和秀芳 （云南省香格里拉縣動物衛(wèi)生檢疫監(jiān)督所 674400）

徐文必 （云南省宣威市格宜鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

李海昌 張 佳 王生奎 肖 嘯 （云南農業(yè)大學動物科學技術學院 云南 昆明）

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產物，特曲霉也能產生黃曲霉毒素，但產量較少.產生的黃曲霉毒素主要有B1,B2,G1,G2以及另外兩種代謝產物M1,M2。1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構劃定為1類致癌物, 是一種毒性極強的劇毒物質.黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強[1]。食物污染可發(fā)生于植物生長期或收割后儲存或加工過程中。黃曲霉毒素(AFB1)主要在細胞色素作用下轉化為具有細胞毒性的親電子和芳基化代謝產物，特別是AFB1有害的8,9-環(huán)氧化物快速生成通過耗竭細胞內GSH而損傷肝細胞脫毒作用。肝細胞內還原型谷胱甘肽(GSH)的耗竭不僅損傷AFB1的脫毒作用，還可通過環(huán)氧化物介導的直接損傷而引起繼發(fā)性氧化損傷。聚積的AFB1與細胞酶、蛋白質和DNA進行不可逆結合，從而損傷代謝、基因轉錄和蛋白質合成[2]。另外，在幾個物種還發(fā)現了致肝癌作用。不同物種對黃曲霉毒素敏感性不同，以犬敏感性為高，犬對黃曲霉毒素所致的急性和亞急性肝病可能反映了其肝細胞GSH濃度較低，以及GSH-S-轉移酶的個體間差異[3]。不同動物對黃曲霉毒素B1敏感性不同，以犬敏感性為高。在犬上關于黃曲霉中毒的報道很少，僅有仝宗喜[4]2010年《養(yǎng)犬》和董翠蓮[5]2012在上海畜牧獸醫(yī)通訊上發(fā)表的《霉菌毒素中毒對犬肝腎功能的影響》發(fā)表過兩篇關于玉米霉菌毒素對犬的危害和防治措施的文章。黃曲霉毒素主要損害的是犬的肝臟及腎臟，可以通過對比健康犬和中毒犬血液中谷丙轉氨酶，谷草轉氨酶，堿性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸等生理生化指標的變化規(guī)律，評價黃曲霉毒素對犬肝臟及腎臟功能的影響，進而得出黃曲霉毒素對犬的危害，為防止及治療犬黃曲霉毒素中毒提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物 選20只飼喂過金標試紙檢測黃曲霉素B1陽性的麥麩和玉米面犬，根據臨床癥狀的明顯程度分為中度中毒組、重度中毒組每組10只；另選 10只健康犬作為對照組。

1.1.2 試驗儀器及試劑 離心沉淀器(上海手術器械廠磁極牌，80-2型)，全自動生化分析儀(邁瑞公司，序列號XA-16000600)，黃曲霉素快速檢測試紙卡(上?？祆`生物科技有限公司，生產批號6110816314)。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 選擇10只未飼喂過玉米糠麩飼料臨床無中毒癥狀的健康犬作為對照組，分別編號為1～10號；病犬根據臨床癥狀進行分組，將10只有玉米糠麩飼料飼喂史，出現精神萎靡，嘔吐，腹瀉等中度中毒癥狀的犬作為中度中毒組，分別編號為11～20號；將10只有玉米糠麩飼料飼喂史，出現精神極度沉郁，腹瀉便血，嘔吐物中帶血絲，小便赤黃，黃疸，腹水等重度中毒癥狀的犬只作為重度中毒組，分別標號為21～30號。

1.2.2 采集飼料做檢測 對中毒犬只的飼料進行采集，用黃曲霉毒素快速檢測試紙卡對中毒犬只的飼料經行檢測。取5g以上有代表性的飼料樣品磨碎，準確稱取2g均勻粉末試樣加入到離心管中，向離心管中準確加入2ml純水和乙酸乙酯8ml，將瓶蓋密封，放入離心機中離心。以3000r/min離心2min，取上2ml清液，吹干濾液，參照表格，根據殘留限量取相應體積稀釋液復溶杯底固體，此溶解液為檢測液，滴入黃曲霉素快速檢測試紙卡。經檢測中毒犬只所食用的玉米糠麩為被黃曲霉毒素B1污染的飼料，檢測成陽性。試紙卡是利用特定的抗原抗體反應原理，采用實現包被的特異性抗體捕捉檢測對象中的對黃曲霉毒素成分，進而通過觀察測試線和控制線的顯色反應來達到判定檢測對象中的黃曲霉毒素污染程度的目的。

圖1 陰性

圖2 陽性

測試結果如圖所示，左邊的為陰性，右邊的為中毒犬只玉米糠麩飼料的檢測結果，為陽性。

1.2.3 血樣的采集和處理 采用前臂內靜脈采血法，每只犬采血3ml，所采血樣放入負壓儲血管保存，放入離心機中離心，以3000r/min離心2min，分離血清，取上層血清移入各試劑杯中(最少取0.5ml血清易檢測)，用全自動生化分析儀檢測。

1.2.4 檢測指標 待測血清做生化指標檢測，主要檢測谷丙轉氨酶，谷草轉氨酶，堿性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸。

1.2.5 數據分析 使用SPSS統計軟件對數據進行處理，全部數據采用平均值對比和F檢驗與q檢驗，結果用均數±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 各組犬血液生化指示

見表1。

表1 各組犬血液生化指標平均數比較

由表1可知犬在黃曲霉毒素中毒后血液中谷丙轉氨酶，谷草轉氨酶，堿性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸均有不同程度的升高。說明，黃曲霉毒素會對犬的肝臟以及腎臟的功能產生影響。

2.1 各組生化指標的比較結果

見表2。

由表2可知，谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、尿素氮4項指標3組之間均差異極顯著(P<0.01)，對于肌酐，中度中毒組與重度中毒組之間差異不顯著(P≥0.05)，兩組與對照組均有顯著差異(P<0.05)，對于尿酸，中度中毒組與重度中毒組之間差異不顯著(P≥0.05)，兩組與對照組均有顯著差異(P<0.05)。

表2 各生化指標分析

3 討論

試驗結果表明，犬黃曲霉毒素B1中毒后，肝腎功能均受到較大的影響，影響程度與中毒程度有關。黃曲霉毒素B1主要損害肝臟，表現為肝細胞核腫脹、脂肪變性、出血、壞死及膽管上皮、纖維組織增生。同時腎臟也可受損害，主要表現為腎曲小管上皮細胞變性、壞死，有管型形成。谷丙轉氨酶，谷草轉氨酶和堿性磷酸酶是大多存在于肝細胞內，肝臟是毒素的靶器官,當黃曲霉毒素傾入機體，經胃腸道吸收進入門脈血液，黃曲霉毒素(AFB1)主要在細胞色素P450(CYP450)作用下轉化為具有細胞毒性的親電子和芳基化代謝產物，特別是AFB1有害的8,9-環(huán)氧化物快速生成通過耗竭細胞內GSH而損傷肝細胞脫毒作用造成肝臟的損傷，中毒畜禽的肝細胞發(fā)生嚴重顆粒變性、脂肪變性、水泡變性、透明變性，這三種酶因此升高。而尿素氮，是哺乳動物蛋白質在肝臟里分解代謝的最終產物尿素中的氮，由腎臟排出體外，當肝腎受到黃曲霉毒素B1的侵害時，腎小球損傷，導致腎小球濾過率降低，動物體內的尿素氮排不出體外，尿酸也是相同，因此造成體內尿素氮的升高和尿酸的升高。肌酐一般很少像尿素氮一樣受諸多因素影響，使得結果不準確，所以肌酐檢測腎臟疾病比尿酸更為好。肌酐主要由腎小管濾過，腎小管不在重吸收，再從尿中排出，根據國際腎臟關注協會把犬貓腎病和腎衰竭根據肌酐多少分為了四個階段，而犬黃曲霉素B1中毒的肌酐屬于腎病和腎衰竭的第一階段[6]。而且根據數據的出黃曲霉素B1對肝臟的損傷大于對腎臟的損傷。

4 結論

（1）犬黃曲霉素B1中毒導致急慢性肝炎、中毒性肝炎，肝實質受到損害，腎功能衰竭，肝腎功能受到嚴重損傷，隨著中毒程度的不同，所測各項指標間有明顯差異。（2）犬黃曲霉素B1中毒的治療原則以保肝護腎為主，并根據臨床癥狀對癥治療。黃曲霉素B1中毒對犬肝腎功能影響極大，且治愈率較低，有嚴重后遺癥。因此防止犬黃曲霉毒素B1中毒應以預防和控制為主，注意飼料的安全性，選用來源好的原材料；必要時在飼料中適量添加質量較好的脫霉劑和防霉劑；在飼料中添加益生菌、微量元素和維生素，增強機體免疫力，緩解黃曲霉毒素對動物的危害[7]。

[1]舒曉燕.飼料中霉菌毒素的危害及控制[J].畜牧業(yè), 2005, 4(11):60-61.

[2]汪小舟, 祝陽.黃曲霉素的毒害及防除[J].現代食品科技, 2005(2): 2.

[3]賀星亮, 李剛, 朱玉.犬黃曲霉毒素中毒[J].中國工作犬業(yè) 2008 (9).

[4]仝宗喜, 張廣強, 霍磊.玉米霉菌毒素對犬的危害和防治措施[J].養(yǎng)犬, 2010 (1): 13-14

[5]董翠蓮, 肖嘯.霉菌毒素中毒對犬肝腎功能的影響[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊, 2012(2): 42-43

[6]周桂蘭, 高得儀(主編).犬貓疾病實驗室檢驗與診斷手冊[M].北京: 中國農業(yè)出版社, 2010.

[7]谷子林, 李素敏, 劉亞娟.飼料霉菌毒素對家兔的危害及其調控研究[A].河北農業(yè)大學動物科技學院.2008.432-433