董建華 李克軍 姜文禮 王元宇

(1. 山東省日照市莒縣人民醫(yī)院 276500 ;2. 浙江省人民醫(yī)院 310014 )

根據(jù)2002 年全球腫瘤發(fā)病率報告，胃癌是最常見的腫瘤之一，僅次于肺癌，居第二位［1］。盡管外科手術(shù)和放化療技術(shù)不斷發(fā)展，我國胃癌的死亡率居于各種腫瘤之首，5 年生存率仍低于40%，大多數(shù)患者確診時已經(jīng)是III 或IV 期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達50% ～75%，轉(zhuǎn)移是導致胃癌患者死亡的主要原因［2］。MMPs(基質(zhì)金屬蛋白酶)參與了許多生理和病理過程，比如基質(zhì)降解、組織重塑、炎癥反應以及腫瘤轉(zhuǎn)移［3］。MMP － 11 屬于基質(zhì)溶解素亞族，MMP － 11 不能降低這些經(jīng)典的MMP 基質(zhì)，相反，它卻能夠催化絲氨酸蛋白酶抑制因子、α1 抗胰蛋白酶、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白質(zhì)1 等的降解［4］。MMP － 11 最先在乳腺癌的間質(zhì)細胞中被發(fā)現(xiàn)的［5］。研究表明在不同的惡性腫瘤的進展過程中MMP － 11 起重要作用，比如肺癌、頭頸癌、乳腺癌［6－10］發(fā)現(xiàn)MMP－ 11 在結(jié)腸癌的表達與腫瘤的浸潤深度、遠處轉(zhuǎn)移和分化程度相關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。MMP － 11 在結(jié)腸、泌尿及卵巢癌中也高表達。MMP － 11 有望成為一個新的預后標記物。

本研究擬檢測胃癌組織中的MMP － 11 的表達及其與臨床病理參數(shù)和預后的關(guān)系，明確MMP － 11 作為胃癌預后標記物的臨床應用價值。

資料與方法

1. 臨床資料:收集浙江省人民醫(yī)院1998 年1 月～2004 年12月期間胃癌患者436 例，所有病例均經(jīng)病理證實，術(shù)前未經(jīng)任何治療。其中男311 例，女125 例，男女比例為2. 49:1;年齡17 ～91 歲，中位年齡為60 歲;隨訪起止日期為1998 年1 月～2008 年12 月，所有病例隨訪5 年以上，生存期的計算從手術(shù)日期到隨訪截止日期，或由于復發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡的日期為止。腫瘤位于賁門55 例，胃體163 例，胃竇218 例;腫瘤小于5 厘米256 例，大于5厘米180 例;按Lauren 分型:腸型胃癌223 例，彌漫型胃癌213例;按WHO 2002 年胃癌分類標準分為乳頭狀腺癌16 例，管狀腺癌326 例，粘液腺癌29 例，印戒細胞癌65 例;高分化腺癌13 例、中分化腺癌128 例，低分化腺癌293 例、未分化癌2 例;TNM 分期Ⅰ期胃癌90 例，Ⅱ期胃癌104 例，Ⅲ期胃癌173 例，Ⅳ期胃癌69例;胃癌淋巴分期PN0 期166 例，PN1 期136 例，PN2 期99 例，PN3 期35 例;有遠處轉(zhuǎn)移61 例，無遠處轉(zhuǎn)移375 例。并取同期距癌邊緣5 厘米以上的臨近無增生或不典型增生的非腫瘤胃粘膜92 例作對照。

2. 試劑:兔抗人MMP － 11 抗體購于ABCAM 公司，廣譜二抗試劑盒及DAB 顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

3. 組織芯片制備和免疫組織化學染色:按文獻進行［11］。

1．1 對象 病例組：以北京市2011－2012年出生的，在三級以上醫(yī)院確診為單純小型室間隔缺損且僅需醫(yī)學觀察的患病嬰兒31例為研究對象，除外其他先天畸形、出生窒息、病理性黃疸及其它嚴重軀體及精神疾病。對照組：以1∶1匹配方式，采集與病例組相同出生孕周（差值＜1周）、同性別、相近出生體重（差值＜200g）、相近出生時間（差值＜2周）及相同居住地（同一地段保?。┑恼和?1名作為正常對照組研究對象，且無先天畸形、出生窒息、病理性黃疸及其它嚴重軀體及精神疾病。

（2）根據(jù)最可幾動力學模型函數(shù)判定方法，求得其動力學三因子為：E = 129.38 kJ/mol，n = 2/5，A = 806 129 s-1，反應動力學模型函數(shù)為：f（α）=

5. 統(tǒng)計學處理:采用SPSS16. 0 軟件進行處理，計量資料采用兩樣本t 檢驗，計數(shù)資料采用X2和Fisher 精確概率檢驗，對生存數(shù)據(jù)采用Kaplan － Meier 分析并繪制生存曲線，應用Log － rank檢驗差異性，用Cox 風險模型進行獨立預后因素分析，P＜0. 05為具有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

2. MMP － 11 蛋白表達與胃癌病理學指標間的關(guān)系:MMP －11 蛋白的表達強度與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、浸潤深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及TNM 分期有關(guān)(P＜0. 05)，而 與 患 者 性 別、分 化 程 度、組 織 學 類 型 無 關(guān)(P＞0. 05)。高齡患者、腫瘤大于5 cm、T3～T4期、有脈管侵犯、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有肝臟和腹膜轉(zhuǎn)移，腫瘤靠近賁門、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織MMP － 11 蛋白表達明顯強于低齡患者、腫瘤小于5 cm、T1～T2期、無脈管侵犯、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無肝臟和腹膜轉(zhuǎn)移、腫瘤靠近幽門、Ⅰ期和Ⅱ期的胃癌組織表達(表1)。

4. 結(jié)果判定:MMP － 11 以細胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，根據(jù)染色程度和染色細胞百分率進行評定和分析［12－13］:基本不著色者為0 分，著色淡者為1 分，著色適中者為2 分，著色深者為3 分;著色細胞占計數(shù)細胞的百分率≤5% 記0 分，6% ～25% 記1分，26% ～50% 記2 分;≥51% 記3 分。將每張切片的染色程度與染色細胞百分率得分相乘，其乘積為最后得分。0 ～1 分為陰性(－)，2 ～3 分為弱陽性(+ )，4 ～6 分為中等陽性(+ + )，＞6分為強陽性(+ + +)。在統(tǒng)計分析中，將表達(－ / + )劃為低表達組，(+ + ～+ + +)劃為高表達組。

潰決洪水（泥石流）的流動特性包括洪峰流量、潰決泥石流量、行進距離和淹沒面積等特性。其中，洪峰流量是最重要的一個量值；潰決泥石流體積將影響行進距離和淹沒面積，也較重要。冰磧湖潰決洪水（泥石流）的模擬主要從湖水量計算、潰決洪峰估算、泥石流體積估算、潰決洪水（泥石流）最遠距離估算、淹沒面積估算等方面進行。

圖1 MMP － 11 在非腫瘤胃粘膜及胃癌組織中的不同表達強度，SP法× 100。A 為非腫瘤胃粘膜組織表達(－ )，B 為高分化腺癌表達(+ ++ )，C 為中分化腺癌表達(+ + + )，D 為中分化腺癌表達(+ + + )。

1. MMP － 11 在正常胃黏膜組織和胃癌組織中的表達(圖1):在92 例非腫瘤胃黏膜組織中，76(82. 6%)例MMP － 11 蛋白為陽性表達，均為低表達。在436 例胃癌組織中，MMP － 11 蛋白陽性表達384(88. 1%)例，高表達207(47. 5%)例，主要在細胞漿表達。

表1 MMP － 11 的表達與臨床病理指標間的關(guān)系

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 130. 382 0. 0001無145(87. 3%) 21(12. 7%)有84(31. 1%) 186(68. 9%)遠處轉(zhuǎn)移 64. 455 0. 0001無226(60. 3%) 149(39. 7%)有3(4. 9%) 58(95. 1%)

在MMPs 家族中，MMP － 11 是一種不同尋常的成員，因為它的成熟形式是不能夠水解細胞外基質(zhì)中的主要成分，然而，包含催化區(qū)的片段具有酶的活性［14］。MMP － 11 的生物功能尚不完全清楚。研究表明MMP － 11 以旁分泌的形式分泌，能促進惡性上皮細胞的歸巢，對原發(fā)性腫瘤和轉(zhuǎn)移灶而言，這是一個關(guān)鍵過程。許多研究發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤組織MMP － 11 高表達，MMP － 11 高表達可能是腫瘤的早期表現(xiàn)，并可能促進腫瘤的進展［15］。高表達MMP － 11 的腫瘤惡性程度高、預后差［16］。MMP － 11 可能在人類腫瘤的形成和進展過程中起重要作用［17］。

討 論

3. MMP － 11 表達與患者預后的關(guān)系:在I、II 和III 期，MMP－ 11 高表達胃癌患者5 年生存率顯著低于MMP － 11 低表達者。I 期，MMP － 11 低表達胃癌患者5 年生存率是89. 2%，高表達組為42. 9%(P = 0. 0001);II 期，MMP － 11 低表達患者5 年生存率是66. 3%，高表達者為40. 0%(P = 0. 0001);III 期，MMP － 11 低表達患者5 年生存率是29. 6%，高表達者為15. 1% (P = 0.0001);MMP － 11 在IV 期患者的表達與患者生存率無關(guān)，在IV期，MMP － 11 低表達患者5 年生存率是0%，高表達者為3. 0%(P = 0. 726)。獨立預后因素分析表明ADAM10 表達(＜0. 001)、浸潤深度(＜0. 001)、淋巴結(jié)(＜0. 001)、遠處轉(zhuǎn)移(＜0. 001)和TNM 分期(＜0. 001)是胃癌的預后獨立因素之一。

新中國成立以來，中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村進入了嶄新的發(fā)展階段。在這一時期，中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村先后經(jīng)歷了土地改革、合作化運動到人民公社，鄉(xiāng)村社會進行了長達30年的曲折探索。這一時期的主要任務在于實現(xiàn)耕者有其田的目標，繼而開展農(nóng)業(yè)社會主義改造，以防止農(nóng)業(yè)發(fā)展走向資本主義小農(nóng)化。其結(jié)果是，1958年后逐漸形成了人民公社制度，這一制度一方面促進了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展，另一方面與當時農(nóng)業(yè)生產(chǎn)力不相適應，最后不得不退出歷史舞臺。

本研究表明MMP － 11 在胃癌組織高表達，主要在細胞漿表達，MMP － 11 蛋白的表達強度與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、浸潤深度、脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移及TNM 分期有關(guān);我們的研究結(jié)果與文獻報道結(jié)果相一致。本研究還發(fā)現(xiàn)MMP － 11 的表達水平與胃癌患者的預后顯著相關(guān)，獨立預后因素分析表明MMP － 11 表達、浸潤深度、淋巴結(jié)、遠處轉(zhuǎn)移和TNM分期是胃癌的預后獨立因素之一。胃癌患者血漿MMP － 11 高表達，MMP － 11 表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P = 0. 006)，多變量分析表明MMP － 11 高表達是進展期胃癌獨立預后因素［18］。

為了避免由于腫瘤TNM 分期影響MMP － 11 的表達對預后的判斷價值，我們按照TNM 分期分別分析MMP － 11 表達與胃癌患者預后的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在I、II 和III 期，MMP － 11 高表達胃癌患者5 年生存率顯著低于MMP － 11 低表達者，MMP － 11 在IV 期患者的表達與患者生存率無關(guān)。未見按TNM 分期評價MMP － 11 表達與胃癌患者預后的關(guān)系的報道。

本研究表明MMP － 11 在胃癌形成、進展和浸潤轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，并與胃癌患者的預后密切相關(guān)，是胃癌患者的獨立的預后因素之一，本研究將為MMP － 11 作為胃癌診斷和預后判斷的分子標記物提供了理論依據(jù)。

1 Inoue M，Tsugane S. Epidemiology of gastric cancer in Japan［J］. Postgrad Med J. 2005;81(957):419 － 424.

2 詹文華，韓方海. 我國胃癌外科治療的現(xiàn)狀和思考［J］. 實用腫瘤雜志，2008，23(2):91 － 93.

3 Shim KN，Jung SA，Joo YH，et al. Clinical significance of tissue levels of matrix metalloprotei － nases and tissue inhibitors of metalloproteinases in gastric cancer［J］. J Gastroenterol. 2007;42(2):120 － 128.

4 Deng H，Guo RF，Li WM，et al. Matrix metalloproteinase 11 depletion inhibits cell proliferation in gastric cancer cells［J］. Biochem Biophys Res Commun. 2005;326(2):274 － 281.

5 Basset P，Bellocq JP，Wolf C，et al. A novel metalloproteinase gene specifically expressed in stromal cells of breast carcinomas［J］. Nature.1990;348(6303):699 － 704.

6 Kren L，Goncharuk VN，Krenová Z，et al. Expression of matrix metalloproteinases 3，10 and 11 (stromelysins 1，2 and 3)and matrix metalloproteinase 7 (matrilysin)by cancer cells in non － small cell lung neoplasms. Clinicopathologic studies ［J］. Cesk Patol. 2006;42 (1 ):16－ 19.

7 Thorns V，Walter GF，Thorns C. Expression of MMP － 2，MMP － 7，MMP － 9，MMP － 10 and MMP － 11 in human astrocytic and oligodendroglial gliomas［J］. Anticancer Res. 2003;23(5A):3937 － 3944.

8 Wasen IUs VM，Hemmer S，Kettunen E，et al. Hepatocyte growth factor receptor，matrix metalloproteinase － 11，tissue inhibitor of metalloproteinase － 1，and fibronectin are up － regulated in papillary thyroid carcinoma:a cDNA and tissue microarray study［J］. Clin Cancer Res. 2003;9(1):68 － 75.

9 Mellick AS，Blackmore D，Weinstein SR，et al. An assessment of MMP and TIMP gene expression in cell lines and stroma － tumour differences in microdissected breast cancer biopsies［J］. Tumour Biol. 2003;24(5):258 － 270.

10 Pedersen G，Saermark T，Kirkegaard T，et al. Spontaneous and cytokine induced expression and activity of matrix metalloproteinases in human colonic epithel IUm［J］. Clin Exp Immunol. 2009;155(2):257 －265.

11 Zhao ZS，Wang YY，Chu YQ，et al. SPARC is associated with gastric cancer progression and poor survival of patients［J］. Clin Cancer Res.2010;16(1):260 － 268.

12 Geisler SA，Olshan AF，Weissler MC，et al. p16 and p53 protein expression as prognostic indicators of survival and disease recurrence from head and neck cancer［J］. Clin Cancer Res. 2002;8 (11 ):3445－ 3453.

13 Fukuoka J，F(xiàn)ujii T，Shih JH，et al. Chromatin remodeling factors and BRM/BRG1 expression as prognostic indicators in non － small cell lung cancer［J］. Clin Cancer Res. 2004;10(13):4314 － 4324.

14 Perigny M，Bairati I，Harvey I，et al. Role of immunohistochemical overexpression of matrix metalloproteinases MMP － 2 and MMP － 11 in the prognosis of death by ovarian cancer［J］. Am J Clin Pathol. 2008;129(2):226 － 231.

15 Lee HS，Lee HK，Kim HS，et al. Tumour suppressor gene expression correlates with gastric cancer prognosis［J］. J Pathol. 2003;200(1):39－ 46.

16 Ito Y，Yoshida H，Kakudo K，et al. Inverse relationships between the expression of MMP － 7 and MMP － 11 and predictors of poor prognosis of papillary thyroid carcinoma［J］. Pathology. 2006;38(5):421 － 425.

17 Noel A，Boulay A，Kebers F，et al. Demonstration in vivo that stromelysin － 3 functions through its proteolytic activity［J］. Oncogene. 2000;19(12):1605 － 1612.

18 Yan D，Dai H，L IU JW. Serum levels of MMP － 11 correlate with clinical outcome in Chinese patients with advanced gastric adenocarcinoma［J］. BMC Cancer. 2011;11:151.