邢艷艷 （河南省湯陰縣畜牧獸醫(yī)總站 456150）

雞新城疫是我國(guó)家禽的頭號(hào)疫病。從80年代隨著生物學(xué)的興起，在傳統(tǒng)的滅活苗和弱毒苗的基礎(chǔ)上又研究開(kāi)發(fā)出各種各樣的基因工程疫苗，如亞單位疫苗、核酸疫苗、肽疫苗，這些疫苗在一定程度上克服了滅活疫苗免疫力弱和弱毒苗具有感染的危險(xiǎn)[1,2]。世界上有些國(guó)家和我國(guó)部分省市堅(jiān)持只用弱毒疫苗和油乳劑滅活苗，主要的理由是怕散毒，協(xié)同調(diào)節(jié)機(jī)體的先天性防御反應(yīng)與獲得性免疫反應(yīng)和其他一些特征[3]。

人們一直尋找適合應(yīng)用于畜禽的免疫增效劑，生物活性多糖是一種廣譜的免疫增強(qiáng)劑，具有抗感染、抗衰老及抗腫瘤等作用[4]。甲殼素又稱(chēng)甲殼質(zhì)，是自然界中產(chǎn)量?jī)H次于纖維素的天然多糖，與葡萄糖或纖維素相比，甲殼素的生物活性來(lái)得更高，因此其主體結(jié)構(gòu)與葡萄糖分子相近，其整體結(jié)構(gòu)又與植物纖維素相似，具有支持及保護(hù)有機(jī)生命體的作用，甲殼素還能提高巨噬細(xì)胞(Mφ)的吞噬能力，促進(jìn)抗體生成，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[5]。本項(xiàng)目試圖將甲殼素與氫氧化鋁膠和蜂膠對(duì)雞新城疫(ND)免疫應(yīng)答的影響進(jìn)行比較，從中篩選出適宜，有效的免疫增強(qiáng)劑，為應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑及儀器 甲殼素(山東奧康生物科技公司)；雞新城疫疫苗(吉林省生物制品廠(chǎng)2007 062208)；氫氧化鋁膠和蜂膠、雞新城疫甲殼素疫苗(甲殼素的含量為0.2%)、雞新城疫鋁膠疫苗(鋁膠含量為0.2%)、雞新城疫蜂膠疫苗(蜂膠含量0.2%)均自制；ND濃縮抗原、3.8% 枸櫞酸鈉溶液、V型微量血凝板、50μl定量移液管。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 未免疫的1日齡健康A(chǔ)A雛雞，共300只。

1.2 方法

1.2.1 雞接種前的準(zhǔn)備 將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的雛雞適應(yīng)環(huán)境后，分別對(duì)每只雞采血1.5ml；分離血清，冰箱冷凍備用。

1.2.2 1%雞紅細(xì)胞制備方法 先用滅菌注射器吸取3.8%枸櫞酸鈉溶液(其量為所需血量的1/5)，從雞翅靜脈抽血至需要血量，置滅菌離心管內(nèi)，加滅菌生理鹽水為抗凝血的2倍，以2500r/min離心10min，棄上清夜，再加生理鹽水懸浮血球，同上法離心沉淀，如此將紅細(xì)胞洗滌三次，最后用滅菌生理鹽水配成1%懸液。

1.2.3 雞的接種 采血后第2d對(duì)雞接種，分別肌肉注射各種佐劑疫苗；A組：接種雞新城疫甲殼素滅活苗每只4頭份；B組：接種雞新城疫蜂膠滅活苗每只4頭份；C組：接種雞新城疫鋁膠滅活苗4頭份;D組：空白對(duì)照組肌肉注射同等劑量的生理鹽水。

1.2.4 接種后雞的采血和制備血清 接種后第3、4、5、6、7、9、11、13、15、20、25 d,分別對(duì)雞采血1.5ml。每次采完血后，分別制備血清，置冰箱冷凍備用。

1.2.5 血球凝集試驗(yàn)(HA) 取V型微量血凝板，每空加入50μl生理鹽水，取50μl雞新城疫病毒加入第一孔，倍比稀釋至第11孔，第12孔作對(duì)照；然后每孔加入1%(體積分?jǐn)?shù))雞紅細(xì)胞50μl，振蕩混勻，37℃靜置15min后判定，以凝集50%紅細(xì)胞的最高稀釋倍數(shù)為病毒血凝價(jià)。

1.2.6 血凝抑制試驗(yàn)(HI) 取25μl待測(cè)血清于V型微量血凝板，倍比稀釋?zhuān)缓竺靠准尤?單位抗原(4U)25μl，37℃靜置15min后判定，以能抑制100%紅細(xì)胞凝集的最高稀釋倍數(shù)為血清凝集抑制價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 血凝抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果

血凝抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表1。

表1 各組血凝抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，在各組雞中反復(fù)隨機(jī)抽取10只雞，在3種佐劑中，甲殼素疫苗能增強(qiáng)特異的病毒血凝抑制抗體的效價(jià)，蜂膠疫苗在增強(qiáng)特異的病毒血凝抑制抗體的效價(jià)上低于甲殼素疫苗高于鋁膠疫苗，對(duì)照組在增強(qiáng)特異的病毒血凝抑制抗體方面最低。此結(jié)果表明，甲殼素疫苗對(duì)雞免疫雞新城疫滅活疫苗具有免疫增強(qiáng)作用。

2.2 接種前血清HI抗體檢測(cè)結(jié)果

對(duì)接種前采集的血清樣品進(jìn)行檢測(cè)。A、B、C和對(duì)照組雞血清的HI抗體效價(jià)均為4.67log2(表2)。

2.3 接種后血清HI抗體檢測(cè)結(jié)果

分別用雞新城疫甲殼素滅活苗、雞新城疫鋁膠滅活苗、雞新城疫蜂膠滅活苗，對(duì)3組雞進(jìn)行接種，接種后，A組HI抗體效價(jià)均值上升了5.33log2，B組HI抗體效價(jià)上升了4.66log2，C組HI抗體效價(jià)均值上升了2.33log2(表2)。

表2 不同佐劑疫苗免疫雞抗體(HI)效價(jià)均值 (log2)

3 討論

3.1 雞體的健康狀況

只有在雞群健康的情況下，機(jī)體的各項(xiàng)生理指標(biāo)均正常，機(jī)體對(duì)疫苗才能產(chǎn)生最有效的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生最佳的特異性抗體[6]，本次試驗(yàn)選用健康的AA雛雞。當(dāng)雞感染病毒性傳染病可使雞的免疫器官和功能受到損害，從而降低了雞群的抵抗力，降低雞群對(duì)雞新城疫疫苗免疫接種的應(yīng)答反應(yīng)，易造成雞新城疫免疫失敗，也容易引發(fā)混合感染或繼發(fā)感染。

3.2 母源抗體的水平及其干擾

不注意母源抗體水平也是促使免疫效果不良的因素。接種雞新城疫疫苗后，產(chǎn)生新城疫抗體，該抗體經(jīng)卵黃而傳遞給雛雞，雛雞獲得這種來(lái)源于母體的新城疫抗體稱(chēng)之為母源抗體[7]，正是因?yàn)橛心冈纯贵w的保護(hù)，才使得雛雞在出殼后一段時(shí)間內(nèi)能抵抗病毒的侵害。母源抗體在保護(hù)雞體免受新城疫病毒侵害的同時(shí)，也能抑制雛雞新城疫免疫反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致雛雞免疫失敗[8]。所以對(duì)雛雞接種3種佐劑苗前，先飼喂10d，依次來(lái)消除母源抗體的干擾，以保證試驗(yàn)的順利進(jìn)行。

4 小結(jié)

甲殼素、蜂膠和氫氧化鋁膠佐劑疫苗對(duì)雛雞免疫接種后，甲殼素佐劑苗可顯著提高雛雞的免疫力，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，但抗體水平下降的幅度比較快，蜂膠組居中，鋁膠組抗體上升較慢維持時(shí)間較長(zhǎng)。由此可見(jiàn)，甲殼素佐劑苗對(duì)雞新城疫疫苗免疫調(diào)節(jié)作用在3種佐劑苗中效果最佳。

[1]成大榮, 金山, 楊艷菊等. 不同新城疫弱毒苗對(duì)新城疫病毒的免疫保護(hù)試驗(yàn)[J]. 畜牧與獸醫(yī). 2004(8): 5-6.

[2]肖桂, 游凌. 雞新城疫滅火苗的應(yīng)用特點(diǎn)[J]. 當(dāng)代畜牧雜志, 1994(2): 21-22.

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