李跟旺，劉效栓，焦正花，楊沛霖

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

消定膏皮膚刺激性及致敏性研究△

李跟旺，劉效栓，焦正花*，楊沛霖

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

目的：研究消定膏對家兔完整皮膚的刺激性及其對皮膚的致敏性。方法：家兔去毛后左側(cè)區(qū)域為空白對照區(qū)，涂以蒸餾水0.5 mL；右側(cè)區(qū)域為給藥區(qū)，涂以0.5 g消定膏，每天涂抹1次，連續(xù)7 d，觀察及記錄紅斑及水腫等情況，并按皮膚刺激反應評分標準進行評分研究其對完整皮膚的刺激性；通過與高致敏物2、4-二硝基氯苯比較研究其致敏性。結果：在連續(xù)貼敷消定膏第4天和第5天開始出現(xiàn)輕度紅斑，貼敷第5天開始出現(xiàn)輕度水腫，停藥后48 h逐漸恢復，對皮膚無過敏反應；消定膏過敏發(fā)生率為0%，無皮膚過敏反應。結論：消定膏對家兔完整皮膚具輕度刺激性，對皮膚無致敏反應。

消定膏；刺激性；致敏性

消定膏是甘肅省中醫(yī)院骨科常用純中藥制劑，主要由大黃、兒茶、紫荊皮等5味中藥組成，具有活血散瘀，消腫止痛的功效，同時有改善局部炎性疼痛及外傷性瘀血腫痛的作用。其臨床療效確切，不良反應小，在我院臨床應用已有40余年，備受臨床醫(yī)生和患者的歡迎，取得了一定的經(jīng)濟效益和社會效益。作者在臨床療效確切的基礎上，對其刺激性及相關致敏性進行研究，為醫(yī)院制劑申報新藥提供理論依據(jù)，使其具有廣泛的實用性、先進性和科學性。

1 材料

1.1 藥品與試劑

消定膏(棕褐色膏狀物，批號：20070506，由甘肅省中醫(yī)院提供)；2、4-二硝基氯苯(上海試劑一廠，批號：0060301)，臨用前用分析純丙酮配制成1%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度。

1.2 動物

健康白色家兔4只，體重2.5～3.0 kg，雌雄兼有，合格證號：甘醫(yī)動字第14-004號；白色豚鼠，雌雄各半，體重250～300 g，合格證號：醫(yī)動字14-003號，均由蘭州生物制品研究所動物室提供。室溫18～25 ℃，相對濕度40%～60%。

2 方法

2.1 消定膏對家兔多次皮膚刺激性試驗[1-5]

將4只家兔預養(yǎng)3 d。試驗前24 h，將家兔脊柱兩側(cè)被毛剪掉，用硫化鈉-淀粉-肥皂粉(3∶7∶1)的比例用水配成糊狀，脫毛，用清水清洗干凈；不損傷表皮，去毛范圍左、右各約3 cm×3 cm。去毛24 h后每只動物左側(cè)區(qū)域為空白對照區(qū)，涂以蒸餾水0.5 mL；右側(cè)區(qū)域為給藥區(qū)，涂以0.5 g消定膏，涂抹面積2.5 cm×2.5 cm。涂抹后用一層玻璃紙和兩層紗布覆蓋，再用無刺激膠布和繃帶加以固定。每天涂抹1次，連續(xù)7 d，每次涂抹后至少保留4 h。從第2天開始，每次去除藥物1 h以及再次貼敷前觀察并記錄紅斑及水腫，涂敷部位是否有色素沉著、出血點，皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生時間及消退時間，并按皮膚刺激反應評分標準進行評分。末次貼敷后，在去除藥物后1，24，48，72 h肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫等情況?？瞻讓φ諈^(qū)和試驗區(qū)同樣處理、觀察。

計算每一觀察時點各組積分均值，然后計算觀察期限內(nèi)每天每只動物刺激積分均值，每天每只動物刺激積分均值=每天每只動物各時點刺激評分總和/每天每只動物評分次數(shù))，按表1～2的皮膚刺激強度評價標準進行評價[6]。

表1 皮膚刺激及致敏性反應評分標準

表2 皮膚刺激強度評價標準

2.2 皮膚致敏反應試驗[7]

將豚鼠30只，預養(yǎng)3 d后，隨機分為3組，分別為消定膏組、陽性對照組(2、4-二硝基氯苯)、陰性對照組(0.9%氯化鈉溶液)，每組10只。試驗前24 h，將豚鼠背部左側(cè)或右側(cè)脫毛，用清水清洗干凈，不損傷表皮，去毛范圍左、右均約3 cm×3 cm。

取消定膏0.2 g，涂抹于豚鼠左側(cè)背部脫毛區(qū)，涂抹后用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再用無刺激膠布封閉固定6 h。陽性對照組涂抹1% 2、4-二硝基氯苯0.2 mL，陰性對照組涂抹0.9%氯化鈉溶液0.2 mL，涂抹后處理方法同受試物組。試驗第7天和第14天以同樣方法各重復1次，共計3次。于末次致敏后14 d，再次將受試物0.2 g涂于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，方法同前。6 h后去掉受試物，即刻觀察，然后于24，48，72 h再次觀察皮膚過敏反應情況，并按表3皮膚過敏反應評分標準對各時間進行評分[8]。同時密切觀察動物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴重的全身過敏反應。陽性對照組涂抹0.1% 2，4-二硝基氯苯0.2 mL，陰性對照組涂抹0.9%氯化鈉溶液，觀察方法同受試物組。

致敏反應發(fā)生率=有過敏反應動物數(shù)(不論程度輕重)/動物總數(shù)×100%。按表3皮膚致敏性評價標準推斷受試物的致敏性。

表3 皮膚致敏性評價標準

2.3 統(tǒng)計學處理

3 結果

3.1 消定膏對家兔皮膚刺激反應試驗結果

在試驗觀察期內(nèi)，根據(jù)皮膚刺激性強度評價標準，在連續(xù)貼敷消定膏第4天和第5天分別有2只家兔開始出現(xiàn)輕度紅斑，并逐漸加重；貼敷第5天開始出現(xiàn)輕度水腫。停藥后48 h逐漸恢復?？瞻讓φ諈^(qū)未出現(xiàn)上述刺激癥狀，涂抹及觀察期內(nèi)未見動物全身異常反應，試驗結果見表4。

表4 消定膏對家兔多次皮膚刺激性試驗結果(n=4)

根據(jù)皮膚刺激強度評價標準：每天每只動物刺激積分均值0.5～2.99時，為輕度刺激性。本試驗結果表明，消定膏多次連續(xù)涂抹給藥后每天每只動物完整皮膚刺激積分均值為1.40，可判消定膏對家兔的完整皮膚均有輕度刺激作用。

3.2 消定膏對豚鼠皮膚過敏反應試驗結果

消定膏組與陰性對照組致敏激發(fā)接觸后觀察，陽性對照組自激發(fā)給藥6 h后，即刻觀察動物有出現(xiàn)輕度紅斑、明顯紅斑或嚴重紅斑，同時伴有輕度水腫、中度水腫或重度水腫，皮膚隆起1 mm，輪廓清楚等不同程度的過敏反應，總積分35分；24 h開始消退，總積分為27分；48 h總積分18分；72 h后總積分為12分，致敏率100%。陽性對照2、4-二硝基氯苯過敏發(fā)生率為100%，為極度致敏性；消定膏過敏發(fā)生率為0%，無皮膚過敏反應，見表5。

表5 消定膏對豚鼠皮膚過敏反應試驗結果

4 結論

消定膏屬活血散瘀、消腫止痛的中藥膏劑，在骨外科領域用于跌打損傷，消腫止痛，療效確切。

本試驗通過豚鼠皮膚過敏試驗，以高致敏物2、4-二硝基氯苯為陽性對照，觀察消定膏皮膚用藥的過敏性反應。致敏試驗的研究發(fā)現(xiàn)消定膏對皮膚無致敏性，使用較為安全可靠。通過消定膏對家兔皮膚刺激性試驗及對豚鼠皮膚的致敏試驗研究，確定消定膏對家兔完整皮膚有輕度刺激作用，對皮膚無致敏性。

[1] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則[S].2005.

[2] 胡楠楠，王雪峰，趙雪，等.敷胸巴布貼制劑對健康家兔皮膚刺激實驗研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2012,39(6)：1168-1169.

[3] 王北嬰，李儀奎.中藥新藥研制開發(fā)技術與方法[J].上海：上海科學技術出版社，2001：788-808.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學[J].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：112-119.

[5] 鄭利光，翟所迪.甘草鋅膜對實驗性口腔潰瘍的治療作用及其粘膜刺激性研究[J].中國新藥雜志，2006，15(8)：601-603.

[6] 衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南(藥學、藥理學、毒理學)[M].1994：205-207.

[7] 許景川.蜂膠提取物對口腔黏膜刺激和皮膚致敏作用的實驗研究[J].海峽藥學，2010，22(12)：27-28.

[8] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物免疫毒性(過敏性、光敏性反應)研究的技術指導原則[S].2005.

TheSkinIrritationandSensitizationResearchofXiaodingGao

LI Gen-wang,LIU Xiao-shuan,JIAO Zheng-hua,YANG Pei-lin

(GansuProvinceHospitalofTCM,Lanzhou730050,China)

Objective： To study skin irritation and sensitization of Xiaoding Gao with rabbit.Methods： After removing rabbit hair,the left side is blank controlled area,coated with distilled water 0.5 mL； The right is medicine area and coated with 0.5 g Xiaoding Gao,once daily,continuous 7 d,observe and record erythema,edema indicators,rate according to the ‘skin stimulation reactions rating criteria’. Skin sensitization of Xiaoding Gao is compared with 2,4-two nitro chlorobenzene,which is highly allergic.Results： After continuous applying Xiaoding Gao,mild erythema was appeared at 4thor 5thday,mild edema was found at 5thday. 48 h after discontinuation of Xiaoding Gao,erythema and edema disappeared gradually,and there wae no skin allergic reaction. The allergic rate of Xiaoding Gao is 0%.Conclusion： Xiaoding Gao has little skin irritation and no sensitization effect to complete rabbit skin.

Xiaoding Gao； Irritation； Sensitization

2012-07-16)

△

2003～2010年甘肅省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科研項目(2003-GZK-16)

*

焦正花，E-mail：939410984@qq.com