王桐生， 龍子江， 黃金玲， 吳德玲， 謝 鳴

(1．安徽中醫(yī)學(xué)院藥理教研室，安徽合肥230038;2．北京中醫(yī)藥大學(xué)方劑學(xué)學(xué)科，北京100029)

高溫應(yīng)激對機(jī)體可造成廣泛的多臟器損傷，也是誘發(fā)心腦血管疾病的常見因素之一。夏季養(yǎng)生顆粒是根據(jù)中醫(yī)四季養(yǎng)生經(jīng)驗(yàn)設(shè)計(jì)出的適用于夏季養(yǎng)生的中藥保健飲料，該方具有益氣養(yǎng)陰、清熱生津的功效，對高溫環(huán)境中的機(jī)體具有一定的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)觀察了夏季養(yǎng)生顆粒對高溫環(huán)境下動物生存及心、肝等臟器的保護(hù)作用。

1 材料

1.1 動物 SD大鼠，雄性，體質(zhì)量 (200±20)g;昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量 (20±2)g，由安徽省實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號為SCXK(皖)2005-001號。

1.2 藥物與試劑 夏季養(yǎng)生顆粒由人參、麥冬、葛根、銀花、茶葉組成，按常規(guī)水提法提取制成顆粒，8.5 g/袋(相當(dāng)于生藥18 g)，由北京中醫(yī)藥大學(xué)國家重點(diǎn)方劑學(xué)科實(shí)驗(yàn)室提供。復(fù)方丹參滴丸，天津天士力集團(tuán)生產(chǎn)，批號為:20080722，使用前取滴丸輕研磨，加適量蒸餾水配制備用。Ca2+-Mg2+-ATP酶測定試劑盒、Na+-K+-ATP酶測定試劑盒，由南京建成生物科技有限公司生產(chǎn)，批號均為20100730。天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶 (AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、磷酸肌酸激酶 (CK)、乳酸脫氫酶 (LDH)均為Olympus公司原裝試劑，批號分別為 8756、8723、8178、8149。

1.3 儀器 GNP—9080型隔水式恒溫箱，上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);754-分光光度計(jì)，上?？茖W(xué)儀器公司生產(chǎn);奧林帕斯—400型全自動生化分析儀，日本Olympus公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1 對小鼠的耐高溫作用 體質(zhì)量為18～22 g小鼠100只，雌雄各半，隨機(jī)分成空白對照組、陽性藥組 (復(fù)方丹參滴丸組，0.32 g/kg)、夏季養(yǎng)生顆粒小、中、大劑量組(分別為1.11、3.32、9.95 g/kg，按體表面積計(jì)算，相當(dāng)于人用量8.5 g/d的1、3、9倍)共5組，每組20只。各組按劑量灌胃給藥，連續(xù)7 d，正常組給予等容積蒸餾水，末次給藥后30 min，將小鼠放入 (45±1)℃的恒溫箱中，記錄小鼠的存活時間 (50 min未死按50 min計(jì)算)，計(jì)算50 min的各組存活數(shù)。

2.2 對高溫條件下大鼠血清和心肌組織相關(guān)酶的影響［1-2］取體質(zhì)量為180～220 g雄性大鼠60只，隨機(jī)分成正常組、模型組、陽性藥組 (復(fù)方丹參滴丸組，0.14 g/kg)、夏季養(yǎng)生顆粒小、中、大劑量組 (分別為0.70、1.40、2.80 g/kg，按kg體質(zhì)量計(jì)算，相當(dāng)于人用量8.5 g/d的5、10、20倍)，各組動物按劑量灌胃給藥，連續(xù)7 d，正常組、模型組給予等容量蒸餾水，末次給藥后30 min，除正常組外，其余各組動物放入 (45±1)℃恒溫箱中，30 min后取出，迅速麻醉，腹主動脈采血，分離血清，按速率法測定血清中AST、ALT、CK、LDH量。于冰盤上迅速摘取心臟，用冷生理鹽水洗盡，精確稱取一定量心肌組織，用冷生理鹽水制成10%的勻漿，按試劑盒說明書測定心肌Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活力。

3 結(jié)果

3.1 對小鼠的耐高溫作用 結(jié)果見表1。

表1 對高溫條件下小鼠存活時間及存活數(shù)影響 ± s，n=20)

表1 對高溫條件下小鼠存活時間及存活數(shù)影響 ± s，n=20)

注:與空白對照組比較，*P＜0.05。

組 別 劑量/(g·kg－1)存活時間/min存活數(shù)/只存活率/%空白對照組 － 24.75±12.18 1 5丹參滴丸組 0.32 31.40±14.16 6 30*養(yǎng)生顆粒組 (小劑量) 1.11 25.35±11.46 1 5養(yǎng)生顆粒組 (中劑量) 3.32 27.00±12.68 3 15養(yǎng)生顆粒組 (大劑量) 9.95 31.60±11.09 6 30*

由表1可見，連續(xù)給藥7 d，丹參滴丸組和夏季養(yǎng)生顆粒中、大劑量組小鼠高溫條件下的存活時間和動物存活數(shù)均有不同程度的延長和增加 (P＞0.05)，其中丹參滴丸組、夏季養(yǎng)生顆粒大劑量組動物存活率明顯增加，與空白對照組的差異有顯著性意義 (P＜0.05)。

3.2 對高溫應(yīng)激大鼠血清酶及心肌酶的影響 結(jié)果見表2和表3。

由表2可見，與正常組比較，造模各組大鼠血清中AST、ALT、CK、LDH的量均明顯增高，差異均有顯著性意義 (P＜0.05)，說明在高溫條件下大鼠臟器受到損傷。與模型組比較，夏季養(yǎng)生顆粒大劑量組大鼠血清中ALT和CK量均明顯降低 (P＜0.05)，其他各組血清AST和LDH量呈不同程度降低，但差異無顯著性意義 (P＞0.05)。結(jié)果顯示夏季養(yǎng)生顆粒對高溫環(huán)境下大鼠內(nèi)臟損傷有一定的保護(hù)作用。

表2 夏季養(yǎng)生顆粒對高溫應(yīng)激大鼠血清酶的影響 (±s，n=10)

表2 夏季養(yǎng)生顆粒對高溫應(yīng)激大鼠血清酶的影響 (±s，n=10)

注:與正常組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05。

組 別 劑量/(g·kg－1)AST/(U·L－1)ALT/(U·L－1)CK/(U·L－1)LDH/(U·L－1)正常組 － 153．17 ±19．79# 33．33 ±12．40# 210．80 ±80．30#436．60 ±216．15模型組 － 218．64 ±48．67* 54．03 ±18．47* 379．30 ±151．52* 644．50 ±288．44丹參滴丸組 0．14 192．45 ±35．45 40．47 ±6．45 351．40 ±193．75 591．70 ±310．06養(yǎng)生顆粒組 (小劑量) 0．70 203．24 ±31．02 46．19 ±6．76 370．00 ±131．37 602．30 ±351．07養(yǎng)生顆粒組 (中劑量) 1．40 194．81 ±47．85 48．71 ±16．85 307．60 ±140．35 624．40 ±418．55養(yǎng)生顆粒組 (大劑量) 2．80 200．40 ±22．22 34．16 ±12．67# 175．00 ±80．66#532．80 ±272．17

表3 對高溫應(yīng)激大鼠心肌酶的影響 (±s，n=10)

表3 對高溫應(yīng)激大鼠心肌酶的影響 (±s，n=10)

注:與正常組比，*P＜0.05;與模型組比，#P＜0.05。

組 別 劑量/(g·kg－1) Na+-K+-ATP 酶/(U·mgprot－1) Ca2+-Mg2+-ATP 酶/(U·mgprot－1)正常組 －21.59±5.71 16.27±3.81模型組 － 12.22±4.44* 12.77±3.55*丹參滴丸組 0.14 19.93±7.58# 13.37±5.51養(yǎng)生顆粒組 (小劑量) 0.70 13.85±4.36* 13.52±3.71養(yǎng)生顆粒組 (中劑量) 1.40 15.77±5.67* 13.98±5.15養(yǎng)生顆粒組 (大劑量) 2.80 19.89±6.62#13.79±2.93

由表3可見，高溫條件下模型組大鼠心肌Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均呈明顯下降 (P＜0.05)。與模型組比較，丹參滴丸組和夏季養(yǎng)生顆粒不同劑量組組大鼠心肌Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力均呈不同程度升高，其中丹參滴丸組和夏季養(yǎng)生顆粒大劑量組的Na+-K+-ATP酶活力提高明顯 (P＜0.05)。

4 討論

環(huán)境溫度與人體的健康密切相關(guān)。在高溫情況下工作生活，機(jī)體體溫調(diào)節(jié)功能發(fā)生紊亂，導(dǎo)致大量熱蓄積，表現(xiàn)為體溫升高、肌肉痙攣、暈厥等。臨床研究表明［3］，高溫中暑時血清 CK、AST、LDH和ALT均明顯升高，CK、LDH、AST和ALT活性可作為對中暑病情判斷及預(yù)后的重要參考指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)研究顯示，熱應(yīng)激所致的線粒體損傷及其生物學(xué)效應(yīng)是熱應(yīng)激心肌細(xì)胞損傷的重要機(jī)制，在高溫條件下大鼠心肌線粒體氧化代謝能力降低，Ca2+-ATP酶活性顯著下降，心肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載，而且隨溫度的升高而加重，提示對線粒體結(jié)構(gòu)與功能的保護(hù)可能是防治熱應(yīng)激機(jī)體心功能損傷的重要途徑［4-6］。

夏季養(yǎng)生顆粒是由人參、麥冬、葛根、銀花、茶葉所組成，方中藥味均為中醫(yī)用于夏季保健所常用。人參大補(bǔ)元?dú)?，養(yǎng)陰生津;麥冬養(yǎng)陰清熱，生津止渴;葛根清熱解暑，舒利經(jīng)脈;銀花清熱解毒，疏散風(fēng)熱;茶葉清熱利尿，明目醒神。全方合之有清熱解暑，益氣養(yǎng)陰之功?，F(xiàn)代研究表明，人參具有抗應(yīng)激作用［6-7］對心、肝損傷具有保護(hù)作用［8］;麥冬、葛根具有顯著的抗心肌缺血、改善心腦功能作用［9-10］;金銀花所含綠原酸、黃酮等成分有利膽、保肝、抗氧化的作用［11］。清茶富含多酚、多糖及黃酮類等成分，具有抗氧化、降血糖、抗輻射等作用［12-13］，對心血管系統(tǒng)有明顯的保護(hù)作用。本研究發(fā)現(xiàn)，夏季養(yǎng)生顆粒能增加或提高小鼠高溫下的生存時間和存活率，降低熱應(yīng)激條件下大鼠血清ALT和CK量和顯著增加大鼠心肌Na+-K+-ATP酶的活力。結(jié)果表明，夏季養(yǎng)生顆粒有一定的提高機(jī)體耐高溫的作用，對高溫條件下的心、肝等臟器具有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與清除自由基，抗氧化損傷有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)中的陽性對照藥復(fù)方丹參滴丸為治療心肌缺血的常用中成藥，由丹參、三七、冰片所組成，具有活血行氣止痛功能，與夏季養(yǎng)生顆粒在組成和功用 (益氣養(yǎng)陰，清熱祛暑)上有明顯不同。前期研究表明，丹參滴丸和夏季養(yǎng)生顆粒對冠脈結(jié)扎心肌缺血均有顯著的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)中觀察到，實(shí)驗(yàn)劑量下的丹參滴丸和夏季養(yǎng)生顆粒在提高高溫下的動物生存率和心肌酶活力方面具有類似的作用，但在對高溫條件下大鼠血清酶學(xué)的影響方面卻有所不同，如前者無明顯作用，后者則能顯著降低大鼠異常升高的血清ALT和CK量。結(jié)果提示，二方的藥理作用有所不同，抗心肌缺血在機(jī)體耐高溫中可能具有重要作用，但夏季養(yǎng)生顆粒則可能具有更廣泛的多臟器保護(hù)作用。

［1］姚 欣，馮子壇，劉 衛(wèi)，等．結(jié)腸途徑治療對中暑犬降溫作用及血清酶、炎癥因子的影響［J］．解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2007，32(9):982-985．

［2］李繼紅，朱國標(biāo)，陳 莉，等．高熱應(yīng)激對機(jī)體持續(xù)損傷的實(shí)驗(yàn)研究［J］．四川醫(yī)學(xué)，2011，31(12):1747-1750．

［3］張 斌．中暑患者血清中酶的變化及其對病情的診斷價值［J］．井岡山醫(yī)專學(xué)報(bào)，2003，10(6):70-71．

［4］馬根山，曹漢忠，卞振東，等．高溫對大鼠離體心臟結(jié)構(gòu)和功能的影響［J］．交通醫(yī)學(xué)，2008，22(1):9-11．

［5］趙 遠(yuǎn)，和占龍，吳海興，等．兩種抗應(yīng)激劑對恒河猴抗熱應(yīng)激作用的試驗(yàn)研究［J］．實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)，2008，25(3):30-33．

［6］紀(jì) 筠，宋 青，岳 慧，等．血必凈注射液對熱射病大鼠保護(hù)機(jī)制的研究［J］．解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2011，36(6):578-581．

［7］張海英，薛 潔，史玉柱，等．人參對脾虛及正常小鼠抗應(yīng)激能力的影響［J］．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3(11):42-43．

［8］袁文學(xué)，伍湘瑾，楊福新，等．人參根皂甙對熱應(yīng)激鼠腦單胺遞質(zhì)和血清皮質(zhì)酮影響［J］．中國藥理學(xué)報(bào)，1989，10(6):492-496．

［9］韓明向，史東巖，倪恩榮，等．人參增加家兔缺血性心肌組織血流量的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1992，12(7):427-428．

［10］徐德生，馮 怡，周躍華，等．麥冬多糖中抗急性心肌缺血活性部位研究［J］．中成藥，2004，26(10):832-837．

［11］范禮理，曾貴云．葛根的藥理研究-Ⅱ葛根黃酮對冠狀循環(huán)心臟血流動力學(xué)和心肌代謝作用［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，1995，55(10):724．

［12］Yao H W，Li J，Jin Y，et al．Effect of leflunanide on immunological liver injury in mice［J］．World J Gastroenterol，2003，9(2):320-323．

［13］劉冬英，王 茵．茶葉多酚心血管保護(hù)作用的分子機(jī)制研究進(jìn)展［J］．食品科學(xué)，2010，31(21):464-468．

［14］沈生榮，趙玉芳，凌備備，等．兒茶素對羥自由基誘發(fā)SOD基因序列改變的影響［J］．浙江大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版，2000，26(1):25-29．