文│薛勇 姚學(xué)軍 呂艷秋 劉潔 李榮華 康曉杰（北京市昌平區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

雞球蟲(chóng)病嚴(yán)重危害養(yǎng)雞行業(yè)，一年四季均可暴發(fā)。少量感染僅引起不易察覺(jué)的損傷，而且可使雞產(chǎn)生保護(hù)性免疫，在臨床上稱為球蟲(chóng)感染。當(dāng)大量的球蟲(chóng)卵囊感染雞只時(shí)，可引起明顯的癥狀，稱為球蟲(chóng)病。所有日齡和品種的雞對(duì)球蟲(chóng)都易感，尤其21～45日齡的雛雞最易感，如果治療不及時(shí)，死亡率可高達(dá)80%。病愈的雛雞，生長(zhǎng)發(fā)育受阻，飼料報(bào)酬率下降，抵抗力降低，易患其他疾病。帶蟲(chóng)雞可通過(guò)糞便造成傳播。

昌平區(qū)位于北京市西北部，山區(qū)、半山區(qū)占全區(qū)總面積的2/3。近年來(lái)旅游業(yè)的興旺促進(jìn)了山區(qū)林地散養(yǎng)柴雞事業(yè)的發(fā)展。為了摸清昌平區(qū)山區(qū)散養(yǎng)的柴雞感染球蟲(chóng)病的情況，我們對(duì)散養(yǎng)柴雞較集中的山區(qū)鎮(zhèn)進(jìn)行了球蟲(chóng)抗體抽測(cè)，意義在于摸清球蟲(chóng)病在該區(qū)感染的范圍和程度，并制定有效防治對(duì)策。

一、材料

1.被檢樣品來(lái)源。隨機(jī)抽檢昌平轄區(qū)內(nèi)三個(gè)山區(qū)鎮(zhèn)的8個(gè)養(yǎng)殖戶的散養(yǎng)柴雞，日齡在120～300天，每戶抽樣10只左右，共計(jì)85份雞血樣品。

2.待檢血清的準(zhǔn)備。將采得的雞血，放于37℃恒溫箱4小時(shí)，待血清全部析出之后進(jìn)行分離、封存、待檢。

3.檢測(cè)試劑。雞球蟲(chóng)抗體酶聯(lián)免疫（ELISA）試劑盒，購(gòu)自北京中寰宇神生物科技有限公司。

二、檢測(cè)方法及判定

1.檢測(cè)方法。本ELISA檢測(cè)方法，應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞球蟲(chóng)抗體水平。

2.方法原理。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入球蟲(chóng)抗體（待檢血清），再與HRP（標(biāo)記的抗原）結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加TMB（底物）顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的球蟲(chóng)抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450納米波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞球蟲(chóng)抗體濃度。

3.檢測(cè)步驟。具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

4.結(jié)果判定。

（1）用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

（2）樣品濃度＞147納克/升為抗體陽(yáng)性；濃度＜147納克/升為抗體陰性；濃度＝147納克/升為可疑。

三、球蟲(chóng)抗體檢測(cè)結(jié)果

本次試驗(yàn)，雞群日齡在120～300天，共計(jì)抽檢8戶林地柴雞散養(yǎng)戶，檢測(cè)雞85只，檢測(cè)結(jié)果如下（見(jiàn)表1、表2）。

在表1中，5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品分別位于A1、B1、C1、D1、E1孔，并在A2、B2、C2、D2、E2孔做一組平行對(duì)照。取每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的雙孔結(jié)果平均值為該標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)濃度，從表1可以看出，檢測(cè)濃度與試劑盒提供的濃度符合率100%，試驗(yàn)結(jié)果成立。

樣品檢測(cè)按照說(shuō)明書(shū)要求采用單孔檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果濃度值均＜147納克/升，檢測(cè)結(jié)果全部為球蟲(chóng)抗體陰性。

由表2可見(jiàn)，抽檢的這8個(gè)柴雞散養(yǎng)戶的85份血樣，球蟲(chóng)抗體皆為陰性。

四、檢測(cè)結(jié)果分析

本次試驗(yàn)共檢測(cè)了85份樣品，分別來(lái)自三個(gè)山區(qū)鎮(zhèn)的8個(gè)柴雞散養(yǎng)戶，飼養(yǎng)方式為散養(yǎng)，雞群日齡分別在120～300天之間，本次抽取的樣品檢測(cè)雞球蟲(chóng)抗體結(jié)果全部為陰性，究其原因，筆者認(rèn)為有以下幾點(diǎn)：

1.雞雛優(yōu)質(zhì)。經(jīng)流行病學(xué)跟蹤調(diào)查，雞雛購(gòu)自未發(fā)生過(guò)球蟲(chóng)污染的種雞場(chǎng)，在種蛋、孵化、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)均經(jīng)嚴(yán)格管理、消毒。

2.飼養(yǎng)環(huán)節(jié)。林地面積較大，每畝放養(yǎng)100～150只，并設(shè)有圍欄，封閉管理，實(shí)行全進(jìn)全出制；在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)，尤其是21～45日齡，即球蟲(chóng)易感期，養(yǎng)殖戶在飼料中添加了抗球蟲(chóng)的預(yù)防藥物。

3.養(yǎng)殖環(huán)境優(yōu)越。本次抽檢的養(yǎng)殖戶分布在山區(qū)鎮(zhèn)，養(yǎng)雞場(chǎng)地全部在山上或樹(shù)林間，養(yǎng)雞年限較短（1～3年），球蟲(chóng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)地污染較少；另柴雞散養(yǎng)活動(dòng)區(qū)域較大，大約0.3公頃為一個(gè)牧區(qū)，飼養(yǎng)密度小，受日光紫外線、高溫、空氣流通等因素影響，寄生蟲(chóng)、病菌、病毒等病原微生物不易存活；外界環(huán)境相對(duì)于室內(nèi)環(huán)境更為優(yōu)越，雞與雞之間的疾病傳播大大降低。

表1 各散養(yǎng)戶的柴雞球蟲(chóng)抗體水平檢測(cè)結(jié)果列表 納克/升

表2 散養(yǎng)戶柴雞球蟲(chóng)抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

五、結(jié)論

此次對(duì)山區(qū)球蟲(chóng)抗體檢測(cè)試驗(yàn)得出，該區(qū)山區(qū)林地散養(yǎng)的雞群，雞雛購(gòu)自無(wú)球蟲(chóng)污染的種雞場(chǎng)，注意球蟲(chóng)易感期藥物預(yù)防，加強(qiáng)日常封閉管理，雞群球蟲(chóng)感染率為0%。