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白木香葉代泡茶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

2013-09-13 12:19:46林煥澤吳秀榮陳建華梅全喜梁林源楊麗華洪建云陳金明
中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2013年29期
關(guān)鍵詞:香葉木香泡茶

林煥澤 吳秀榮 陳建華 梅全喜 梁林源 楊麗華 洪建云 陳金明

1.廣東省茂名市人民醫(yī)院,廣東茂名 525000;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院,廣東中山 528401;3.廣東省茂名市藥品檢驗(yàn)所,廣東茂名 525000;4.廣東省電白縣南藥藥業(yè)有限公司,廣東電白 525000

沉香為瑞香科植物白木香Aquilafia sinensis,(Lour.)Gilg含有樹脂的木材,為廣東著名的地產(chǎn)藥材。沉香具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘等功效,用于胸腹脹悶疼痛、胃寒嘔吐呃逆、腎虛氣逆喘急[1]。白木香葉為白木香的非藥用部位,吳秀榮等[2]、李紅念等[3]、林煥澤等[4]、Minhua 等[5]、林芳 花等[6]采用白 木 香葉提取物和沉香藥材做了一系列的對比試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)白木香葉提取物具有沉香功效的一些相同的特點(diǎn),如抗炎、鎮(zhèn)痛、降糖、平喘、抗氧化、延緩衰老作用等功效,而且效果顯著。而白木香葉代泡茶是由白木香葉粉碎成粗粒,配以甘草等藥材,研制成的飲用茶,其具有降氣溫中、暖腎納氣、治肝郁、降肝氣、和脾胃、消濕氣、利水開竅等功效,而且降糖、降脂、益氣益精、助睡眠、飲用方便,效果顯著。白木香葉代泡茶的保健效果已有相關(guān)研究[7],而關(guān)于白木香葉代泡茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方面的研究,國內(nèi)外均無報(bào)道,為此,筆者根據(jù)其功效對其中可能含有的主要成分設(shè)計(jì)了定性鑒別,并對其中所含的黃酮含量進(jìn)行了測定,以期為白木香葉代泡茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器

島津LC-20A高效液相色譜儀,LC-20AT高壓泵,SPD-M20A檢測器,CBM-20A系統(tǒng)控制器,SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器,TU-1901型紫外可見分光光度計(jì),KQ-500型超聲波清洗器。

1.2 主要試藥

槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):100081-200406),白木香葉代泡茶(茂名市君元沉香種植發(fā)展有限公司提供,批號(hào):20120901、20120902、20120903、20120904、20120905), 甲醇及乙醇均為色譜純,水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 理化鑒別

2.1.1 乙醇提取液的制備

稱取代泡茶粗粉10 g,加入100 mL 95%乙醇,加熱回流1 h,過濾,加水稀釋至含醇70%的醇液,轉(zhuǎn)入分液漏斗,加入等量石油醚萃取,除去葉綠素后,得乙醇提取液。

2.1.2 濾紙層析預(yù)試法

白木香葉乙醇提取液展開劑:95%乙醇顯色劑,10%磷鉬酸乙醇液。

混合指示劑:5 mL 0.1%甲基紅乙醇溶液、15 mL 0.1%甲基橙水溶液、20 mL 0.1%石蕊水溶液,混合均勻;氨氣;0.5%醋酸鎂甲醇液。

點(diǎn)樣量:0.1 mL。

顯色方法:取直徑12 cm的普通圓型濾紙一張,將濾紙折劃分為4份,濾紙中心打一小孔,備插入濾紙芯之用,用毛細(xì)管將樣品乙醇提取液點(diǎn)在距紙中心約l cm處,點(diǎn)樣后,將一小條濾紙芯插入濾紙的中心小孔,移至盛有展開劑的直徑為14 cm的培養(yǎng)皿中,進(jìn)行層析。待溶劑的前沿達(dá)到濾紙近邊緣后,取出濾紙,待溶劑揮發(fā)后,將濾紙剪為4份,分別噴以不同顯色劑。從濾紙上出現(xiàn)的顏色斑點(diǎn),初步確定樣品的成分。

結(jié)果如下:鹽酸-鎂粉反應(yīng),紅色;堿性酒石酸試驗(yàn),棕紅色沉淀;a-萘酚試驗(yàn),界面出現(xiàn)紫紅色環(huán);茚三酮反應(yīng),深紫色。

2.2 薄層色譜法(TLC)

取本品粉末4 g,加水30 mL乙醇回流l h,趁熱過濾,濾液濃縮至干,殘?jiān)蛹状?0 mL使溶解,作為供試品溶液。另取白木香葉代泡茶對照品,白木香葉子粉末4 g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn),吸取上述溶液各4 μL分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄層板上,以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸(5∶5∶0.5)為展開劑,飽和 30 min展開,取出,晾干。置紫外燈光(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.3 高效液相色譜法(HPLC)測定白木香葉代泡茶中的總黃酮含量

2.3.1 樣品溶液的制備

2.3.1.1 對照溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品10.01 mg,加70%乙醇溶解并稀釋至100 mL,再精密量取10 mL加甲醇稀釋至25 mL,作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液(槲皮素 40.04 μg/mL)。

2.3.1.2 供試品溶液的制備 取白木香葉代泡茶樣品約0.1 g,粉碎,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加70%乙醇25 mL后,精密稱定,超聲處理30 min,靜置室溫,再加70%乙醇補(bǔ)足減失的重量。

2.3.1.3 陰性對照溶液的制備 取白木香葉代泡茶中除去白木香葉外其它所有成分,按照“2.2.1.2”項(xiàng)下供試品的制備方法,制備陰性對照溶液;

2.3.2 方法學(xué)考察

2.3.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(Shimadzu,150 mm×4.6 mm,5 μm,C18柱),以甲醇-0.15%磷酸水溶液(50∶50)為流動(dòng)相,檢測波長為 337 nm,柱溫為35℃,流速為1.0 mL/min。結(jié)果表明,在此條件下,槲皮素可以與相鄰雜質(zhì)峰有較好的分離,陰性對照溶液槲皮素出峰位置無雜質(zhì)干擾,該方法的系統(tǒng)適用性良好。

2.3.2.2 線性范圍 精密量取“2.2.1.1”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量,加70%乙醇分別稀釋制成濃度為0.8008、1.6016、3.2032、4.0040、6.0060、8.0080 μg/mL 的溶液,精密量取10 μL進(jìn)樣分析,以峰面積(y)為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣濃度(x)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,可得回歸方程y=37 767x-187.19,r=0.9995,結(jié)果表明在本含量測定方法條件下,槲皮素濃度在0.8008~8.0080 μg/mL濃度范圍內(nèi),其濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2.3 精密度試驗(yàn) 取線性范圍項(xiàng)下濃度為6.006 μg/mL的槲皮素對照溶液,連續(xù)測定5次,RSD為0.53%,表明儀器的精密度良好。

2.3.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液,分別于0、2、4、6、8 h分別進(jìn)樣分析,記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品溶液在室溫放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。槲皮素的峰面積RSD為1.29%。

2.3.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取樣品平行提取制備6份供試品溶液,分別測定其總黃酮的含量,RSD為0.87%,表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.3.2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的白木香葉代泡茶,分別加入槲皮素對照品適量,按供試品溶液的制備方法平行制備9份供試品,并測定其槲皮素的含量,槲皮素的平均回收率為98.15%,RSD為0.74%,結(jié)果表明本方法的回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.2.7 樣品中總黃酮含量測定 取白木香葉代泡茶產(chǎn)品(5批),照“2.3.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,0.45 μm微孔濾膜濾過后進(jìn)樣分析,所得結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 理化鑒別

張雪梅等[8]、Jie等[9]對沉香葉中所含的化學(xué)成分進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn),白木香葉中含有多糖、氨基酸、黃酮及苷類、酚類,和a-葡萄糖苷酶等降糖因子等,這些化學(xué)成分具有多種生理活性,例如,多糖具有抗癌、增強(qiáng)免疫、抗病毒等作用,筆者預(yù)測殺青炮制后的白木香葉代泡茶依然富含這些成分,針對猜想,設(shè)計(jì)的理化鑒別,鹽酸-鎂粉反顯紅色,說明含有黃酮類;堿性酒石酸試驗(yàn),呈現(xiàn)棕紅色沉淀,說明含有還原糖;a-萘酚試驗(yàn),界面出現(xiàn)紫紅色環(huán),說明含有苷類或多糖;茚三酮反應(yīng),深紫色,說明含有氨基酸。實(shí)驗(yàn)結(jié)果和預(yù)測結(jié)果相一致,說明了白木香葉代泡茶至少含有黃酮類、還原糖、苷類或多糖、氨基酸。這方法適用于檢測白木香葉代泡茶的的有效成分,檢驗(yàn)白木香葉代泡茶質(zhì)量,操作簡單有效。

3.2 TLC

該產(chǎn)品的薄層色譜鑒別,結(jié)果表明,白木香葉代泡茶混入的其他藥材對實(shí)驗(yàn)影響不大,直接使用白木香葉進(jìn)行參照對比,專屬性和重現(xiàn)性良好,非常適用于白木香葉代泡茶的真?zhèn)舞b別,結(jié)果準(zhǔn)確有效,而且方法簡單方便可行,為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定了基礎(chǔ)。

3.3 HPLC測定白木香葉代泡茶中的總黃酮含量

黃酮類化合物是沉香葉中所含的主要的一類化合物,黃酮類化合物在自然界中是活性較好的一類化合物,據(jù)報(bào)道具有祛痰、平喘、增強(qiáng)免疫功能等作用[10-11]。為了明確這類成分在沉香葉中的含量,為白木香葉代泡茶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ),本產(chǎn)品以高效液相色譜法測定白木香葉代泡茶中槲皮素的含量作為產(chǎn)品中總黃酮含量的衡量依據(jù),不僅回收率較高,線性良好,而且操作簡單。此方法可以用總黃酮含量為標(biāo)準(zhǔn),來衡量白木香葉代泡茶的質(zhì)量達(dá)標(biāo)情況,能有效地控制白木香葉代泡茶的質(zhì)量。為白木香葉代泡茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了有意義的參考。

3.4 小結(jié)

白木香主要產(chǎn)于廣東和海南兩地,野生資源稀少,是我國特有的珍稀藥用植物,因此科學(xué)、合理開發(fā)白木香,擴(kuò)大其應(yīng)用領(lǐng)域,是當(dāng)今研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)之一[12]?;诎啄鞠阏滟F的藥用功效及其資源其面臨枯竭的現(xiàn)狀,開發(fā)白木香其他部位資源迫在眉睫。由于白木香葉資源豐富,且其具有白木香部分相同功效的特點(diǎn),因而探討白木香葉代替沉香藥材的可行性是沉香研究開發(fā)中的一個(gè)重要的研究方向[12],具有極大的經(jīng)濟(jì)效益。本文通過理化鑒別、薄層色譜鑒別及高效液相法對白木香葉代泡茶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析,為人們更多更深入地研究沉香葉代泡茶提供依據(jù),對于實(shí)現(xiàn)白木香資源的綜合利用,提高白木香的經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有積極地現(xiàn)實(shí)意義。

本文建立的定性及定量方法簡單可行、重復(fù)性好,能有效地控制白木香葉代泡茶的質(zhì)量,為白木香葉代泡茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了有意義的參考。為用藥安全和開發(fā)利用該藥用植物資源提供科學(xué)依據(jù)。

測定白木香葉代泡茶中的總黃酮含量還可以使用蘆丁做對照品,或者使用紫外分光光度法,具體效果,要待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行比較,取最優(yōu)方案。

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