高志華 王德華(天津市海河醫(yī)院婦產(chǎn)科，天津 300350)

宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤，在腫瘤發(fā)展的早期階段即可發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，而淋巴轉(zhuǎn)移又是影響宮頸癌患者預(yù)后的重要因素之一〔1，2〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長因子，VEGF-C是VEGF家族成員之一，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有促進(jìn)新生血管形成的作用。研究證實(shí)VEGF-C在多種惡性腫瘤中的表達(dá)會(huì)有所增高，已經(jīng)成為臨床公認(rèn)的促進(jìn)惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的淋巴管生長因子〔3，4〕。本文旨在探討老年宮頸癌患者組織及血清VEGF-C的表達(dá)及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究資料 選取2010年1月至2011年12月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院和我院婦科收治的病理資料完整的老年宮頸癌患者38例，年齡60～79〔平均(67.34±5.21)〕歲，按照2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期，I期11例，Ⅱ期13例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4例;鱗癌24例，腺癌6例;高分化6例，中分化24例，低分化8例;有盆腔淋巴轉(zhuǎn)移者14例，無盆腔淋巴轉(zhuǎn)移者24例。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ期～Ⅲ期)患者40例，其中CINⅡ期24例，Ⅲ期16例，年齡54～73〔平均(65.23±11.31)〕歲。非宮頸疾病患者40例，年齡60～81〔平均(65.14±4.38)〕歲。入選的宮頸癌及CIN患者均病理檢查確診，活檢前未行放療及化療。病理診斷由2位以上高年資醫(yī)師獨(dú)立評(píng)定，結(jié)果一致。

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)方法 宮頸組織采取活檢取得，標(biāo)本進(jìn)行10%甲醛固定后常規(guī)脫水、石蠟包埋，以4 μm厚度進(jìn)行切片備檢。抽取空腹靜脈血4 ml，在室溫下靜置30 min待自然凝固后以2 000 r/min離心處理10 min取得血清，-20℃條件下保存?zhèn)錂z。組織VEGF-C檢測(cè)采取免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法(免疫組化SP法)，試劑盒為武漢博士德生物制劑有限公司生產(chǎn)的兔抗人VEGF-C多克隆抗體及SP免疫組化試劑盒，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑為福建邁新公司生產(chǎn)。血清VEGF-C檢測(cè)采取雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)，試劑盒為美國R＆Dsystems公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判讀 檢測(cè)結(jié)果由2位高年資病理醫(yī)師進(jìn)行確認(rèn)，組織VEGF-C表達(dá)先讀取光密度值，并且在高倍顯微鏡下對(duì)每張切片隨機(jī)讀取5個(gè)視野1 000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)為淡黃色或棕黃色即為陽性，著色程度評(píng)分按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行〔5〕:基本不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性細(xì)胞所占百分率:陰性為0分，陽性細(xì)胞≤10%為0分，11% ～50%為1分，≥51%為3分。將著色評(píng)分與陽性細(xì)胞百分率評(píng)分相乘，如為0～2分即為陰性，3～4分弱陽性，5～7分為陽性，8～9分強(qiáng)陽性。血清VEGF-C檢測(cè)值采取吸光度值(OD)計(jì)算，其濃度通過標(biāo)準(zhǔn)品濃度和所對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算，方程式y(tǒng)=0.003 7x+0.229 5。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，比較采用方差分析及兩兩樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采取Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 組織及血清中的VEGF-C表達(dá) 組織VEGF-C陽性表達(dá)率、吸光度及血清VEGF-C濃度均以宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移組最高，其次為宮頸癌無淋巴轉(zhuǎn)移組、CIN組，正常宮頸組最低，各組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1，表2。

2.2 宮頸癌患者組織和血清VEGF-C表達(dá)相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析顯示，宮頸癌無淋巴轉(zhuǎn)移組Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.782，P＜0.01;宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移組 r=0.724，P＜0.01，宮頸癌患者無論有無淋巴轉(zhuǎn)移，血清VEGF-C濃度與組織中VEGF-C表達(dá)均呈現(xiàn)正相關(guān)。

表1 各組組織中VEGF-C吸光度及血清VEGF-C濃度比較(±s)

表1 各組組織中VEGF-C吸光度及血清VEGF-C濃度比較(±s)

與宮頸癌無淋巴轉(zhuǎn)移組、CIN組、正常宮頸組比較:1)P＜0.05;與CIN組、正常宮頸組比較:2)P＜0.05;與正常宮頸組比較:3)P＜0.05;下表同

組別 n 組織VEGF-C(吸光度)血清VEGF-C(pg/ml)40 3 732.18±1 987.39 10 231.42±982.31 CIN組 40 10 132.35±4 107.623)11 004.46±1036.783)宮頸癌無淋巴轉(zhuǎn)移組 24 27 189.08±5 092.432)12 967.38±983.492)宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移組 14 32 975.34±5 899.381)13 802.31±1221.211)正常宮頸組

表2 各組組織中VEGF-C陽性表達(dá)率比較(n)

3 討論

VEGF是一組分泌型糖蛋白，其家族成員包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、P1GF、PDGF，其中 VEGFC是最重要的致淋巴管生長因子，在人體中主要在小腸、心臟、胎盤及卵巢等組織中有一定表達(dá)，并在多種惡性腫瘤中均有異常表達(dá)情況存在〔6～9〕。VEGF-C的受體分別為 VEGF R-2與VEGF R-3，在同一種組織中VEGF-C對(duì)VEGF R-3親和力明顯強(qiáng)于VEGF R-2，而VEGF-C與VEGF R-2結(jié)合會(huì)引起促血管生成作用，VEGF-C與VEGF R-3結(jié)合則會(huì)引起蛋白激酶B磷酸化，從而對(duì)多種功能細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控，保護(hù)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞不被凋亡，保護(hù)淋巴管生成〔3，4〕。VEGF-C引起惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制較為復(fù)雜，可能是通過提高腫瘤細(xì)胞的黏附能力、激活淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的受體、VEGF-C較強(qiáng)趨化能力、自身淋巴系統(tǒng)對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移提供了便利環(huán)境等環(huán)節(jié)實(shí)現(xiàn)〔6，10〕。

宮頸癌在中老年患者中最為多見，淋巴轉(zhuǎn)移是宮頸癌最為常見的轉(zhuǎn)移方式，國內(nèi)外的研究表明是否存在盆腔淋巴轉(zhuǎn)移與宮頸癌患者遠(yuǎn)期生存率關(guān)系密切，是影響患者預(yù)后的主要危險(xiǎn)因素〔1，2〕。研究發(fā)現(xiàn)正常宮頸組織中VEGF-C不表達(dá)或僅偶有極少量的表達(dá)，而隨著宮頸疾病的逐漸發(fā)展，VEGF-C表達(dá)會(huì)逐級(jí)增強(qiáng)，CIN中VEGF-C表達(dá)會(huì)明顯開始增強(qiáng)，宮頸癌患者組織中表達(dá)最強(qiáng)〔5，11〕;并且有研究發(fā)現(xiàn)在CINⅢ期組織中VEGF-C表達(dá)與宮頸癌組織中表達(dá)無明顯差異性，顯示可能宮頸癌患者淋巴管生成在CIN時(shí)即已經(jīng)開始〔10〕。研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C的表達(dá)與宮頸癌的腫瘤分期及分化程度密切相關(guān)，分化程度低、腫瘤浸潤越深時(shí)VEGF-C表達(dá)越強(qiáng)〔12，13〕，這也進(jìn)一步提示隨著宮頸癌的發(fā)展，VEGF-C成為促進(jìn)淋巴轉(zhuǎn)移的原因之一。有學(xué)者對(duì)發(fā)生盆腔淋巴轉(zhuǎn)移與未發(fā)生盆腔淋巴轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者VEGF-C表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，研究結(jié)果表明如患者發(fā)生盆腔淋巴轉(zhuǎn)移，VEGF-C表達(dá)會(huì)明顯高于未發(fā)生盆腔淋巴轉(zhuǎn)移患者〔14〕，從而也表明VEGF-C表達(dá)與盆腔淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，具有預(yù)測(cè)宮頸癌是否具有淋巴管轉(zhuǎn)移的價(jià)值。

本文研究結(jié)果，也進(jìn)一步表明VEGF-C在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中有所參與，而且盆腔有無淋巴轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者組織VEGF-C及血清 VEGF-C均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，進(jìn)一步表明VEGF-C的檢測(cè)對(duì)宮頸癌有無淋巴轉(zhuǎn)移的檢測(cè)具有臨床意義。組織中VEGF-C與血清VEGF-C的相關(guān)性研究較少。本文對(duì)兩者進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示組織VEGF-C與血清VEGF-C之間存在正相關(guān)，如臨床上檢測(cè)組織VEGF-C不便，則采取檢測(cè)血清VEGF-C具有同樣的臨床價(jià)值。這一研究結(jié)果與張頌婕等〔14〕報(bào)道的結(jié)果一致。

綜上所述，VEGF-C是一種能促進(jìn)淋巴管生成的因子，在宮頸癌患者組織及血清中均存在表達(dá)升高，VEGF-C可作為評(píng)估宮頸癌患者是否存在淋巴轉(zhuǎn)移的檢測(cè)指標(biāo)，而且組織VEGF-C與血清VEGF-C存在正相關(guān)，檢測(cè)血清VEGF-C表達(dá)具有與檢測(cè)組織VEGF-C同樣的價(jià)值，而且血清檢測(cè)更為方便、簡潔、創(chuàng)傷性更小，重復(fù)性高，提示血清VEGF-C檢測(cè)可以成為宮頸癌患者檢測(cè)是否有淋巴轉(zhuǎn)移的常規(guī)方法。

1 張 羽，杜小波，王 晉，等.宮頸癌預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)志物的研究進(jìn)展〔J〕.華西醫(yī)學(xué)，2012;27(5):783-5.

2 赫東蕓，岳 瑛，奚 麗，等.影響宮頸癌預(yù)后的因素分析〔J〕.中國婦幼保健，2009;24(9):1287-9.

3 張善蘭，錢曉萍，劉寶瑞.VEGF-C與腫瘤淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2012;6:1274-7.

4 黃 輝，蔣宏玲，劉美蓮，等.VEGF-C/VEGFR-3與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移研究進(jìn)展〔J〕.中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2011;13(10):1723-4.

5 周鐵軍，向 麗，龔 莉，等.血管內(nèi)皮生長因子-C及其受體在宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2010;39(5):533-5.

6 郭 琳，張丹丹，王 強(qiáng).VEGF-C與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展〔J〕. 山東醫(yī)藥，2009，49(7):113-4.

7 強(qiáng)化龍，詹曉東.喉癌組織中VEGF-C和VEGF-D的研究新進(jìn)展〔J〕. 解剖與臨床，2009;14(2):135-6，139.

8 陳 玉，齊協(xié)飛.血管內(nèi)皮生長因子-C與肺癌〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志，2009;36(6):434-6.

9 張喜軍，張杰武.VEGF-C及其甲狀腺乳頭狀癌關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2009;23(11):89-90，100.

10 張紅平，黃云超，盧玉波.血管內(nèi)皮生長因子C與宮頸癌的研究進(jìn)展〔J〕. 醫(yī)學(xué)綜述，2010，16(2):219-21.

11 張紅平，余 晶，楊宏英，等.OPN、VEGF-C在早期宮頸癌中的表達(dá)〔J〕. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012;39(3):577-80.

12 馮珊珊，王渠源，田紅雨，等.血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)在宮頸癌血清中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國婦幼保健，2011;26(25):3957-9.

13 張 紅，王言奎.血管內(nèi)皮生長因子C在宮頸癌組織表達(dá)及其意義〔J〕. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志，2009;24(4):304-5，308.

14 張頌婕，劉路玖，王渠源，等.老年宮頸癌患者組織和血清血管內(nèi)皮生長因子-C檢測(cè)及其意義〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2012;32(13):2840-2.