史彥 楊健 陳浩

[摘要] 目的 評價純中藥制劑復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液對4種牙髓病原菌的體外抗菌活性。方法 采用瓊脂稀釋法，測定復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液對4種厭氧病原菌牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌和糞腸球菌的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。結果 2種沖洗液對4種厭氧病原菌均有抗菌作用，復方冰硼沖洗液的抗菌性優(yōu)于冰硼沖洗液。糞腸球菌的抗藥能力明顯強于其余3種菌株。結論 純中藥制劑復方冰硼沖洗液具有良好的抗菌性，作為根管沖洗液可能是有優(yōu)勢的。

[關鍵詞] 復方冰硼沖洗液； 根管沖洗； 抗菌性

[中圖分類號] R 739.86 [文獻標志碼] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.04.006

根管內的細菌在牙髓和根尖周病中扮演重要的角色。根管治療的成功取決于根管內感染的有效控制。根管沖洗是根管治療的重要步驟，能有效去除根管內病原菌、殘髓和牙本質碎屑，維持根管的清潔和非感染狀態(tài)。根管沖洗液的種類很多，但都存在一定缺陷。中藥具有獨特的清熱解毒、消腫止痛作用，且毒副作用小，作為根管沖洗液有其優(yōu)勢；但目前多數(shù)研究[1-2]尚停留在成品中藥制劑上，其制劑的水溶液呈黃色，會對白色的牙體組織產生一定的染色作用，影響美觀。本研究將白色中藥——復方冰硼和冰硼按中醫(yī)組方的原則進行配制，制成根管沖洗液，探索用于感染根管沖洗消毒的可行性。

1 材料和方法

1.1 實驗藥物的配制和分組

Ⅰ組：復方冰硼沖洗液，由冰片、硼砂、玄明粉、白芷、細辛共5味中藥配制而成；Ⅱ組：冰硼沖洗液，由冰片、硼砂、玄明粉與蒸餾水稀釋而成。2種沖洗液均由江西省中醫(yī)學院附屬醫(yī)院配制。

1.2 實驗菌株

實驗菌株由口腔疾病研究國家重點實驗室（四川

大學）提供，共4種：牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277，中間普氏菌ATCC 25611，具核梭桿菌ATCC 25286，糞腸球菌ATCC 19433。質控菌株為脆弱擬桿菌ATCC 25285。

1.3 儀器設備

DY-2型厭氧培養(yǎng)箱（浙江義烏冷凍機總廠），細菌多點接種儀（SAKUMA公司，日本），PB-10系列

pH計（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.4 含藥瓊脂平皿的配制和藥物實驗液的配制

選用牛心腦浸液-輔助瓊脂（beef heart infusion-

supplemented broth，BHI-S）（OXID公司，英國）培養(yǎng)

基作為實驗培養(yǎng)基。分別取復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液，按照不同的體積比與溫度為45～55 ℃的BHI-S瓊脂混勻后傾注于無菌平皿中，配制成對倍遞減的系列實驗藥物平板，冷卻凝固后使用。將復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液的原液定為1（100%），藥物

平板的稀釋倍數(shù)及相應的稀釋后體積分數(shù)分別為：2（50%）、4（25%）、8（12.5%）、16（6.25%）、32（3.1%）、

64（1.6%）、128（0.8%）、256（0.4%）、512（0.2%）、

1 024（0.1%）。

1.5 實驗菌液的準備

在BHI-S瓊脂表面復蘇并純化4種實驗菌株，置于80%N2、10%CO2、10%H2條件下37 ℃培養(yǎng)48 h，取純培養(yǎng)物接種于BHI肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件同前，校正菌液密度為每毫升1.5×108個細胞，備用。

1.6 藥物抑菌效果的評估指標和測定方法

最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）：肉眼觀察無細菌生長，即振搖后實驗管內液體清亮無渾濁或無沉淀生長，且涂片檢查無細菌存在，血平板培養(yǎng)小于7個菌落形成的最低藥物稀釋體積分數(shù)為該藥的MIC。最小殺菌濃度（minimum bac-tericidal concentration，MBC）：肉眼觀察無細菌生長的試管培養(yǎng)物，涂片檢查無細菌存在，血平板培養(yǎng)無菌落形成的最低藥物稀釋體積分數(shù)為該藥的MBC。

用細菌多點接種儀分別取實驗菌液（細菌密度為每毫升1.5×108個細胞）點種于不同稀釋體積分數(shù)的系

列含藥瓊脂平皿表面，然后放置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)后（培養(yǎng)條件同前）讀取MIC和MBC結果。

1.7 溶液的pH值

用蒸餾水沖洗pH計電極，擦干，將電極置于2種藥物的原液溶液中測其pH值。

2 結果

復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液原液的pH值分別為9.44和9.12；對4種厭氧菌株的MIC和MBC測定結果見表1和圖1：2種沖洗液對4種厭氧菌均有抗菌作用，復方冰硼沖洗液的抗菌效果更好。

3 討論

感染根管中是以厭氧菌為主的混合感染。劉長虹等[1]從臨床感染根管的樣本中檢出的優(yōu)勢菌有牙

齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌、韋榮菌、消化鏈球菌、口腔擬桿菌、放線菌、乳桿菌等。糞腸球菌有致病潛力，對牙髓治療抵抗性強，經(jīng)常出現(xiàn)在根管治療失敗和持續(xù)性根尖周炎病例中[3]。據(jù)

此，本實驗選擇了感染根管的3種優(yōu)勢菌（牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌）和1種頑固菌（糞

腸球菌），來評價沖洗液的消毒效果。

目前最常用的根管沖洗液是次氯酸鈉（NaClO）溶液和乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）溶液，另外還有過氧化氫、氯己定、MTAD、氯亞明、抗生素、碘伏、生理鹽水等。NaClO具有良好的抗菌性和組織溶解性，價格便宜，使用期限長，缺點是毒性大，氣味難聞，能漂白衣服，有潛在腐蝕性，有過敏現(xiàn)象。EDTA能去除根管壁玷污層，具有良好的清潔性，還能抗真菌和糞腸球菌，但使用過多會降低牙本質硬度。過氧化氫能有效殺滅厭氧菌，同時有發(fā)泡作用，利于根管內碎屑的排出，但對牙髓組織無溶解性，沖出根尖孔能引起氣腫。氯己定具有廣譜抗菌性，毒性低且無耐藥性，但不具有組織溶解能力。MTAD是由四環(huán)素同分異構體、乙酸和Tween80去污劑組成的混合液，具有抗糞腸球菌能力，細胞毒性低，能有效去除玷污層，但不能有效殺滅真菌。氯亞明具有抑菌殺菌性能，但對組織的刺激和毒性大?？股鼐哂袧撛谶^敏性和細菌耐藥性，不推薦在根管治療中常規(guī)使用。碘伏具有廣譜殺菌作用，其性質穩(wěn)定、刺激性小、毒性小、無抗原性，但其原液呈黃色，易使牙體組織染色，也有可能過敏。各種沖洗液存在一定的優(yōu)缺點，目前尚無一種非常理想的沖洗液。

本研究將成熟的中藥——冰硼散（剔除朱砂成

分）引入口腔醫(yī)學領域，并根據(jù)中藥的藥性特點，加入白芷和細辛，按照中醫(yī)組方的原則配制出白色的復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液。冰硼散是用冰片配伍硼砂、朱砂、玄明粉研磨而成，具有良好的解毒、消腫、止痛作用。質量分數(shù)0.5%的冰片對葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌及部分致病性皮膚真菌等有抑制作用。硼砂主要含四硼酸鈉，能清熱解毒、消腫防腐。玄明粉主要含無水硫酸鈉，具有消腫散結等功效。白芷主要含揮發(fā)油，能解表散寒、消腫排膿。細辛含揮發(fā)油，其主要成分為甲基丁香油酚，具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)靜、抗驚厥及局部麻醉作用[4]。5味天然中草藥物合成的復方制劑，具有清熱、解毒、消腫止痛等功能，其消毒、殺菌作用強，毒副作用小。

本實驗中，復方冰硼沖洗液和冰硼沖洗液對牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌和糞腸球菌均有抗菌作用，而復方冰硼沖洗液較冰硼沖洗液的抗菌效果更明顯。筆者分析，這是由于白芷和細辛的加入增加了復合制劑的藥效之故。此外，本實驗結果可以看出，糞腸球菌的耐藥性強于其余3種菌株，這是因為糞腸球菌擁有一些毒力因子，如溶解酶、胞嘧啶、凝聚物、外激素等[5]，能抵抗氫氧

化鈣的高pH值和其他根管內藥物，并能在少量營養(yǎng)物的環(huán)境中存活，具有忍受長期饑餓的能力[6]。

根管沖洗液的抗菌作用與其濃度、pH值、溫度等有關，藥物濃度、pH值、溫度越高，殺菌效果越明顯[7]。根管沖洗液在根管內可提高局部pH值，使

主根管和側支根管牙本質小管內的細菌在堿性環(huán)境中失去活力。復方冰硼沖洗液的pH值為9.44，冰硼沖洗液為9.12，均具有強堿性，殺菌效果明顯。

筆者[8]在前期研究中探討了復方冰硼沖洗液的清潔性能，本實驗進一步證實了其抗菌性。中藥來源廣泛，性質溫和，具有獨特的清熱消毒止痛作用，費用低，有效期長，且毒副作用小，無細菌耐藥性[9]。復方冰硼沖洗液作為根管沖洗液有積極的應用前景。

[參考文獻]

[1] 劉長虹， 尹仕海， 陳蕾. 金梔含漱液用于感染根管沖洗消毒的

細菌學觀察[J]. 上?？谇会t(yī)學， 2006， 15（1）：15-18.

Liu Changhong， Yin Shihai， Chen Lei. Antibacterial effect of Jinzhi

Hanshuye on infected root canals[J]. Shanghai J Stomatol， 2006， 15

（1）：15-18.

[2] 王青， 熊世江， 林秀娟， 等. 中藥潔爾陰沖洗劑用于超聲波根管

清理的掃描電鏡觀察[J]. 上?？谇会t(yī)學， 2006， 15（1）：77-80.

Wang Qing， Xiong Shijiang， Lin Xiujuan， et al. Scanning electron

microscopic study on the use of traditional Chinese medical irri-

gant in ultrasonic root canal instrumentation[J]. Shanghai J Stoma-

tol， 2006， 15（1）：77-80.

[3] Camps J， Pommel L， Aubut V， et al. Shelf life， dissolving action，

and antibacterial activity of a neutralized 2.5% sodium hypochlo-

rite solution[J]. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol En-

dod， 2009， 108（2）：e66-e73.

[4] 高學敏. 中藥學[M]. 2版. 北京： 中國中醫(yī)藥出版社， 2007：60-

63， 418-419， 523-524.

Gao Xuemin. Traditional Chinese pharmacology[M]. 2nd ed. Beijing：

China Press of Traditional Chinese Medicine， 2007：60-63， 418-

419， 523-524.

[5] Stuart CH， Schwartz SA， Beeson TJ， et al. Enterococcus faecalis：

Its role in root canal treatment failure and current concepts in re-

treatment[J]. J Endod， 2006， 32（2）：93-98.

[6] Figdor D， Davies JK， Sundqvist G. Starvation survival， growth and

recovery of Enterococcus faecalis in human serum[J]. Oral Micro-

biol Immunol， 2003， 18（4）：234-239.

[7] 史彥， 楊健. 次氯酸鈉作為根管沖洗液的研究進展[J]. 國際口

腔醫(yī)學雜志， 2008， 35（4）：375-378， 392.

Shi Yan， Yang Jian. Advances on sodium hypochlorite solution used

as root canal irrigation[J]. Int J Stomatol， 2008， 35（4）：375-378，

392.

[8] 史彥， 楊健， 陳浩. 復方冰硼沖洗液用于根管沖洗的清潔性實

驗研究[J]. 口腔醫(yī)學研究， 2011， 27（12）：1062-1065.

Shi Yan， Yang Jian， Chen Hao. Cleaning efficacy of Fufang Bing-

peng irrigant on root canals[J]. J Oral Sci Res， 2011， 27（12）：1062-

1065.

[9] Prabhakar J， Senthilkumar M， Priya MS， et al. Evaluation of anti-

microbial efficacy of herbal alternatives（Triphala and green tea

polyphenols）， MTAD， and 5% sodium hypochlorite against Entero-

coccus faecalis biofilm formed on tooth substrate： An in vitro stu-

dy[J]. J Endod， 2010， 36（1）：83-86.

（本文編輯 吳愛華）