康國平，王玉華* ，赫榮帆，王 娟

(1．江蘇科技大學(xué)，江蘇鎮(zhèn)江 212003;2．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所，江蘇鎮(zhèn)江 212018)

家蠶細(xì)菌性敗血病在養(yǎng)蠶生產(chǎn)中時(shí)有發(fā)生，尤其在夏秋高溫多濕季節(jié)危害更嚴(yán)重，目前蠶業(yè)生產(chǎn)中使用的相類似蠶藥抗菌防病作用效果不全面，且防治由沙雷鐵氏菌引起的敗血病的藥物較少，因此研制出更為理想的蠶用抗菌藥物用于蠶業(yè)生產(chǎn)，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)、提高經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。本試驗(yàn)研究了鹽酸左氧氟沙星對由黑胸?cái)⊙【?、卒倒芽孢桿菌和沙雷鐵氏菌等代表性病原菌感染引起的家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果，以及其對家蠶的生長發(fā)育、繭質(zhì)、絲質(zhì)和種質(zhì)的安全性，以期為新蠶藥的推廣應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1．1 材料 供試藥物:鹽酸左氧氟沙星溶液，試制批號100206，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所附屬蠶藥廠研制;對照藥物:鹽酸諾氟沙星溶液(蠶用)，生產(chǎn)批號100207，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所附屬蠶藥廠生產(chǎn)。

供試家蠶品種:絲繭育一代雜交種為蘇·菊×明·虎，種繭育原種為菁松(中系)、皓月(日系)，均由江蘇省蠶種管理所提供。供試家蠶常規(guī)桑葉育。

供試病原細(xì)菌:黑胸?cái)⊙【?Bacillus sp．，Bs)，由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所提供;蘇云金芽孢桿菌卒倒變種(簡稱卒倒芽孢桿菌，Bacillus thuringiensis var．sotto，Bt)及沙雷鐵氏菌(俗稱靈菌，Serratiamarcescens Bizio，Sm)，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所病理研究室保存。

1．2 方法

1．2．1 鹽酸左氧氟沙星溶液對家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果試驗(yàn) 取黑胸?cái)⊙【?、卒倒芽孢桿菌及沙雷鐵氏菌菌種，分別加適量滅菌水及吐溫－80將菌苔洗下，在混勻器上混勻制成不同濃度(Bs:1．9 ×108、2．3 × 108、1．8 × 108CFU/mL;Bt:3．3 ×108、2．4 × 108、2．7 × 108CFU/mL;Sm:1．5 × 108、2．1 ×108、2．3 ×108CFU/mL)菌懸液，用滅菌接種針蘸取菌液給4齡起蠶穿刺感染。將供試藥物鹽酸左氧氟沙星溶液加水分別配制成質(zhì)量濃度為50、100、200、400 mg/L的藥液。對照藥物鹽酸諾氟沙星溶液按藥品使用說明書加水配制成質(zhì)量濃度為500 mg/L的藥液。用噴霧器將各種藥液分別均勻地噴灑在桑葉上(以桑葉正反面濕潤為宜)，稍晾干后，分別對感染不同病原細(xì)菌的4齡起蠶進(jìn)行添食給藥治療，連續(xù)給藥3 d，其中第1天24 h內(nèi)均添食藥葉，第2、3天僅6 h添食藥葉，其余時(shí)間飼喂普通桑葉。感染病原細(xì)菌的陽性對照組與未感染病原菌的空白對照組飼喂普通桑葉。試驗(yàn)重復(fù)3次，每區(qū)供試蠶為100頭，25℃飼養(yǎng)至5齡起蠶，調(diào)查發(fā)病率，治療效果以治愈率表示:治愈率(%)=1－發(fā)病率。

將供試藥物各劑量組之間及與對照藥物組之間的治愈率用Excel軟件進(jìn)行x2顯著性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析［1］，確定供試藥物的臨床藥效及實(shí)用劑量。

1．2．2 鹽酸左氧氟沙星溶液對家蠶的安全性試驗(yàn)

根據(jù)臨床藥效試驗(yàn)結(jié)果，將鹽酸左氧氟沙星溶液分別加水稀釋成質(zhì)量濃度為200、600、1000 mg/L的藥液，將不同濃度藥液分別均勻噴灑在桑葉上，分區(qū)飼喂4齡起蠶(每區(qū)500頭)24 h，第2、3天各飼喂藥葉6 h，至5齡起蠶再飼喂藥葉24 h，第2、3天各飼喂藥葉6 h，其余時(shí)間飼喂普通桑葉至上蔟結(jié)繭?？瞻讓φ战M一直飼喂普通桑葉。各試驗(yàn)區(qū)3個(gè)重復(fù)，每區(qū)每次給桑量相同。調(diào)查各試驗(yàn)區(qū)家蠶4～5齡經(jīng)過、4齡眠蠶體質(zhì)量、熟蠶體質(zhì)量、蟲蛹生命率、結(jié)繭率、全繭量、繭層量、繭層率、上車?yán)O率、繭絲長、解舒率、纖度、潔凈、發(fā)蛾率、良卵數(shù)、不良卵率及二日孵化率等性狀成績，用Excel軟件t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析各試驗(yàn)區(qū)和空白對照組間各項(xiàng)調(diào)查成績的顯著性差異［2］，確定供試藥物對家蠶的安全性及劑量范圍。

2 結(jié)果

2．1 鹽酸左氧氟沙星溶液對家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果 鹽酸左氧氟沙星溶液對家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果見表1。經(jīng)x2顯著性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析表明，200、100 mg/L鹽酸左氧氟沙星藥液對黑胸?cái)⊙【?Bs)、卒倒芽孢桿菌(Bt)感染引起的家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果顯著，與對照藥物500 mg/L鹽酸諾氟沙星藥液比較，無明顯差異(P＞0．05);400、200 mg/L鹽酸左氧氟沙星藥液對沙雷鐵氏菌(Sm)感染引起的家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果顯著，明顯優(yōu)于對照藥物500 mg/L鹽酸諾氟沙 液(P＜0．05)。

表1 鹽酸左氧氟沙星溶液對家蠶細(xì)菌性 病的防治效果 %

2．2 鹽酸左氧氟沙星溶液對家蠶的安全性評價(jià)

自4齡起蠶添食200、600、1000 mg/L 3種濃度的鹽酸左氧氟沙星藥液后，蠶體生長發(fā)育的各項(xiàng)性狀成績的調(diào)查結(jié)果見表2。經(jīng)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析表明，添食鹽酸左氧氟沙星藥液的各劑量組4、5齡幼蟲的發(fā)育經(jīng)過、蠶體質(zhì)量、蟲蛹生命率等均與空白對照組相比，無明顯差異［P(雙尾概率)＞0．05］，且不存在明顯的劑量－反應(yīng)關(guān)系，即鹽酸左氧氟沙星溶液對試驗(yàn)組家蠶的生長發(fā)育未產(chǎn)生明顯不良影響。

表2 家蠶添食鹽酸左氧氟沙星藥液后的生長發(fā)育成績

表3是自4齡起蠶添食3種濃度鹽酸左氧氟沙星藥液后家蠶的繭質(zhì)成績。經(jīng)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析表明，添食鹽酸左氧氟沙星藥液的各劑量組與空白對照組間的結(jié)繭率、全繭量、繭層量、繭層率等均無明顯差異［P(雙尾概率)＞0．05］，且不存在明顯的劑量－反應(yīng)關(guān)系，即鹽酸左氧氟沙星對試驗(yàn)組家蠶上蔟結(jié)繭以及蠶繭品質(zhì)未產(chǎn)生明顯不良影響。

表4是自4齡起蠶添食3種濃度鹽酸左氧氟沙星藥液后的絲質(zhì)成績。經(jīng)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析表明，添食鹽酸左氧氟沙星藥液的各劑量組與空白對照組之間的上車?yán)O率、繭絲長、解舒率、纖度、潔凈等無明顯差異［P(雙尾概率)＞0．05］，且不存在明顯的劑量－反應(yīng)關(guān)系，即鹽酸左氧氟沙星對試驗(yàn)組家蠶生 產(chǎn)繭絲的絲質(zhì)未產(chǎn)生明顯不良影響。

表3 家蠶添食鹽酸左氧氟沙星藥液后的繭質(zhì)成績

表4 家蠶添食鹽酸左氧氟沙星藥液后的繭絲品質(zhì)成績

表5是自4齡起蠶添食3種濃度鹽酸左氧氟沙星藥液后的卵質(zhì)成績。經(jīng)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析表明，添食鹽酸左氧氟沙星藥液的各劑量組與空白對照組之間的發(fā)蛾率、良卵數(shù)、不良卵率及即時(shí)浸酸種的二日孵化率等無明顯差異［P(雙尾概率)＞0．05］，且不存在明顯的劑量－反應(yīng)關(guān)系，各處理區(qū)的即時(shí)浸酸種催青收蟻飼養(yǎng)1個(gè)齡期，其發(fā)育過程相似。表明鹽酸左氧氟沙星對試驗(yàn)組家蠶所產(chǎn)卵的卵質(zhì)未產(chǎn)生明顯不良影響。

表5 家蠶添食鹽酸左氧氟沙星藥液后的卵種質(zhì)成績

續(xù)表

3 討論

本研究以第4代喹諾酮類抗菌素鹽酸左氧氟沙星為主要原料，研制出一種新的蠶用抗菌藥物——鹽酸左氧氟沙星溶液，并且已完成了臨床試驗(yàn)研究。第4代喹諾酮類抗菌素在保持第3代喹諾酮抗菌譜廣、抗菌活性高、組織滲透性好等特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，抗菌譜進(jìn)一步擴(kuò)大到衣原體、支原體及細(xì)胞內(nèi)致病菌，對革蘭陽性菌和厭氧菌的活性明顯高于第3代喹諾酮抗菌素如諾氟沙星和環(huán)丙沙星等，同時(shí)藥物的藥代動力學(xué)及安全性也有了很大改善。鹽酸左氧氟沙星通過抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶的活性，阻礙細(xì)菌DNA復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡，具有藥效穩(wěn)定、抗菌作用強(qiáng)、抗菌譜廣的特點(diǎn)，對引起家蠶細(xì)菌性敗血病的多種病原細(xì)菌具有抗菌作用［3－6］。

臨床藥效和安全性試驗(yàn)結(jié)果表明，100 mg/L鹽酸左氧氟沙星藥液對黑胸?cái)⊙【?Bs)、卒倒芽孢桿菌(Bt)感染引起的家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果顯著，與500 mg/L鹽酸諾氟沙星藥液比較無明顯差異(P＞0．05)，但鹽酸左氧氟沙星的用藥劑量明顯低于鹽酸諾氟沙星;200 mg/L鹽酸左氧氟沙星藥液對沙雷鐵氏菌(Sm)感染引起的家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果顯著，用藥劑量較低，防治效果均明顯優(yōu)于500 mg/L鹽酸諾氟沙星藥液(P＜0．05)。自 4 齡起蠶開始，分別用 200、600、1000 mg/L的鹽酸左氧氟沙星藥液添食，對家蠶的生長發(fā)育、繭質(zhì)、絲質(zhì)和卵質(zhì)均未產(chǎn)生明顯不良影響［P(雙尾概率)＞0．05］，且不存在明顯的劑量 － 反應(yīng)關(guān)系。初步認(rèn)為鹽酸左氧氟沙星用于防治家蠶細(xì)菌性病害，具有廣譜高效和安全的特點(diǎn)，可以在養(yǎng)蠶生產(chǎn)中做進(jìn)一步應(yīng)用試驗(yàn)。

在蠶業(yè)生產(chǎn)上引起家蠶細(xì)菌性敗血病的病原細(xì)菌種類繁多，如黑胸?cái)⊙【?、沙雷鐵氏菌、青頭敗血病菌及糞鏈球菌，卒倒菌產(chǎn)生的結(jié)晶性毒素被蠶食下會引起蠶中毒而發(fā)生卒倒病，但卒倒菌的菌體或芽孢通過創(chuàng)傷感染引發(fā)的家蠶敗血病在生產(chǎn)中也較常見。在常用的防治家蠶細(xì)菌性敗血病的蠶藥中，大多數(shù)對芽孢桿菌類引起的敗血病防治效果好，而對沙雷鐵氏菌引起的敗血病有實(shí)際使用價(jià)值的藥物較少［7］。家蠶作為特種經(jīng)濟(jì)飼養(yǎng)動物，同時(shí)作為保健食品、醫(yī)用藥材等用途的開發(fā)也越來越受到重視，目前蠶業(yè)生產(chǎn)上用于防治家蠶細(xì)菌性敗血病的蠶用抗菌藥物較少，并且藥物防治效果不全面。本試驗(yàn)研制出的新的蠶用抗菌藥物“鹽酸左氧氟沙星溶液”用于防治養(yǎng)蠶生產(chǎn)中由黑胸?cái)⊙【妥涞寡挎邨U菌以及沙雷鐵氏菌引起的家蠶細(xì)菌性敗血病均有顯著效果，對提高蠶農(nóng)收益、穩(wěn)定蠶業(yè)生產(chǎn)具有重要意義［8］，并且在擴(kuò)大蠶蛹的多用途開發(fā)等家蠶的綜合利用方面都有作用［9－11］。

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