吳璐 劉曉慧

環(huán)孢素A(CsA)是臨床中常用的免疫抑制劑，多用于器官移植術(shù)后抗排異及自身免疫性疾病[1]。CsA在血液中濃度的高低，直接影響到疾病的治療。濃度過(guò)低，不能對(duì)免疫系統(tǒng)急性抑制，起不到充分的治療作用;濃度過(guò)高，其毒副作用又會(huì)顯現(xiàn)，對(duì)肝腎功能、神經(jīng)等造成損害。因此，通過(guò)檢測(cè)其在血液中的濃度;調(diào)整藥物口服的劑量;維持血藥濃度在正常的治療范圍內(nèi)就成為了治療的重要組成部分。當(dāng)前高效液相色譜法(HPLC)和熒光偏振免疫法(FPIA)作為CsA血藥濃度檢測(cè)最常用的檢測(cè)方法[2]。本研究觀察了FPIA法測(cè)定CsA血藥濃度的可行性和CsA監(jiān)測(cè)質(zhì)量控制的必要性。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 臨床采集20例口服環(huán)孢素A的腎病綜合征患者的靜脈血液，所有患者服藥時(shí)間均大于1年。年齡36～68歲，平均年齡44.1歲。

1.2 研究方法 所有患者均于服藥后12 h進(jìn)行靜脈取血，每份血液樣本采集量均大于2 ml。血液樣本放于6℃的冰箱中保存。

1.3 樣本測(cè)定 將采有血液樣本的試管倒置用力晃動(dòng)5～10 s，以便樣本混合均勻。吸取已經(jīng)混合均勻血液樣本150 μl，并放置于離心管內(nèi)，加入細(xì)胞溶解劑50 μl，使用振蕩器振蕩2 min后加入30 μl的蛋白沉淀劑，繼續(xù)振蕩2 min，之后放置在高速離心機(jī)內(nèi)，進(jìn)行5 min共60000轉(zhuǎn)的離心。待離心結(jié)束，將樣本的上層清液倒入樣本杯中，以防揮發(fā)，樣本杯中的樣本容積最少150ul，使用熒光偏振免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別吸取CsA各濃度(100，250，500，1000，1500ng/ml)中的標(biāo)準(zhǔn)樣本，操作同1.3中所述，取得上層清液倒入樣本杯中，放入熒光偏振免疫分析儀內(nèi)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其合格的判定標(biāo)準(zhǔn):①均方差根≤1。②各標(biāo)準(zhǔn)濃度點(diǎn)極差在-2.0至+2.0范圍內(nèi)。只有同時(shí)滿足上述兩個(gè)條件的標(biāo)準(zhǔn)曲線才可用作血液樣品的檢測(cè)。如果有結(jié)果不在要求范圍內(nèi)的，則需要重新制訂標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 每次檢測(cè)L、M、H質(zhì)控樣本各一份，根據(jù)檢測(cè)數(shù)據(jù)算出平均值以及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，分析CsA血藥濃度檢測(cè)的日內(nèi)誤差。同樣地，每次取L、M、H質(zhì)控樣本各一份，檢測(cè)樣本濃度。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，算出平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和RSD，分析CsA血藥濃度測(cè)定的日間誤差。

1.6 回收率試驗(yàn) 分別用精密度試驗(yàn)中的日間差、日內(nèi)差測(cè)得的數(shù)值除以質(zhì)控樣本標(biāo)示濃度乘100%，即可得到日間、日內(nèi)回收率。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)精密度實(shí)驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄，按精密度試驗(yàn)日內(nèi)差測(cè)定方法測(cè)得，RSD 測(cè)得為 3.6%(L)、3.0%(M)、2.9%(H)，結(jié)果均 ＜3%;日間差 RSD測(cè)得為5.6%(L)、3.4%(M)、3.0(H)，結(jié)果均＜6%符合RSD＜15%的標(biāo)準(zhǔn)。全血中CsA三個(gè)濃度L、M、H的質(zhì)控樣本測(cè)定日內(nèi)及日間回收率均接近100%。具體見(jiàn)表1。

2.2 血藥濃度監(jiān)測(cè)結(jié)果 取患者血樣1 ml，經(jīng)4500轉(zhuǎn)離心機(jī)離5 min后取上層血清75微升進(jìn)樣測(cè)定，數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表1 日內(nèi)差、日間差回收率的測(cè)定(n=5)

表2 熒光偏振免疫法監(jiān)測(cè)環(huán)孢素A全血濃度(ug/L)

3 討論

3.1 非人為因素影響CsA血藥濃度檢測(cè) 主要分為機(jī)體因素、藥物因素三個(gè)方面。曾有報(bào)告指出，進(jìn)行不同移植手術(shù)的患者，對(duì)CsA的利用度有很大的差異。藥物方面，藥物的劑型、服藥方法等均對(duì)CsA的利用度有影響。有一些藥物，是能夠增加CsA血藥的濃度。

3.2 質(zhì)量控制下的CsA血藥濃度監(jiān)測(cè) CsA本身生物利用度和藥動(dòng)學(xué)個(gè)體較差異大，并易受多種因素影響。本研究通過(guò)對(duì)質(zhì)控樣本日內(nèi)差、日間差回收率的測(cè)定，強(qiáng)調(diào)質(zhì)量管理的重要性。三種質(zhì)量濃度都存在連續(xù)多點(diǎn)落在平均值一側(cè)的情況，提示可能存在一定程度的系統(tǒng)誤差，可能與更換新試劑盒或制作新標(biāo)準(zhǔn)曲線有關(guān)。當(dāng)前，對(duì)于治療藥物監(jiān)測(cè)的質(zhì)控研究尚不完善，沒(méi)有統(tǒng)一的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。因此，在實(shí)際的藥物濃度監(jiān)測(cè)中，需要對(duì)各個(gè)可能影響結(jié)果的環(huán)境進(jìn)行改正。如:采血的時(shí)間、樣本的保存溫度、不同廠家的試劑、檢測(cè)人員是否進(jìn)行了規(guī)范化的操等。因此，有效治療藥物監(jiān)測(cè)的質(zhì)量控制體系，不但能夠減少質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)，也為臨床指導(dǎo)用藥提供可靠的依據(jù)。

[1]陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué).第15版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:698-699.

[2]羅軍玉，尤厚成.環(huán)抱菌素血藥濃度分析方法進(jìn)展.中國(guó)藥業(yè)，2003，13(12):74-75.