(guān)蛋白表達(dá)，或通過激活促分裂素活化蛋白激酶 （mitogenactivatedproteinkinases，MAPKs）、 核因子κB （NF-κB）等，發(fā)揮生物學(xué)作用。PKC由胞質(zhì)向胞膜或其他部位轉(zhuǎn)移的過程稱為轉(zhuǎn)位（translocation）。

1.3PKC的心臟分布特點(diǎn)

PKC的心臟分布具有種屬特點(diǎn)。在人心室細(xì)胞中，通過免疫印跡法檢測到了α、βI、βII、δ、ε、η、ζ、λ、τ共9種PKC亞型［4］；成年大鼠心臟中，主要PKC亞型為ε、δ，其次為η、ζ、τ，cPKC只占一小部分；兔心臟中檢測到除θ外的其他10種PKC亞型，且cPKC含量較nPKC豐富；而犬心臟中主要是ε和ζ兩種PKC亞型［5］。

PKC的心臟表達(dá)可隨年齡變化。Takayama等［6］發(fā)現(xiàn)心肌PKC含量可隨年齡改變，成年鼠心臟較新生鼠αPKC有所增加，δPKC有所下降；而老年鼠心臟中αPKC表達(dá)更多，δPKC則更少。 Rybin等［7］在胎兒和新生兒心肌組織中發(fā)現(xiàn)α、β、ε和ζPKC的含量較成人高，且隨年齡的增長而降低。

2 EP心肌保護(hù)效應(yīng)及生物學(xué)機(jī)制

2.1EP的心肌保護(hù)效應(yīng)

長期適度運(yùn)動(dòng)對心血管的形態(tài)和功能有積極影響，短時(shí)間內(nèi)一次或反復(fù)多次間歇大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對心肌同樣具有保護(hù)作用。而EP對心肌I/R損傷的保護(hù)效應(yīng)主要表現(xiàn)為：

1.增強(qiáng)心肌組織應(yīng)激能力。Michaelides等［8］對50位年齡在50~72歲的慢性心絞痛患者進(jìn)行4次運(yùn)動(dòng)，首次運(yùn)動(dòng)24h后，再進(jìn)行其余3次運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)不限時(shí)，出現(xiàn)危險(xiǎn)癥狀時(shí)停止。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大多數(shù)患者的運(yùn)動(dòng)能力有所提高，并提示與胞外超氧化物歧化酶（Ec-SOD）的活性升高有關(guān)。彭峰林等［9］對大鼠進(jìn)行2min速度為16m/min的跑臺運(yùn)動(dòng)后，再進(jìn)行2min速度50 m/min的跑臺運(yùn)動(dòng)，坡度5°，重復(fù)10次，結(jié)果顯示，EP可顯著降低心肌組織丙二醛（MDA）含量，并顯著提高SOD和GPx的活性，說明EP可有效提升心肌組織抗氧化能力。EP同樣可提升心肌抗急性損傷能力，Shen等［10］對大鼠進(jìn)行速度28~30m/min、坡度為0、運(yùn)動(dòng)10 min休息10min、重復(fù)4次的跑臺運(yùn)動(dòng)，EP組異丙腎上腺素（ISO）對大鼠心肌的急性損傷作用明顯減輕，且血清心肌肌鈣蛋白I（cardiactroponinI，cTnI）濃度降低，心肌缺血缺氧染色改變較輕。

2.提高血管活性， 縮小梗死面積。Wu等［11］對FVB小鼠在缺血前后分別進(jìn)行運(yùn)動(dòng)，發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)可明顯縮小心肌梗死面積，并上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）及其受體Flt-1和Flk-1的表達(dá)，增加微血管和毛細(xì)血管密度。潘珊珊等［12］讓大鼠運(yùn)動(dòng)15min后休息5min，重復(fù)4次，發(fā)現(xiàn)EP組大鼠心肌梗死面積較對照組明顯縮小，并發(fā)現(xiàn)降鈣素基因相關(guān)肽 （calcitoningenerelated peptide，CGRP）的表達(dá)增加，提示其通過影響血管活性，參與EP心肌保護(hù)效應(yīng)，但并未發(fā)現(xiàn)其mRNA水平發(fā)生改變。

3.降低心律失常和心肌頓抑的發(fā)生率。Hamilton等［13］對雄性SD大鼠進(jìn)行3天、每天60min、速度30m/min、坡度0的跑臺運(yùn)動(dòng)后24h，再進(jìn)行15 min/20min的I/R，發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)組心肌梗死面積較對照組明顯縮小，組織中MnSOD活性升高，I/R后心律失常和心肌頓抑的發(fā)生率明顯降低。之后研究認(rèn)為運(yùn)動(dòng)可提高心肌氧化還原能力，降低I/R后心律失常發(fā)生率，但本質(zhì)上與心肌細(xì)胞電生理平衡有關(guān)，并提示EP可開啟細(xì)胞膜敏感鉀通道（sarcoKATP），對調(diào)控細(xì)胞電生理有重要作用［14］。

EP有兩個(gè)保護(hù)效應(yīng)期，即早期保護(hù)效應(yīng)期（early preconditioning） 和 晚 期 保 護(hù) 效 應(yīng) 期 （delayed preconditioning）。早期保護(hù)效應(yīng)從運(yùn)動(dòng)后即刻開始，一般持續(xù)1~3h；晚期保護(hù)效應(yīng)在首次缺血后12~24 h出現(xiàn)，一般持續(xù)48~72h。 Lennon等［15］對大鼠進(jìn)行5天、速度30m/min、坡度0的跑臺運(yùn)動(dòng)，持續(xù)時(shí)間從第1天的10min，依次遞增至第5天的50min后，采用同等強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)3天，每天60min。并在停止運(yùn)動(dòng)后第1、3、9、18天進(jìn)行20min/30min的I/R，結(jié)果顯示，與對照組相比，運(yùn)動(dòng)組在停止運(yùn)動(dòng)后第1、3、9天的I/R損傷程度依然較輕，但在第18天后無明顯差別。

2.2EP心肌保護(hù)效應(yīng)的生物學(xué)機(jī)制

IP相關(guān)物質(zhì)可根據(jù)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)系大致分為觸發(fā)物質(zhì)、中介物質(zhì)和效應(yīng)物質(zhì)。作為IP的特殊“延伸”，EP心肌保護(hù)效應(yīng)相關(guān)物質(zhì)雖與IP有所不同，但仍可參考IP的思路進(jìn)行分類：

1.觸發(fā)物質(zhì)：腺苷、腎上腺素激動(dòng)劑、阿片肽、NO、BK、ROS等。 Capecchi等［16］對患有外周動(dòng)脈閉塞癥（POAD）的患者進(jìn)行5次5min大強(qiáng)度跑臺運(yùn)動(dòng)，每次EP后休息2h。結(jié)果顯示，EP后患者的無痛跑距和總跑距較之前分別有15.4%和26.9%的提升，且心血管功能明顯提升，并與血漿中腺苷和ATP濃度增加有關(guān)。

2.中介物質(zhì)：PKC等。EP可明顯改變心肌PKC亞型的表達(dá)，PKC被激活后可向細(xì)胞膜、核轉(zhuǎn)位，并通過MAPK和NF-κB通路，增加內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)的表達(dá)，介導(dǎo)心肌保護(hù)。Yamashita等［17］對大鼠進(jìn)行一次持續(xù)30min、速度23～27m/min、坡度為0的EP，可明顯縮小I/R后的心肌梗死面積，但該保護(hù)效應(yīng)可被PKC抑制劑白屈菜赤堿（chelerythrine，CHE）取消，提示EP心肌保護(hù)效應(yīng)由PKC介導(dǎo)。

3.效應(yīng)物質(zhì)：ATP敏感鉀通道（KATP）、熱休克蛋白（HSP）、谷胱甘肽（GSH）、SOD等。Demirel等［18］對雌性SD大鼠進(jìn)行3~5天、每天60min、相當(dāng)于60~70%VO2max的跑臺運(yùn)動(dòng)后發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)組大鼠心肌收縮力明顯提高，并認(rèn)為與HSP72、GSH和MnSOD的表達(dá)增加有關(guān)。 French等［19］對雄性SD大鼠進(jìn)行3天、每天60 min、速度30m/min、坡度0的跑臺運(yùn)動(dòng)后，再進(jìn)行50 min/120min的I/R。結(jié)果顯示，運(yùn)動(dòng)組MnSOD及鈣結(jié)合蛋白（L型Ca2+通道、磷脂蛋白和肌漿網(wǎng)ATP酶）的含量和活性均有顯著增加，降低了心肌組織的I/R損傷。運(yùn)動(dòng)對心肌的保護(hù)作用是通過細(xì)胞膜ATP敏感鉀通道 （sarcoKATP） 還是線粒體ATP敏感鉀通道（mitoKATP）實(shí)現(xiàn)仍存爭議，但二者均可有效防止細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載引起的線粒體腫脹［20］。

3 PKC介導(dǎo)EP心肌保護(hù)效應(yīng)

目前PKC介導(dǎo)EP心肌保護(hù)效應(yīng)的研究逐漸增多，大多集中于單純觀察PKC蛋白和基因表達(dá)變化對心肌保護(hù)的影響。雖對PKC及其上下游物質(zhì)的研究也不少，但δPKC、εPKC與下游效應(yīng)物質(zhì)的關(guān)系研究占很大比例，αPKC的相關(guān)研究較缺乏。

3.1 αPKC在EP保護(hù)效應(yīng)中的作用

αPKC作為心肌細(xì)胞中主要的cPKC，對Ca2+有強(qiáng)烈的依賴，是心肌細(xì)胞生長的調(diào)節(jié)因子，并可改變肌漿網(wǎng)對Ca2+的作用，調(diào)節(jié)蛋白磷脂酶-1（PP-1）活性，降低心肌收縮力。αPKC基因敲除小鼠的心肌收縮力高，αPKC過表達(dá)小鼠的心肌收縮力低，且在長期受到外周負(fù)荷刺激下產(chǎn)生肥大，甚至心衰［21］。最新研究發(fā)現(xiàn)，鈣超載的干細(xì)胞在進(jìn)行葡萄糖剝奪處理后，可短暫激活αPKC和ERK1/2，是細(xì)胞固有促存活機(jī)制（intrinsicprosurvivalmechanism）中的一部分，可減輕干細(xì)胞的缺血損傷［22］。由此可見，在心肌細(xì)胞缺血時(shí)，αPKC發(fā)揮著重要作用，但對αPKC在EP心肌保護(hù)效應(yīng)中作用的研究，多停留于其是否發(fā)生轉(zhuǎn)位，而對其下游物質(zhì)及其與δPKC、εPKC的關(guān)系研究較少涉及。

EP研究中，Carson等［23］對大鼠進(jìn)行一次20min、速度23m/min、坡度0的EP后，對αPKC的表達(dá)進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)αPKC蛋白表達(dá)迅速增加、mRNA水平降低，7天重復(fù)運(yùn)動(dòng)后αPKC蛋白及mRNA水平持續(xù)性降低，推測可能機(jī)制為：一次短暫劇烈運(yùn)動(dòng)通過增加αPKC表達(dá)，降低心肌收縮能耗，降低代謝產(chǎn)物堆積對細(xì)胞的損害；而7天重復(fù)運(yùn)動(dòng)使αPKC蛋白和mRNA水平降低，可防止細(xì)胞內(nèi)Ca2+長期超載，導(dǎo)致心肌病理性肥大及心衰。

而IP研究發(fā)現(xiàn)，αPKC可參與多種效應(yīng)物質(zhì)的調(diào)控。αPKC可能位于mitoKATP的下游，而εPKC位于mitoKATP的上游。缺血可增加εPKC磷酸化，促進(jìn)其向線粒體轉(zhuǎn)位，開啟mitoKATP，進(jìn)一步激活αPKC，通過p38MAPK通路增加效應(yīng)物質(zhì)表達(dá)［24］。 Kitakaze等［25］在對犬進(jìn)行反復(fù)4次5min/5min的I/R后發(fā)現(xiàn)，αPKC向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)位，可增加胚外5’核苷酸酶的表達(dá)，改善心肌在I/R損傷后的能量供應(yīng)。αPKC向細(xì)胞核周轉(zhuǎn)位，與Ca2+調(diào)控和應(yīng)激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)［26］。 此外，αPKC在心肌細(xì)胞閏盤的強(qiáng)表達(dá)提示，αPKC、εPKC和縫隙連接蛋白-43（C-43）可能以復(fù)合體的形式發(fā)揮心肌保護(hù)作用［27］。

Coaxum等［28］在幼鼠心肌研究中發(fā)現(xiàn)，αPKC過表達(dá)可增加HSP70表達(dá)，對心肌I/R損傷有保護(hù)作用。αPKC和HSP70之間存在一定的交互作用，并不依賴HSF-1的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。Bouwman等［29］發(fā)現(xiàn)七氟醚（Sevoflurane）誘導(dǎo)的心肌保護(hù)效應(yīng)依賴αPKC對ROS的激活，αPKC對I/R后心肌收縮力的改善，并不通過KATP通道的開放實(shí)現(xiàn)。還有研究發(fā)現(xiàn)，αPKC對心梗后心肌微血管的再生有一定的作用，白介素1-β通過αPKC/βIPKC與MAPK通路，增強(qiáng)心臟毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)中金屬蛋白酶-2（MMP-2）的活性表達(dá)，提高梗死后心肌組織的微血管密度［30］。在鼠類干細(xì)胞血管發(fā)生的研究中也發(fā)現(xiàn)，VEGF可誘導(dǎo)αPKC、βIIPKC和δPKC的磷酸化，明顯增加血管發(fā)生，而三型PKC的抑制劑可取消這一作用，提示鼠心血管發(fā)育需通過PI3K/PKC通路調(diào)控［31］。

在EP心肌保護(hù)效應(yīng)研究中，關(guān)于αPKC激活轉(zhuǎn)位對mitoKATP、5’ 核 苷 酸 酶 、C-43、HSP70、MMP-2 和VEGF表達(dá)影響的研究甚少，有待進(jìn)一步深入研究，這樣才能對EP中αPKC的作用做出更全面準(zhǔn)確的評價(jià)。

3.2 δPKC在EP保護(hù)效應(yīng)中的作用

δPKC是EP保護(hù)效應(yīng)的第二信使，少量表達(dá)δPKC是其他亞型PKC發(fā)揮心肌保護(hù)的前提，但過表達(dá)δPKC可致心肌壞死和凋亡。一次20min、速度23 m/min、坡度0的EP可增加δPKC磷酸化表達(dá)和膜轉(zhuǎn)位；7天重復(fù)運(yùn)動(dòng)后，δPKC的表達(dá)和膜轉(zhuǎn)位又恢復(fù)至正常。提示在一次短暫EP后，δPKC以少量表達(dá)的形式介導(dǎo)心肌保護(hù)。而7天重復(fù)運(yùn)動(dòng)后，δPKC磷酸化和膜轉(zhuǎn)位水平降低，可防止過表達(dá)δPKC引起的心肌損傷［23］。

δPKC主要通過影響線粒體的能量供應(yīng)，介導(dǎo)心肌I/R損傷。δPKC向線粒體轉(zhuǎn)位，可減弱ADP的呼吸作用，降低三羧酸循環(huán)活性和細(xì)胞pH值；抑制26S蛋白酶體活性，導(dǎo)致心肌缺血期ATP水平下降［32］。此外，δPKC可增加心肌細(xì)胞ROS產(chǎn)物，促進(jìn)細(xì)胞色素C釋放，誘發(fā)細(xì)胞凋亡［33］；通過改變Bad/Bcl-2比率，使二磷腺苷酸核糖多聚酶（PARP）分裂和DNA斷裂［34］；凋亡信號作用于δPKC的調(diào)節(jié)域，使其發(fā)生核轉(zhuǎn)位，并分裂為δCF（催化域片段）啟動(dòng)細(xì)胞凋亡［35］。

δPKC的激活被認(rèn)為是心肌保護(hù)效應(yīng)發(fā)揮的前提。 研究［36］發(fā)現(xiàn)δPKC的激活可調(diào)控mitoKATP的開放，促進(jìn)線粒體相關(guān)蛋白表達(dá)，減輕缺血后線粒體Ca2+超載，改善線粒體功能。但長期低氧環(huán)境下，對成年雄性Wistar大鼠進(jìn)行7000m/8h/d、5d/w的跑臺運(yùn)動(dòng)后，再進(jìn)行20min/3h的I/R，運(yùn)動(dòng)組梗死面積明顯縮小，δPKC的表達(dá)顯著增加，而εPKC表達(dá)無變化。提示在長期低氧誘導(dǎo)的心肌保護(hù)效應(yīng)中，δPKC發(fā)揮重要作用［37］。

以上關(guān)于δPKC的研究多集中于其他預(yù)適應(yīng)，δPKC在EP心肌保護(hù)效應(yīng)中的研究相對缺乏系統(tǒng)性。雖然δPKC在EP中的基礎(chǔ)作用已達(dá)成共識，但δPKC涉及的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及下游物質(zhì)仍不明確。

3.3 εPKC在EP保護(hù)效應(yīng)中的作用

εPKC作為EP主要的心肌保護(hù)亞型，可增強(qiáng)能量代謝激酶活性，改善細(xì)胞能量供應(yīng)；調(diào)控離子通道和縫隙連接蛋白，保持細(xì)胞離子平衡；增加終末效應(yīng)物質(zhì)的表達(dá)，保護(hù)細(xì)胞形態(tài)功能。

一次20min、速度23m/min、坡度0的EP可顯著提高εPKC表達(dá)水平；7天重復(fù)運(yùn)動(dòng)可增加εPKC蛋白及mRNA的表達(dá)。一次短暫EP和7天重復(fù)運(yùn)動(dòng)后，εPKC的表達(dá)部位集中在胞質(zhì)，胞膜表達(dá)減少，提示εPKC膜轉(zhuǎn)位減少可能與實(shí)驗(yàn)方法或EP晚期保護(hù)效應(yīng)機(jī)制有關(guān)［23］。 Chicco等［38］對成年SD大鼠連續(xù)進(jìn)行坡度10°， 速度15m/min、30m/min、15m/min的跑臺運(yùn)動(dòng)10min、40min、10min， 運(yùn)動(dòng)結(jié)束24h后進(jìn)行1 h/2h的I/R，結(jié)果雄鼠心梗面積縮小24%，雌鼠心梗面積縮小18%，認(rèn)為εPKC通過sarcoKATP改善細(xì)胞內(nèi)離子狀態(tài)，發(fā)揮心肌保護(hù)作用。

εPKC可通過NO相關(guān)通路保護(hù)心肌。在IP晚期保護(hù)效應(yīng)中，NO激活L型通道，抑制Ca2+的內(nèi)流，降低心肌細(xì)胞收縮，拮抗腎上腺素β受體，開啟KATP，增加抗氧化物的含量［39］。而在其他類型運(yùn)動(dòng)的心肌保護(hù)研究中發(fā)現(xiàn)，NO同樣發(fā)揮著一定作用。也有學(xué)者提出，εPKC的適度表達(dá)對鼠心臟有保護(hù)，但長時(shí)間過表達(dá)εPKC可使ERK1/2持續(xù)激活，促心臟肥大［40］。

εPKC可通過調(diào)控眾多下游效應(yīng)物質(zhì)，發(fā)揮心肌保護(hù)效應(yīng)。（1）εPKC可與新陳代謝蛋白、轉(zhuǎn)錄翻譯蛋白形成復(fù)合體，改變葡萄糖代謝相關(guān)激酶和線粒體酶的活性， 改善細(xì)胞能量供應(yīng)［41］；（2）εPKC可調(diào)控sarcoKATP和mitoKATP的表達(dá)，增加心肌組織中Kir6.2亞基向線粒體的轉(zhuǎn)位， 調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)離子平衡［42］；（3）εPKC在轉(zhuǎn)基因鼠心肌中過表達(dá)，可增加其向線粒體和閏盤的轉(zhuǎn)位，增加VDAC和糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）的表達(dá)，抑制MPTP在再灌注期間的開放，并增加C-43的磷酸化［43］；（4）εPKC可調(diào)節(jié)鈣離子受體（CaR）的磷酸化，進(jìn)而調(diào)節(jié)Ca2+從肌漿網(wǎng)向細(xì)胞內(nèi)的釋放，防止因Ca2+超載誘發(fā)的細(xì)胞損傷［44］。

關(guān)于εPKC在IP心肌保護(hù)效應(yīng)中作用的研究眾多，關(guān)于其蛋白和基因表達(dá)變化及其下游效應(yīng)物質(zhì)KATP、MPTP、C-43和CaR的研究較系統(tǒng)， 討論也較深入，并認(rèn)為εPKC可影響能量代謝相關(guān)酶活性、改善線粒體功能、維持細(xì)胞電生理平衡。而EP的相關(guān)研究雖然不少，但缺乏系統(tǒng)性，有待進(jìn)一步完善。

4 預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)效應(yīng)中PKC亞型間關(guān)系

預(yù)適應(yīng)心肌保護(hù)效應(yīng)中，關(guān)于PKC亞型間關(guān)系的研究較少，且多集中于IP、藥物預(yù)適應(yīng)和低氧預(yù)適應(yīng)等，EP中幾乎未涉及。而EP中關(guān)于多型PKC的研究，多為早晚保護(hù)效應(yīng)期PKC亞型蛋白和mRNA表達(dá)變化觀察，αPKC、δPKC、εPKC三者間是否存在交互作用及影響彼此磷酸化的可能機(jī)制，尚缺乏相關(guān)研究和討論。

4.1 αPKC與δPKC的關(guān)系

αPKC與δPKC關(guān)系的研究集中在調(diào)節(jié)心肌收縮力和心肌凋亡。研究結(jié)果顯示，二者間似乎存在某些潛在通路，在對心肌細(xì)胞收縮力的調(diào)控上，發(fā)揮著“相反的作用”，并左右心臟向心衰方向的發(fā)展。Simonis等［45］結(jié)扎成年Wistar大鼠冠狀動(dòng)脈造成其心肌梗死，觀察梗死后1周，1、2、3個(gè)月的心肌恢復(fù)情況及PKC亞型的活性。結(jié)果顯示，εPKC表達(dá)無明顯變化；αPKC在梗死后1個(gè)月表達(dá)顯著增加 （157%），之后恢復(fù)正常水平；δPKC出現(xiàn)了與αPKC表達(dá)相反的趨勢，在梗死后1周和1個(gè)月表達(dá)水平不變，而梗死后2、3個(gè)月表達(dá)顯著增加（187%）。這提示在心梗后的心肌重塑過程中，αPKC與δPKC的變化存在一定關(guān)系，并認(rèn)為αPKC表達(dá)增加是心衰發(fā)展的征兆，但持續(xù)表達(dá)δPKC可致心肌肥大及心力衰竭。

關(guān)于IP和Ca2+預(yù)適應(yīng)的研究發(fā)現(xiàn)，αPKC對δPKC的磷酸化作用有一定的影響。Miyawaki等［46］對成年雄性SD大鼠進(jìn)行5min/10min的IP和5min/10min的高濃度/低濃度Ca2+預(yù)適應(yīng)（HCPC）后，進(jìn)行一次30 min/40min的I/R。結(jié)果顯示，與對照組比較，IP組和HCPC組梗死面積均明顯縮小，組間無差異。免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，αPKC和δPKC均發(fā)生了明顯的膜轉(zhuǎn)位，且αPKC向細(xì)胞核轉(zhuǎn)位，可能與晚期保護(hù)效應(yīng)中基因的表達(dá)有關(guān)，而εPKC無明顯變化。因此，在Ca2+預(yù)適應(yīng)中，Ca2+可直接激活αPKC，并通過DAG間接激活δPKC，αPKC對δPKC磷酸化水平有一定的調(diào)控作用。

在心肌細(xì)胞凋亡研究中也發(fā)現(xiàn)，αPKC與δPKC發(fā)揮著“相反的作用”，δPKC促進(jìn)細(xì)胞凋亡，αPKC和βPKC抑制細(xì)胞凋亡。δPKC可調(diào)控RACK1和JNK，在促心肌細(xì)胞凋亡的同時(shí)，還上調(diào)αPKC和βPKC的表達(dá)?；蛞种痞腜KC表達(dá)后，可取消JNK參與的細(xì)胞凋亡；但完全阻斷δPKC后，αPKC和βPKC抑制凋亡作用也取消［47］。

通過以上研究不難看出，αPKC和δPKC在心肌細(xì)胞收縮力、心肌細(xì)胞凋亡的調(diào)控上，有著相互制約的關(guān)系，且彼此影響對方的磷酸化作用，這些作用對于綜合考慮EP心肌保護(hù)過程中心肌細(xì)胞收縮力和凋亡的調(diào)控機(jī)制有著重要意義，但目前EP相關(guān)研究尚未涉及。

4.2 αPKC與εPKC的關(guān)系

αPKC與εPKC的關(guān)系研究較少，且集中于共同調(diào)控心肌保護(hù)物質(zhì)的研究。Hassouna等［24］發(fā)現(xiàn)，εPKC位于mitoKATP的上游，而αPKC位于下游。εPKC和αPKC特異性抑制劑均可消除心肌保護(hù)效應(yīng)，但mitoKATP激活劑誘導(dǎo)的保護(hù)效應(yīng)只可被αPKC阻滯劑消除。其可能機(jī)制是：缺血應(yīng)激增加εPKC的線粒體轉(zhuǎn)位，開啟mitoKATP，進(jìn)一步激活αPKC，通過p38 MAPK增加效應(yīng)物質(zhì)表達(dá)。

而Bowling等［27］還提出εPKC與αPKC共同調(diào)控人心肌組織中C-43磷酸化的可能。在心衰患者左室組織中，αPKC過量表達(dá)并大量轉(zhuǎn)移至心肌閏盤。根據(jù)εPKC、αPKC與C-43的關(guān)系，認(rèn)為在人心肌組織中，三者可能以復(fù)合體的形式發(fā)揮心肌保護(hù)作用。εPKC直接磷酸化C-43，αPKC增加復(fù)合體的磷酸化程度。

在EP心肌保護(hù)效應(yīng)中，效應(yīng)物質(zhì)的重要性毋庸置疑，但關(guān)于αPKC與εPKC是否共同影響保護(hù)效應(yīng)物質(zhì)（如mitoKATP、C-43等）有待進(jìn)一步研究證實(shí)，且二者間是否可通過共同的信號通路影響彼此磷酸化水平，目前尚不清楚。

4.3 δPKC與εPKC的關(guān)系

隨著近年來預(yù)適應(yīng)研究的不斷深入，多篇IP和EP綜述中均涉及對δPKC和εPKC關(guān)系的討論。相關(guān)實(shí)驗(yàn)證明，二者之間確實(shí)發(fā)揮著近乎相反的作用。δPKC的線粒體轉(zhuǎn)位可致線粒體功能紊亂，加劇細(xì)胞損傷，但其激活仍是心肌保護(hù)的前提。δPKC的激活為εPKC的激活提供了時(shí)間，且ROS的表達(dá)增加可進(jìn)一步激活εPKC。

蛋白酶體（proteasome）的發(fā)現(xiàn)影響了對IP心肌保護(hù)機(jī)制的認(rèn)識。IP可通過影響蛋白酶體的活性，調(diào)控δPKC/εPKC的比例關(guān)系，降低δPKC的表達(dá)，增加εPKC的表達(dá)，可降低細(xì)胞損傷；反之亦然。且蛋白酶體在再灌注期能激活相關(guān)保護(hù)激酶，如Akt和ERK1/2等，抑制δPKC對細(xì)胞色素C的影響，發(fā)揮心肌保護(hù)作用［32］。但目前缺乏EP心肌保護(hù)效應(yīng)中蛋白酶體活性變化的相關(guān)研究。

Rybin等［48］對δPKC與εPKC在心肌中磷酸化的關(guān)系進(jìn)行了研究，通過腺病毒使εPKC過表達(dá)，可增加δPKC的磷酸化水平。與其他PKC亞型不同，δPKC的激活并不一定需要活化環(huán)（activation loop）即δPKCThr505的激活，而εPKC過表達(dá)可增加δPKC-Thr505的自磷酸化，影響δPKC-Tyr311/Tyr332磷酸化過程，調(diào)控δPKC磷酸化的表達(dá)。

Duquesnes等［49］對δPKC/εPKC的關(guān)系進(jìn)行過系統(tǒng)綜述。在心臟相關(guān)PKC亞型中，二者均涉及心臟肥大和預(yù)適應(yīng)保護(hù)效應(yīng)，εPKC主要促細(xì)胞生長、分化、增殖，是重要的癌基因。與之相反，δPKC是促凋亡和重要的抗癌基因。但在預(yù)適應(yīng)過程中，二者均發(fā)生明顯的線粒體轉(zhuǎn)位。δPKC可改變細(xì)胞內(nèi)Ca2+相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響細(xì)胞膜電位，導(dǎo)致細(xì)胞色素C釋放，激活caspase-3，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡；εPKC主要通過開啟KATP，抑制線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（MPTP）的開啟，發(fā)揮心肌保護(hù)作用。Chen等［50］運(yùn)用基因相關(guān)技術(shù)，在小鼠心臟中分別特異性激活和抑制δPKC和εPKC，證實(shí)εPKC主要介導(dǎo)心肌保護(hù)，δPKC主要介導(dǎo)心肌損傷。

5 小結(jié)與展望

目前，關(guān)于三型PKC的主要生物學(xué)作用已基本明確，在EP心肌保護(hù)效應(yīng)中，PKC蛋白和基因表達(dá)變化的研究也已開展，但研究相對缺乏系統(tǒng)性，仍需從以下幾方面深入研究：

1.定量研究：在前期研究基礎(chǔ)上，通過免疫沉淀、Western Blot和PCR等技術(shù)，對EP心肌保護(hù)效應(yīng)中PKC各亞型蛋白和mRNA表達(dá)量及其變化趨勢進(jìn)行研究。

2.定位研究：通過免疫組織化學(xué)法和原位雜交技術(shù)，觀察EP早晚期保護(hù)效應(yīng)中PKC各亞型蛋白和基因的表達(dá)位置，對PKC蛋白和基因表達(dá)進(jìn)行定位和位置變化研究。

3.PKC亞型間關(guān)系研究：通過基因技術(shù)或藥物，抑制或過表達(dá)一個(gè)或幾個(gè)特定PKC亞型，觀察對其他PKC亞型磷酸化及下游效應(yīng)物質(zhì)的影響，更好地模擬在體生理環(huán)境下PKC亞型間關(guān)系，驗(yàn)證PKC亞型間是否存在潛在通路，且EP對潛在通路是否產(chǎn)生影響，如何調(diào)控PKC亞型的比例關(guān)系。

4.運(yùn)動(dòng)方式研究：一次或反復(fù)多次短暫高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)，可誘導(dǎo)EP心肌保護(hù)效應(yīng)，這種運(yùn)動(dòng)方式被稱為“經(jīng)典EP”。需研究其他方式、強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)能否產(chǎn)生與“經(jīng)典EP”類似的心肌保護(hù)效應(yīng)，何種運(yùn)動(dòng)方式可更好誘導(dǎo)心肌保護(hù)，PKC亞型的表達(dá)有何不同。

5.應(yīng)用性研究：在前期EP相關(guān)研究基礎(chǔ)上，開展普通人群及特殊人群（如運(yùn)動(dòng)員、冠心病患者等）的心肌保護(hù)作用研究，觀察EP對運(yùn)動(dòng)員競技水平的提高、冠心病患者生活質(zhì)量的改善是否存在幫助，及PKC亞型的變化趨勢。

［1］ Minamino T.Cardioprotection fromischemia/reperfusion injury.Circ J，2012，76（5）：1074-1082.

［2］ 鐘旭，潘珊珊.運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)對大鼠急性心肌缺血損傷早期保護(hù)作用的研究.中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2009，28（3）：260-263.

［3］ Ferreira JC，Mochly-Rosen D，Boutjdir M.Regulation of cardiac excitability by protein kinase C isozymes.Front Biosci（Schol Ed），2012，4：532-546.

［4］ Shin HG，Barnett JV，Chang P，et al.Molecular heterogeneity of protein kinase C expression in human ventricle.Cardiovasc Res，2000，（48）：285-299.

［5］ Simkhovich BZ，Przyklenk K，Kloner RA.Role of protein kinase C as a cellular mediator of ischemic preconditioning.Cardiovasc Res，1998，（40）：9-22.

［6］ Takayama M，Ebihara Y，Tani M.Differences in the expression of protein kinase C isoforms and its translocation after stimulation with phorbol ester between young-adult and middle-aged ventricular cardiomyocytes isolated from Fischer 344 rats.Jpn Circ J，2001，65（12）：1071-1076.

［7］ Rybin VO，Steinberg SF.Protein kinase C isoform expression and regulation in the developing rat heart.Circ.Res，1994，74：299-309.

［8］ Michaelides AP，Andrikopoulos GK，Oikonomou EV，et al.Improved myocardial performance during repetitive exercise testing The role of extracellular.Am Heart J，2003，146：160-167.

［9］ 彭峰林，陳建文，任琦，等.間歇運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對心臟缺血再灌注損傷大鼠心肌抗氧化酶的影響.中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2008，27（1）：97-99.

［10］ Shen YJ，Pan SS，Zhuang T，et al.Exercise preconditioning initiates late cardioprotection against isoproterenolinduced myocardial injury in rats independent of protein kinase C.JPhysiol Sci，2011，61（1）：13-21.

［11］ Wu GF，Rana JS，Wykrzykowska J，et al.Exercise-induced expression of VEGF and salvation of myocardiumin the early stage of myocardial infarction.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2009，296：H389-H395.

［12］潘珊珊，孫曉娟.運(yùn)動(dòng)預(yù)適應(yīng)對大鼠背根神經(jīng)節(jié)降鈣素基因相關(guān)肽表達(dá)的影響.中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2010，29（1）：30-33

［13］ Hamilton KL，Quindry JC，F(xiàn)rench JP，et al.MnSOD antisense treatment and exercise-induced protection against arrhythmias.Free Radic Biol Med，2004，37：1360-1368.

［14］ Quindry JC，Schreiber L，Hosick P，et al.Mitochondrial KATP channel inhibition blunts arrhythmia protection in ischemic exercised hearts.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2010，299：H175-183.

［15］ Lennon SL，Quindry JC，Hamilton KL，et al.Loss of exercise-induced cardioprotection after cessation of exercise.J Appl Physiol，2004，96（4）：1299-1305.

［16］ Capecchi PL，Pasini FL，Cati G，et al.Experimentalmodel of short-time exercise-induced preconditioning in POAD patients.JVasc Dis，1997，48（6）：469-480.

［17］ Yamashita N，Hoshida S，Otsu K，et al.Exercise provides direct biphasic cardioprotection viamanganese superoxide dismutase activation.JExp Med，1999，189 （11）：1699-1706.

［18］ Demirel HA，Powers SK，Zergeroglu MA，et al.Short-term exercise improvesmyocardial tolerance to in vivo ischemia-eperfusion in the rat.J Appl Physiol，2001，91：2205-2212.

［19］ French JP，Hamilton KL，Quindry JC，et al.Exerciseinduced protection against myocardial apoptosis and necrosis：MnSOD，calcium-handling proteins，and calpain.The FASEB J，2008，22：2862-2871.

［20］ Parra VM，Macho P，Domenech RJ.Late cardiac preconditioning by exercise in dogs is mediated by mitochondrial potassium channels.J Cardiovasc Pharmacol，2010，56：268-274.

［21］ Braz JC，Gregory K，Pathak A，et al.PKC-alpha regulates cardiac contractility and propensity toward heart failure.NatMed，2004，10（3）：248-254.

［22］ Lu G，Ashraf M，Haider KH.Insulin-like growth factor-1 preconditioning accentuates intrinsic survival mechanismin stem cells to resist ischemic injury by orchestrating protein kinase Ca–Erk1/2 activation.Antioxid.Redox Signal，2012，16：217–228.

［23］ Carson LD，Korzick DH.Dose-dependent effects of acute exercise on PKC levels in rat heart：is PKC the heart’s prophylactic?Acta Physiol Scand，2003，178（2）：97-106.

［24］ Hassouna A，Matata BM，Galinanes M.PKC-epsilon is upstream and PKC-alpha is downstream of mitoKATP channels in the signal transduction pathway of ischemic preconditioning of human myocardium.Am JPhysiol Cell Physiol，2004，287（5）：C1418-C1425.

［25］ Kitakaze M，F(xiàn)unaya H，Minamino T，et al.Role of protein kinase C-alpha in activation of ecto-5’-nucleotidase in the preconditioned canine myocardium.Biochem Biophys Res Commun，1997，239（1）：171-175.

［26］ Guihard G，Proteau S，Rousseau E.Does the nuclear envelope contain two types of ligand-gated Ca2+release channels?FEBSLetters，1997，414：89-94.

［27］ Bowling N，Huang X，Sandusky GE，et al.Protein kinase C-alpha and-epsilon modulate connexin-43 phosphorylation in human heart.JMol Cell Cardiol，2001，33 （4）：789-798.

［28］ Coaxum SD，Griffin TM，Martin JL，et al.Influence of PKC-alpha overexpression on HSP70 and cardioprotection.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2007，292 （5）：H2220-H2226.

［29］ Bouwman RA，Musters RJ，van Beek-Harmsen BJ，et al.Sevoflurane-induced cardioprotection depends on PKC-alpha activation via production of reactive oxygen species.Br JAnaesth，2007，99（5）：639-645.

［30］ Mountain DJ，Singh M，Menon B，et al.Interleukin-1beta increases expression and activity of matrix metalloproteinase-2 in cardiac micro vascular endothelial cells：role of PKCalpha/beta1 and MAPKs.Am JPhysiol Cell Physiol，2007，292（2）：C867-C875.

［31］ Bekhite MM，F(xiàn)inkensieper A，Binas S，et al.VEGF-mediated PI3K class IA and PKC signaling in cardiomyogenesis and vasculogenesis ofmouse embryonic stem cells.JCell Sci，2011，124：1819-1830.

［32］ Churchill EN，Mochly-Rosen D.The roles of PKC delta and epsilon isoenzymes in the regulation of myocardial ischaemia/reperfusion injury.Biochem Soc Trans，2007，35（5）：1040-1042.

［33］ Zheng HS，Liu J，Liu C，et al.Calcium-sensing receptor activating phosphorylation of PKCd translocation on mitochondria to induce cardiomyocyte apoptosis during ischemia/reperfusion.Mol Cell Biochem，2011，358：335–343.

［34］ Murriel CL，Churchill E，Inagaki K，et al.Protein kinase C delta activation induces apoptosis in response to cardiac ischemia and reperfusion damage：a mechanisminvolving BAD and themitochondria.JBiol Chem，2004，279（46）：47985-47991.

［35］ Fu L，Lin YD，Elrod HA，et al.c-Jun NH2-terminal kinase -dependent upregulation of DR5 mediates cooperative induction of apoptosis by perifosine and TRAIL.Mol Cancer，2010，9：315.

［36］ Kowaltowski AJ，Seetharaman S，Paucek P，et al.Bioenergetic consequences of opening the ATP-sensitive K+channel of heartmitochondria.Am JPhysiol，2001，280：H649-H657.

［37］ Neckar J，Markova I，Novak F，et al.Increased expression and altered subcellular distribution of PKC-delta in chronically hypoxic rat myocardium：involvement in cardioprotection.Am JPhysiol Heart Circ Physiol，2005，288（4）：H1566-H1572.

［38］ Chicco AJ，Johnson MS，Armstrong CJ，et al.Sex-specific and exercise-acquired cardioprotection is abolished by sarcolemmal KATP channel blockade in the rat heart.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2007，292 （5）：H2432-H2437.

［39］ Hoffman A，Goldstein S，Samuni A，et al.Effect of nitric oxide and nitroxide SOD-mimic on the recovery of isolated rat heart following ischemia and reperfusion.Biochem Pharmacol，2003，66：1279-1286.

［40］ Takeishi Y，Ping P，Bolli R，et al.Transgenic overexpression of constitutively active protein kinase C epsilon causes concentric cardiac hypertrophy.Circ Res，2000，86：1218-1223.

［41］ Edmondson RD，Vondriska TM，Biederman KJ，et al.Protein kinase C epsilon signaling complexes include metabolism and transcription/translation-related proteins：complimentary separation techniqueswith LC/MS/MS.Mol Cell Proteomics，2002，1（6）：421-433.

［42］ Aziz Q，Thomas AM，Khambra T，et al.Regulation of the ATP-sensitive potassium channel subunit，Kir6.2，by a Ca2+-dependent protein kinase C.J Biol Chem，2012，287（9）：6196-207.

［43］ Doble BW，Ping P，Kardami E.The epsilon subtype of protein kinase C is required for cardiomyocyte connexin-43 phosphorylation.Circ Res，2000，86（3）：293-301.

［44］ Dong S，Teng Z，Lu FH，et al.Post-conditioning protects cardiomyocytes from apoptosis via PKC（epsilon）-interacting with calcium-sensing receptors to inhibit endo（sarco）plasmic reticulum-mitochondria crosstalk.Mol Cell Biochem，2010，341（1-2）：195-206.

［45］ Simonis G，Honold J，Schwarz K.Regulation of the isozymes of protein kinase C in the surviving rat myocardium after myocardial infarction：distinct modulation for PKC-alpha and for PKC-delta.Basic Res Cardiol，2002，97：223-231.

［46］ Miyawaki H，Ashraf M.Ca2+as a mediator of ischemic preconditioning.Circ Res，1997，80（6）：790-799.

［47］ Zhu T，Chen L，Du W，et al.Synthetic lethality induced by loss of PKC delta and mutated ras.Genes Cancer，2010，1（2）：142-151.

［48］ Rybin VO，Guo J，Gertsberg Z，et al.Protein kinase Cepsilon （PKC epsilon） and Src control PKC delta activation loop phosphorylation in cardiomyocytes.J Biol Chem，2007，282（32）：23631-23638.

［49］ Duquesnes N，Lezoualc’h F，Crozatier B.PKC-delta and PKC-epsilon：Foes of the same family or strangers?JMol Cell Cardiol，2011，51：665-673.

［50］ Chen L，Hahn H，Wu G，et al.Opposingcardioprotective actions and parallel hypertrophic effects of delta PKC and epsilon PKC.Proc Natl Acad Sci，2001，98：11114-11119.