羅筱葵，胡偉銘，楊志彬

胃得康膠囊質量標準研究

*羅筱葵1，胡偉銘2，楊志彬1

（1. 吉安市中心人民醫(yī)院，江西，吉安 343000；2. 吉安市醫(yī)藥總公司，江西，吉安 343000）

主要建立胃得康膠囊質量標準中HPLC測定有效成分延胡索乙素含量的方法和佛手、延胡索乙素、石菖蒲的薄層層析鑒別方法。采用色譜柱為Diamonsil（鉆石）C18柱（5 um，200 × 4．6 mm，）；流動相在查閱文獻的基礎上通過優(yōu)化后確定為：甲醇一0.1%磷酸（三乙胺調pH值=6.0）（62:38）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm。延胡索乙素的線性范圍為12 ~192 μg，相關系數(shù)R2= 0.9999；加樣回收率為99.3% (RSD 3.2)。佛手、延胡索乙素、石菖蒲薄層層析鑒別采用硅膠254薄層板，展開劑通過實驗篩選分別用正已烷一乙酸乙酯（3:1）、正已烷一甲醇一乙酸乙酯一濃氨水（8:2:2:0.1）、石油醚（60~90℃）一乙酸乙酯（3:1）。含量測定方法穩(wěn)定，結果準確，重現(xiàn)性好；薄層層析鑒別方法的色譜中，樣品均能在對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點?？勺鳛楸局苿┑暮繙y定方法和薄層層析鑒別方法。

胃得康膠囊；延胡索乙素；高效液相色譜法；薄層層析鑒別法

胃得康膠囊由胃得康片改劑型而來，由延胡索、佛手、雞骨香、白及、枯礬、石菖蒲六味藥材制成。具有疏肝理氣、和胃止痛的功效。常用于急、慢性胃炎、消化性潰瘍、胃痙攣、胃下垂、胃粘膜脫垂癥、胃神經官能癥等上腹胃脘部疼痛者?！吨袊幍洹?010版對延胡索建立了延胡索乙素含量的測定，且延胡索乙素為胃得康膠囊中的一項主要活性成分。因此，本研究重點對制劑中延胡索乙素的含量測定方法和佛手、延胡索乙素、石菖蒲薄層層析鑒別方法進行了研究。

1 儀器與方法

1.1 佛手的薄層層析鑒別

供試品溶液的制備：取本品5粒，傾出內容物，加乙醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL使溶解。

對照藥材溶液的制備：取佛手對照藥材0.5 g，加乙醇5 mL，同供試品法制成對照藥材溶液。

陰性對照溶液的制備：按處方比例取缺佛手藥材樣品，同樣品制備方法制成缺佛手藥材的陰性浸膏，再取陰性浸膏同供試液方法制成陰性對照溶液。

薄層板：硅膠254薄層板。

展開劑：正已烷一乙酸乙酯（3:1）。

點樣量：三種溶液各2 μL。

檢視：紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.2 延胡索乙素的薄層層析鑒別

供試品溶液的制備：取延胡索對照藥材1 g加甲醇20 mL，加熱回流60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加10%醋酸20 mL使溶解，加濃氨試液調節(jié)pH值至10~11，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解。

對照藥材溶液的制備：取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

陰性對照溶液的制備：按處方比例取缺延胡索乙素藥材樣品，同樣品制備方法制成缺延胡索乙素藥材的陰性浸膏，再取陰性浸膏同供試品溶液方法制成陰性對照溶液。

薄層板：硅膠254薄層板。

展開劑：正已烷一甲醇一乙酸乙酯一濃氨水（8:2:2:0.1）。

點樣量：三種溶液各2 μL。

檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.3 石菖蒲的薄層層析鑒別

供試品溶液的制備：取本品內容物8粒，傾出內容物，加水50 mL，加熱提取30 min，濾過，濾液用石油醚(30~60 ℃）振搖提取2次，每次15 mL，合并石油醚液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解。

對照藥材溶液的制備：取石菖蒲對照品，同供試品溶液制法制成每1 mL含0.5 mg對照品藥材溶液。

陰性對照溶液的制備：按處方比例取缺石菖蒲藥材樣品，同樣品制備方法制成缺石菖蒲藥材的陰性浸膏，再取陰性浸膏同供試品溶液方法制成陰性對照溶液。

薄層板：硅膠254薄層板。

展開劑：石油醚（60~90 ℃）一乙酸乙酯(3:1)。

點樣量：三種溶液各2 μL。

檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.4 高效液相色譜含量測定法

1.4.1 儀器、藥品、與試劑

高效液相色譜儀：日本島津LC-10ATvp系列高效液相色譜儀，HW－2000色譜工作站。延胡索乙素對照品（含量測定用，購于中國藥品生物制品檢定所，批號分別為：0726-200208）。甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。十批胃得康膠囊樣品批號為：040701、040702、040703、050401、050402、050403、050404、050901、050902、050903（由江西保利制藥有限公司提供）。

1.4.2 供試品溶液的制備

取延胡索對照藥材1 g加甲醇20 mL中，加熱回流60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加10%醋酸20 mL使溶解，加濃氨試液調節(jié)pH值至10~11，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解。

1.4.3 測定方法

1.4.3.1色譜條件

Diamonsil（鉆石）C18柱（5 μm，200 × 4.6 mm）；流動相：甲醇一0.1%磷酸（三乙胺調pH值=6.0）(62:38)。流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫室溫。按上述色譜條件下延胡索乙素在18 min左右出峰，供試品溶液和對照品溶液在上述相應位置處有相同色譜峰，陰性無干擾，見（圖1、圖2），結果延胡索乙素在18 min左右出峰，并有較好的分離，理論板數(shù)在3000以上。

圖1 延胡索乙素對照品HPLC色譜

圖2 供試品HPLC色譜

1.4.3.2 檢測波長的確定

精密取延胡索乙素對照品溶液(0.046 mg/mL)，在200~400 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果延胡索乙素在282.0 nm處有最大吸收（見圖3）。文獻與中國藥典多采用280 nm，由于282 nm波長處，干擾少且穩(wěn)定，所以，選擇282 nm為測定波長。

圖3 延胡索乙素對照品紫外光譜

1.4.3.3空白試驗

按本品處方制法制得不含延胡索乙素藥材的空白制劑，用供試品溶液制備方法制得去延胡索乙素的空白溶液，用上述色譜條件測定，比較供試品溶液色譜和延胡索乙素對照品溶液色譜，結果陰性樣品中其他組分對延胡索乙素色譜峰無干擾(見圖4)。

圖4 空白制劑HPLC色譜

1.4.3.4 線性關系考察

精密稱取延胡索乙素對照品6.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以進樣量（μg/m:）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線并進行線性回歸分析，結果見表1。

表1 線性關系考察

回歸方程：y = 37221x

相關系數(shù)：R2= 0.9999

結果表明，延胡索乙素在12 ~192 μg范圍內，峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

1.4.3.5精密度試驗

精密吸取上述線性關系考察中第3號對照品溶液，按上述色譜條件，進樣測定5次，結果見表2。

表2 精密度試驗結果

1.4.3.6供試品提取方法的考察

延胡索乙素為生物堿類化合物，微溶于水，易溶于熱水和冷乙醇，常用5%甲酸的甲醇溶液或堿化后用乙醚、醋酸乙酯等提取。本品堿化后用乙醚提取三次，然后再提取兩次，將后兩次的提取液分別進行HPLC測定，均檢測不出延胡索乙素。因此，采用乙醚四次提取可完全提出延胡索乙素。

1.4.3.7 穩(wěn)定性試驗

取本品(批號040701)，按前述含量測定項下的方法制備和測定供試品于0、1、2、4、8、24 h內峰面積，結果見表3。

表3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗

結果表明，本品供試品溶液在0~24 h內，供試品溶液基本穩(wěn)定。

1.4.3.8 重復性試驗

取本品（批號040701），一式5份，照前述含量測定項下方法制備與測定，結果見表4，延胡索乙素平均含量為0.0987 mg/g，RSD = 1.78%。

表4 重復性試驗結果

1.4.3.9 加樣回收率試驗

取本品適量（批號040701），精密加入延胡索乙素對照品溶液（48 μg/mL），照前述含量測定項下方法制備與測定，結果見表5。

表5 加樣回收率試驗結果

1.4.3.10 樣品測定

取本品10批，按前述含量測定項下方法試驗，結果見表6。

表6 樣品測定結果

根據表6十批試制樣品含量測定結果和原劑型的含量限度，擬定本品每粒含延胡索乙素不得少于0.040 mg。

1.4.3.11延胡索藥材的含量測定

按《中國藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測定方法，測定三批延胡索中延胡索乙素含量，結果見表7。

表7 藥材的含量測定結果

2010年版藥典規(guī)定延胡索中含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于0.050%。

1.5　檢查

本品為膠囊劑，根據中國藥典2010年版一部附錄IL膠囊劑項下的規(guī)定，按通則規(guī)定的方法檢測其水分、裝量差異、崩解時限、微生物限度檢查等常規(guī)檢查項，結果均符合規(guī)定。同時，依據中國藥典2010年版一部附錄Ⅸ E重金屬檢查法第二法和附錄Ⅸ F砷鹽檢查法第一法，對本品進行了重金屬和砷鹽的測定，結果重金屬低于10 ppm，砷鹽低于2 ppm。

1.6 穩(wěn)定性試驗

參照《中藥新藥質量穩(wěn)定性研究的技術要求》和《中國藥典》2010年版二部附錄XⅨC藥物穩(wěn)定性試驗指導原則，對三批上市包裝的樣品進行了加速穩(wěn)定性試驗[溫度(40 ± 2)℃，相對濕度(75 ± 5)%，6個月]和長期穩(wěn)定性試驗（室溫條件下，12個月），結果各項考察指標與0月比較，其質量沒有明顯變化，表明本品質量穩(wěn)定，有效期可暫定二年。

2 結果

2.1 佛手的薄層鑒別結果

佛手供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點（見圖5）。

1: 對照藥材 2: 陰性對照 3: 供試品

2.2 延胡索乙素的薄層鑒別結果

延胡索乙素供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點（見圖6）。

1: 對照品 2: 陰性對照 3: 供試品

2.3 石菖蒲的薄層鑒別結果

石菖蒲供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點（見圖7）。

1: 對照藥材 2: 陰性對照 3: 供試品

2.4 延胡索乙素的含量

延胡索乙素含量測定的線性范圍為12 ~192 μg，相關系數(shù)R2 = 0.9999；加樣回收率為99.3% (RSD 3.2)。結果見圖8。

圖8 延胡素乙素曲線

3 討論

3.1 測定方法的選擇

復方制劑中延胡索乙素含量測定方法，文獻報道的主要有高效液相色譜法、分光光度法、薄層掃描法等。分光光度法、薄層掃描法前處理復雜，操作要求高，操作比較復雜，檢測周期長、檢測誤差大，《中國藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測定項下，建立了延胡索乙素含量測定方法且根據我們的實驗發(fā)現(xiàn)，本實驗建立的延胡索乙素含量測定方法操作簡便快速，測定結果準確可靠，有效成分分離較好，其他成分無干擾，可作為該制劑的含量控制指標，能較好地控制本品的質量。

3.2 流動相的選擇

選擇《中國藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測定中流動相[1]及文獻[2-5]報道的流動相進行試驗，最終確定甲醇一0.1%磷酸(三乙胺調pH值＝6.0) (62:38)為流動相，在此流動相條件下，樣品中的延胡索乙素峰形好，與雜質峰分離度較好，保留時間適合。

3.3 流動相pＨ的選擇

為使延胡索乙素達到較好的分離效果，對不同的pＨ值如5.5、5.8、6.0、6.3、6.5等進行比較，最后通過實驗驗證確定pＨ值6.0峰形好，出峰時間較為理想，與雜質峰分離度較好，保留時間適合。

3.4 檢測波長的選擇

用甲醇溶解適量的延胡索乙素對照品作為供試液，用紫外分光光度法進行200~400 nm范圍掃描，在282 nm處有最大吸收峰，干擾少且穩(wěn)定，與《中國藥典》2010年版[1]記載其最大吸收峰在280 nm處相近，所以選擇282nm為測定波長。

3.5 佛手、延胡索乙素與石菖蒲的鑒別

樣品中佛手、延胡索乙素、石菖蒲的鑒別，經空白制劑和三批樣品的試驗，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置顯相同顏色的斑點；但在缺佛手、延胡索乙素、石菖蒲藥材的陰性樣品色譜中，在與供試品、對照藥材色譜相應的位置上，沒有顯相同顏色的斑點，故用本方法鑒別樣品中的佛手、延胡索乙素、石菖蒲有很好的專屬性和重現(xiàn)性，陰性無干擾。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:130.

[2] 梁國華,吳福彬. HPLC測定克痹骨泰膠囊中延胡索乙素含量[J].中國藥師,2012,15(3):427-428.

[3] 馮益明.HPLC測定復方棗仁膠囊中延胡索乙素含量[J].中國藥品標準,2010,11(3):214-216.

[4] 張其,王守英.HPLC測定舒筋消咽丸中延胡索乙素含量[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐,2008,22(1):44-45.

[5] 劉超英,劉丹, 韓建偉. HPLC測定創(chuàng)靈凝膠中延胡索乙素含量[J].藥物分析雜志,2009,29(8): 330-332.

STUDY OF QUALITY STANDARD FOR WEIDEKANG CAPSULE

*LUO Xiao-kui1，HU Wei-ming2，YANG Zhi-bin1

（1. The Central People's Hospital of Ji'an, Ji’an, Jiangxi 343000, China;2. Ji’an Pharmaceutical Companies, Ji’an, Jiangxi 343000, China）

: Toestablish HPLC method for measuring the content of the effective component-tetra hydropalmatine and TLC method for identifyingvar. sarcodactylis, tetrahydropalmatine andin Weidekang capsule.: The chromatographic column is Diamonsil C18(5 μm, 200 × 4.6 mm), mobile phase is optimized after reviewing references as 62 to 38 for methanol-0.1% phosphate (adjusted PH=6 by triethylamine), flow rate is 1.0 mL/min, detection wavelength is 254 nm.: The linear range of tetrahydropalmatine is 12-192ug, correlation coefficient R2is 0.9999, recovery rate is 99.3% (RSD 3.2). The developing solvents are N-hexane-ethyl acetate (3:1), N-hexane-methanol-ethyl acetate-concentrated aqueous ammonia (8:2:2:0.1), petroleum ether (60～90 ℃)-Ethyl acetate (3:1) forvar., tetrahydropalmatine and’s TLC identification in which silica gel 254 thin layer plates are used respectively.: The method is stable, accurate and reproducible well. The samples can display the spots with the same color as the reference standard chromatography in TLC identification. In a word, the HPLC can be used as the content measuring method and identification method for this capsule.

weidekang capsule; tetrahydropalmatine; HPLC; TLC

R921.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2013.04.019

1674-8085(2013)04-0084-06

2013-03-03；

2013-06-27

*羅筱葵(1955-)，男，江西吉安人，主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學研究(E-mail:luoxiaok000115@tom.com);

胡偉銘(1962-)，男，江西吉水人，副主任中藥師，主要從事生物制藥工程研究(E-mail:Huweimin@126.com);

楊志彬(1979-)，男，江西吉安人，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學研究(E-mail:Yangzw1979@163.com).