趙美麗

(江西省化學工業(yè)學校，江西 南昌 330012)

1.前言

眾所周知，化妝品具有美白、保濕、滋潤等功能，這些功能歸咎于各種各樣有效成份的作用結果，而這些有效成份本身多是油脂或者營養(yǎng)成份，極易受到微生物感染而發(fā)生變質腐敗，導致產品質量下降。防腐劑是指可以阻止產品內微生物的生長或阻止與產品反應的微生物生長的物質，在化妝品中，防腐劑的作用是保護產品，使之免受微生物污染，延長產品貨架壽命，確保產品的安全性，防止消費者因使用受微生物污染的產品而引起可能的感染。隨著化妝品行業(yè)的迅速發(fā)展以及人們對化妝品的功能要求日趨多樣，更多的活性成份用于化妝品中，選擇一個高效而安全的防腐體系是當前化妝品配方非常關注的問題［1］。

化妝品中常用的防腐劑有甲醛供體和醛類衍生物防腐劑、苯甲酸及其衍生物防腐劑、醇類防腐劑及其他有機化合物防腐劑。本文要測定的就是有機化合物防腐劑中的異噻唑啉酮類——甲基異噻唑啉酮及其氯代物，俗稱凱松［2］。甲基異噻唑啉酮及其氯代物類通常作為防腐殺菌劑，活性成分為5－氯－2－甲基－4－異噻唑啉－3－酮(甲基氯異噻唑啉酮)、2－甲基－4－異噻唑啉－3－酮(甲基異噻唑啉酮)，廣泛用于化妝品、個人護理品、涂料、等行業(yè)防腐殺菌。

甲基異噻唑啉酮和甲基氯異噻唑啉酮為化妝品中常用的廣譜殺菌防腐劑，但人體皮膚接觸高濃度的甲基異噻唑啉酮、甲基氯異噻唑啉酮可引起過敏性皮炎。因此有必要對化妝品中甲基異噻唑啉酮、甲基氯異噻唑啉酮的濃度進行嚴格控制。目前我國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)規(guī)定甲基異噻唑啉酮、甲基氯異噻唑啉酮為限用物質［4］。

我國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》對化妝品中防腐劑的使用濃度和范圍做了相關的規(guī)定。由目前資料得知，甲基異噻唑啉酮及其氯代物的測定方法主要有高效液相色譜法［5］、氣相色譜法［6］等。

2.實驗部分

2.1 儀器與試劑

2.1.1 儀器:

Agilent 1200高效液相色譜儀;KQ5200DB型數控超聲波清洗儀;湘儀離心機 (H－2050R);電子天平(A8304 －S/FACT);濾膜(0.45μm 有機)。

2.1.2 試劑:

甲醇:色譜純試劑(美國Tedia公司);甲級異噻唑啉酮及其氯代物的對照品(供含量測定用)，購于中國藥品生物制品檢定所;樣品，由實驗室提供。

2.2 色譜條件

色譜柱:Agilent TC －C18(250mm ×4.6mm，5μm);

流動相:甲－醇水(25:75，體積比);

波長:276nm;

流速:1.0mL/min;

柱溫:室溫;

進樣量:10μL。

在上述色譜條件下，甲基異噻唑啉酮及其氯代物與樣品中其他成分得到良好的分離，樣品、空白溶劑、甲基異噻唑啉酮及其氯代物對照品色譜圖如下(2.1)。

圖2.1 樣品色譜圖

圖2.2 空白溶劑圖

圖2.3 甲基異噻唑啉酮及其氯代物對照品圖

2.3 溶液的配制

2.3.1 對照品溶液的制備

甲基異噻唑啉酮及其氯代物標準混合儲備溶液:分別準確稱取甲基異噻唑啉酮0.05160g、甲基氯異噻唑啉酮0.1118g，精確到0.0001g于 50ml燒杯中，加適量甲醇溶解，溶液定量移入100ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻。此溶液中甲基異噻唑啉酮的濃度為516mg/mL、甲基氯異噻唑啉酮濃度為1118mg/mL，儲備液放入冰箱冷藏保存。

2.3.2 供試品溶液的制備

稱量化妝品試樣0.6000g，置于50ml具塞錐形瓶中，加入15mL甲醇，超聲提取20min，將提取液移入25mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻。取約10m L于離心管中，在6000r/min下離心20min，離心后的上清液經0.45μm濾膜過濾，所得濾液供液相色譜測定。

3.方法與結果

3.1 方法

3.1.1 標準工作曲線的制備

甲基異噻唑啉酮及其氯代物標準工作液:移取混合儲備液(2.3.1)，分別配制成甲基異噻唑啉酮濃度為0.516、2.58、5.16、25.80、51.60μg/mL 的標準工作溶液，甲基氯異噻唑啉酮濃度為 1.118、5.59、11.18、55.90、111.80μg/mL 的標準工作液。

分別準確吸取甲基異噻唑啉酮及其氯代物標準工作溶液按濃度由稀到濃順序注入液相色譜儀，按色譜條件(2.2)進行測定，記錄色譜峰的保留時間和峰面積，以色譜峰的峰面積為縱坐標，與其對應的濃度為橫坐標作圖，繪制標準曲線，由此可得出甲基異噻唑啉酮及其氯代物的線性方程為:

甲基異噻唑啉酮:Y=34.98 X+20.65，R=0.99790

甲基氯異噻唑啉酮:Y=22.77 X －10.97，R=0.99994

測定結果見表3.1及圖3.1－圖3.2。

表3.1 線性關系曲線表

圖3.1 甲基異噻唑啉酮標準曲線

圖3.2 甲基氯異噻唑啉酮標準曲線

3.1.2 精密度試驗

精密吸取供試品溶液(2.3.2)10μL，重復進樣 6次，測得樣品中甲基異噻唑啉酮及其氯代物的峰面積的結果見表3.2。

表3.2 精密度試驗表(n=6)

2115.53 147.853117.02 150.054117.45 147.995116.77 149.116116.15 149.04 RSD% 0.59 0.56

3.1.3 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液(2.3.2)，分別于0小時，2小時，4小時，6小時及8小時進樣10μL，測得樣品中甲基異噻唑啉酮及其氯代物的峰面積，結果見表3.3。

表3.3 溶液穩(wěn)定性試驗(n=5)

3.1.4 重現(xiàn)性試驗

按擬定的含量測定方法，對同一批樣品分別制備樣品供試液(2.3.2)，測得峰面積并計算含量，RSD%〈2%，結果見表3.4。

表3.4 重現(xiàn)性試驗(n=6)

3.1.5 回收率試驗

取經過測定的供試品溶液(2.3.2)中不含甲基異噻唑啉酮和甲基氯異噻唑啉酮的化妝品，各0.5g，分別加入甲基異噻唑啉酮及其氯代物標準儲備混合溶液(2.3.1)為 50μL、100μL、200μL、400μL、800μL 按前處理方法處理過后，用液相色譜測定，結果見表3.5。

表3.5 加標回收率試驗(n=5)

3.1.6 樣品測定

儀器自動進樣器吸取10μL供試品溶液(2.3.2)注入液相色譜儀，按色譜條件進行測定，記錄色譜峰的保留時間和峰面積。由色譜峰的峰面積可從標準曲線上求出相應的被測物濃度。供試品溶液中，甲基異噻唑啉酮和甲基氯異噻唑啉酮的相應值均應在儀器測定的線性范圍內。被測物含量高的試樣可取適量供試品溶液用甲醇稀釋后進行測定。如表3.6以及圖3.3－圖3.7。

表3.6 不同供試品的測定結果

圖3.3 保濕面膜

圖3.4 沐浴露

圖3.5 精華露

圖3.6 潤膚露

圖3.7 面霜

3.2 結果的討論

3.2.1 供試品前處理

由于凱松化學性質比較穩(wěn)定，萃取溶劑(甲醇)的用量，超聲波提取時的溫度及時間對測定影響不大，對于膏體樣品，可用玻璃棒將其均勻涂布于試管壁上再稱量，這樣有利于膏體中被測組分的超聲提取。

3.2.2 流動相的選擇

當甲醇－水的體積比為50∶50時，甲基異噻唑啉酮的保留時間為4.563 min，供試品溶液在該保留時間附近有較多的色譜峰，易產生干擾。降低甲醇－水的體積比有利于被測物與雜質的分離，當其體積比為25∶75時，甲基異噻唑啉酮的保留時間為4.515 min，甲基氯異噻唑啉酮的保留時間約為10.850min，二者均能與雜峰分開，峰形良好。當甲醇－水的體積比為20∶80時，被測物峰形欠佳，且出峰時間較長。最終確定流動相甲醇－水的體積比為25∶75。

3.2.3 色譜峰的確認

在處理甲基異噻唑啉酮及其氯代物的數據時，需要分辨所出峰是否是為我們所要的色譜峰，一要看時間，一般甲基異噻唑啉酮的保留時間為4.515 min，甲基氯異噻唑啉酮的保留時間約為10.850min，但這并不是絕對的，有時色譜峰會發(fā)生漂移，我們就需要靠光譜圖來確定是否是凱松的色譜峰，甲基異噻唑啉酮和甲基氯異噻唑啉酮光譜圖如圖3.8－圖3.9。

圖3.8 甲基異噻唑啉酮光譜圖

圖3.9 甲基氯異噻唑啉酮光譜圖

3.2.4 方法檢出限

在本方法中，甲基異噻唑啉酮檢出限2mg/kg甲基氯異噻唑啉酮檢出限10mg/kg?！痘瘖y品衛(wèi)生規(guī)范》中液相色譜法測定防腐劑中甲基異噻唑啉酮的檢出限0.00005%，甲基氯異噻唑啉酮檢出限0.0002%，本方法檢出限比《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》低，且方法簡單快速。

［1］袁仕楊，葉志.化妝品用防腐劑淺談［J］.化工與材料，2009，130(9):29 －30.

［2］王萍，柳玉紅.我國化妝品用防腐劑及分析方法的研究進展［J］.環(huán)境與健康雜志，2007，24(7):557 －559.

［3］簡龍海，聞宏亮，孫健，等.液相色譜－串聯(lián)質譜法同時測定化妝品中的甲基異噻唑啉酮和甲基氯異噻唑啉酮［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2011，21(11):2652－2653.

［4］王超，王星，馬強，等.反相高效液相色譜法測定化妝品中的24種防腐劑［J］.分析化學研究報告，2007，35(10):1439 －1443.

［5］劉奮，戴京晶，梁偉，等.氣相色譜法測定化妝品防腐劑凱松［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2004，31(6):872－873.