王棟棟，熊健斌（廣西柳州市人民醫(yī)院骨科，廣西 柳州 545001）

骨性關(guān)節(jié)炎（OA）是一個(gè)多病因、發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的常見(jiàn)病，目前各種OA動(dòng)物模型制作方法周期長(zhǎng)、操作復(fù)雜、損傷大[1]。尋找一種理想的造模方法是研究膝OA的關(guān)鍵所在。本實(shí)驗(yàn)擬在Hulth模型的基礎(chǔ)上，克服其原來(lái)缺點(diǎn)，建立更符合臨床癥狀的兔關(guān)節(jié)炎模型為探討關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制及骨關(guān)節(jié)炎軟骨修復(fù)研究提供了科學(xué)的研究平臺(tái)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：新西蘭家兔，雌雄各半，體重1.8～2.2 kg，18只，普通級(jí)，由廣西醫(yī)科大學(xué)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品和試劑與儀器：HE染液，南京建成；甲醛，天津大茂；無(wú)水乙醇，天津大茂；硝酸，天津大茂，其他試劑均為分析純。倒置相差顯微鏡，德國(guó)Olympus公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法：①實(shí)驗(yàn)分組：家兔按體重性別隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)方法制備關(guān)節(jié)炎模型，而對(duì)照組家兔不做處理。模型制備：家兔麻醉后，使用剃須刀將關(guān)節(jié)處處理干凈后，消毒處理，取內(nèi)側(cè)髕旁入路，切斷內(nèi)側(cè)副韌帶，打開(kāi)關(guān)節(jié)腔，剪斷前后交叉韌帶，同時(shí)去除內(nèi)側(cè)半月板，手術(shù)結(jié)束后，止血并縫合傷口。家兔正常飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)家兔飼養(yǎng)籠中，不限制飲食，不固定患肢，可自由活動(dòng)[2]。②實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測(cè)定：造模10周后，處死家兔，觀察膝關(guān)節(jié)積液、滑囊腫脹及軟骨的改變。取造模部位股骨端，10%甲醛固定、10%硝酸脫鈣、石蠟包埋切片，進(jìn)行HE染色。

2 結(jié)果

對(duì)照組家兔滑膜、軟骨外觀基本正常，呈藍(lán)白色，色澤明亮，無(wú)裂紋及軟化，滑液量少透明。實(shí)驗(yàn)組家兔滑膜部分呈結(jié)節(jié)樣增生，滑液量少但混濁，軟骨缺損形成，深達(dá)骨質(zhì)，軟骨下骨暴露，骨贅形成。HE染色：對(duì)照組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，軟骨細(xì)胞排列整齊呈柱狀，細(xì)胞核清晰，染色均勻，潮線完整，軟骨基質(zhì)分布勻稱； 實(shí)驗(yàn)組兔膝關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞輕度增生，下層疏松纖維姐織增生，膠原化，可見(jiàn)少量散在淋巴漿細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域軟骨細(xì)胞核固縮、裂解、壞死，偏于一側(cè)，鈣化層軟骨細(xì)胞呈簇狀堆積，排列紊亂，潮線多不規(guī)整或完全消失，甚至軟骨下骨質(zhì)外露、軟骨下骨囊性變。

3 討論

幾十年來(lái)國(guó)內(nèi)外相繼報(bào)道了多個(gè)動(dòng)物模型對(duì)應(yīng)于臨床，OA有原發(fā)性和繼發(fā)性，故從制作方法上可將OA動(dòng)物模型分為兩大類，其一為誘發(fā)模型，即通過(guò)各種操作方法如制動(dòng)、手術(shù)、關(guān)節(jié)內(nèi)注藥、關(guān)節(jié)內(nèi)植入軟骨碎片或微粒等誘導(dǎo)OA產(chǎn)生；另一類為自發(fā)模型，即不用任何外界干預(yù)，動(dòng)物自發(fā)OA，如C57黑鼠等[3-5]。最經(jīng)典的是傳統(tǒng)Hulth造模法，但該方法仍具有其局限性，主要表現(xiàn)在切除了膝關(guān)節(jié)維持靜態(tài)穩(wěn)定的主要韌帶，造成關(guān)節(jié)極其不穩(wěn)，手術(shù)創(chuàng)傷大，不同術(shù)者造模效果差異較大等。

本研究中在經(jīng)典模型的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，切斷前交叉韌帶、切除內(nèi)側(cè)半月板，其優(yōu)點(diǎn)主要表現(xiàn)在，創(chuàng)傷不大，且方便取關(guān)節(jié)液，10周模型可見(jiàn)股骨內(nèi)骸和脛骨內(nèi)側(cè)平臺(tái)軟骨缺失骨質(zhì)暴露及周圍明顯增生的骨贅，關(guān)節(jié)的緩沖作用減少，脛股關(guān)節(jié)面應(yīng)力局部增大，分布不均；切斷前交叉韌帶造成膝關(guān)節(jié)失穩(wěn)，形成軟骨退變的起始環(huán)節(jié)，加之長(zhǎng)期被迫活動(dòng)進(jìn)一步加重了軟骨損傷而形成OA。10周內(nèi)可成功復(fù)制出膝不骨關(guān)節(jié)炎，其在外觀觀察和病理學(xué)均和臨床觀察一致，與病理進(jìn)展有一定相關(guān)性。本研究證實(shí)了此種改良方法的可行性，且為利用此動(dòng)物模型進(jìn)行骨關(guān)節(jié)炎的深入研究打下了基礎(chǔ)。

[1] 歐云生,安 洪.鼠骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型建立的現(xiàn)狀[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志,2004,14(1):41.

[2] 楊 峰,史宗道.用木瓜蛋白酶建立兔顳頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型的研究[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2002,20(5):330.

[3] 汪青春,沈培芝,王海彬.骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的建立及選擇[J].中醫(yī)正骨,1998,10(3):39.

[4] 劉伯齡,劉獻(xiàn)祥.骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的建立概況[J].福建中醫(yī)藥,2003,34(4):49.

[5] 聶 林,張學(xué)義,陳國(guó)瑞.骨關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,1990,20(1):97.