郝 攀，李文生，劉 群

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)部國(guó)家動(dòng)物原蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)室，北京 海淀100193）

新孢子蟲(chóng)是由美國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)家Dubey在1988年命名為新屬新種的專(zhuān)性寄生原蟲(chóng)，隸屬于頂復(fù)門(mén)，能感染多種動(dòng)物，主要危害是造成牛的流產(chǎn)、死胎等繁殖障礙，給養(yǎng)牛業(yè)尤其是奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失；其次是導(dǎo)致犬的神經(jīng)肌肉功能障礙。

國(guó)內(nèi)對(duì)新孢子蟲(chóng)的研究報(bào)道始于2003年［1］，流行病學(xué)調(diào)查顯示，國(guó)內(nèi)大部分省區(qū)的牛場(chǎng)廣泛存在新孢子蟲(chóng)感染，部分奶牛場(chǎng)的牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率達(dá)50%以上［2－3］。2007年，張維等在流產(chǎn)胎牛的腦組織中觀察、鑒定了新孢子蟲(chóng)包囊，首次確認(rèn)新孢子蟲(chóng)在中國(guó)牛群中的存在［4］。雖然新孢子蟲(chóng)感染是導(dǎo)致孕牛流產(chǎn)的主要原因之一已成為寄生蟲(chóng)學(xué)研究者的共識(shí)，但我國(guó)對(duì)于牛新孢子蟲(chóng)的感染、流行及發(fā)病的研究還相對(duì)較少。

2012年6月，本實(shí)驗(yàn)室接收南京某牛場(chǎng)送來(lái)奶牛血樣16份。送檢原因是該牛場(chǎng)去年和今年連續(xù)發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)，排除了其他流產(chǎn)病因。所采集的血樣均來(lái)自一年內(nèi)發(fā)生過(guò)流產(chǎn)的奶牛。本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用SRS2－ELISA（自建）檢測(cè)血清新孢子蟲(chóng)抗體，結(jié)果顯示，其中8份為新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性，陽(yáng)性率達(dá)50%。鑒于該場(chǎng)流產(chǎn)的發(fā)生和血樣新孢子蟲(chóng)抗體的高陽(yáng)性率，懷疑該牛場(chǎng)的暴發(fā)性流產(chǎn)系由新孢子蟲(chóng)感染所致，遂與牛場(chǎng)負(fù)責(zé)人聯(lián)系，由本實(shí)驗(yàn)室人員到現(xiàn)場(chǎng)考察牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理情況，采集更多血樣以便對(duì)該牛場(chǎng)流產(chǎn)發(fā)生原因進(jìn)行全面分析。

1 調(diào)查項(xiàng)目和方法

1.1 牛場(chǎng)及牛群的建立時(shí)間、牛場(chǎng)規(guī)模、飼養(yǎng)管理情況、周?chē)h(huán)境、場(chǎng)內(nèi)養(yǎng)犬情況等。牛群購(gòu)進(jìn)時(shí)間及來(lái)源、年齡、流產(chǎn)發(fā)生情況、其他疫病的免疫預(yù)防及發(fā)病等。

1.2 全群采集血樣。

1.3 應(yīng)間接ELISA試劑盒（自建）檢測(cè)血清新孢子蟲(chóng)抗體。該試劑盒以表面重組蛋白SRS2作為包被抗原，經(jīng)驗(yàn)證與IFAT檢測(cè)符合率為91.7%。

2 結(jié)果

2.1 牛場(chǎng) 該牛場(chǎng)位于南京市南郊，為個(gè)體所有的小型奶牛養(yǎng)殖小區(qū)，建于2005年，建立之初僅一間牛舍，奶牛200余頭。從2008開(kāi)始逐步擴(kuò)建，其他養(yǎng)殖戶加入。2011年共有奶牛260余頭，由8個(gè)養(yǎng)殖戶所有，牛舍4間，共用1個(gè)擠奶車(chē)間和1個(gè)池塘。牛場(chǎng)與外界沒(méi)有嚴(yán)格隔離，人和其他動(dòng)物可自由出入。主要喂食青草，偶爾補(bǔ)充精飼料。2012年2月之前飲水來(lái)自牛場(chǎng)內(nèi)的池塘，水源未做任何過(guò)濾及消毒處理，之后改用城市自來(lái)水。牛場(chǎng)自建立之初即養(yǎng)犬，到2011年達(dá)到8只，偶有野犬進(jìn)入。犬只能夠自由出入牛的圈舍，所以有流產(chǎn)發(fā)生或產(chǎn)犢后，吃食死胎及胎盤(pán)的機(jī)會(huì)很多。2012年初撲殺全部8只犬，開(kāi)始飼養(yǎng)2只幼犬。

2.2 牛群 建場(chǎng)之初僅有20余頭奶牛，2008年達(dá)160余頭，2011年至2012年又有3個(gè)養(yǎng)殖戶的100頭奶牛加入，達(dá)260余頭，分別由8戶所有。養(yǎng)殖戶各自采購(gòu)牛只，主要來(lái)源于附近其他牛場(chǎng)，購(gòu)進(jìn)時(shí)未做任何疾病檢測(cè)。牛只年齡為1至8歲，常規(guī)免疫布魯菌病和口蹄疫疫苗，每年進(jìn)行2次結(jié)核病檢測(cè)。據(jù)牛場(chǎng)負(fù)責(zé)人介紹，各戶均有奶牛流產(chǎn)發(fā)生，其中兩戶較為嚴(yán)重，共有牛60頭左右，每戶各有自由放養(yǎng)犬2只，犬窩位于牛舍內(nèi)。2011年下半年發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)，其中一戶的20余頭妊娠奶牛幾乎全部流產(chǎn)。個(gè)別母牛發(fā)生早產(chǎn)或產(chǎn)出虛弱、癱瘓或不能站立的犢牛，出生后死亡。2012年也有流產(chǎn)發(fā)生，但總體流產(chǎn)率較前一年低。

2.3 血樣采集及檢測(cè) 由于流產(chǎn)的發(fā)生，大部分牛只已被處理或賣(mài)出，所以只采集到49份血樣，全部來(lái)自該養(yǎng)殖小區(qū)存欄量最多的一戶，且該戶奶牛流產(chǎn)近兩年亦有流產(chǎn)發(fā)生，但未發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)，屬于流產(chǎn)較輕的養(yǎng)殖戶。經(jīng)ELISA檢測(cè)，49份血清中檢出新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性6份，陽(yáng)性率為12.2%（表1）。

表1 該小區(qū)某戶奶牛流產(chǎn)情況及新孢子蟲(chóng)抗體檢測(cè)

3 分析與討論

本次調(diào)研期望在實(shí)地考察的基礎(chǔ)上，對(duì)該奶牛養(yǎng)殖小區(qū)進(jìn)行全群采樣，以便綜合分析該場(chǎng)流產(chǎn)的發(fā)生與新孢子蟲(chóng)感染之間的相關(guān)性。遺憾的是，由于該小區(qū)牛分屬8戶所有，流產(chǎn)率高的養(yǎng)殖戶已經(jīng)全群淘汰，個(gè)別養(yǎng)殖戶則因流產(chǎn)發(fā)生不嚴(yán)重而不愿檢測(cè)，最終只采集到1戶養(yǎng)殖有49頭牛的全群血樣。

在現(xiàn)場(chǎng)詢問(wèn)了解到，前期送檢的16份血清來(lái)自4個(gè)養(yǎng)殖戶，一年內(nèi)均發(fā)生過(guò)流產(chǎn)，流產(chǎn)最嚴(yán)重的兩戶各3份，另兩戶各5份。將檢測(cè)結(jié)果與來(lái)源核對(duì)后發(fā)現(xiàn)，8份陽(yáng)性血清中的6份來(lái)自流產(chǎn)最嚴(yán)重的兩戶，剩余兩份陽(yáng)性血清分別屬于另兩戶，即來(lái)自流產(chǎn)最嚴(yán)重兩個(gè)養(yǎng)殖戶的6頭有流產(chǎn)史母牛，其新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率為100%。該場(chǎng)犬自由放養(yǎng)，吃食含有新孢子蟲(chóng)包囊的胎牛組織或胎盤(pán)機(jī)會(huì)較多；且犬糞便可任意散播或可隨雨水進(jìn)入池塘，亦即犬糞中的新孢子蟲(chóng)卵囊污染牛的飼料、飲水導(dǎo)致牛的感染，可見(jiàn)犬和牛的傳播極易發(fā)生。Koiwai等的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲(chóng)陽(yáng)性牛的平均流產(chǎn)時(shí)間為妊娠5.7個(gè)月［5］，Dubey和Schares也認(rèn)為，新孢子蟲(chóng)感染引起的流產(chǎn)在妊娠5～6個(gè)月居多［6］，這與本次調(diào)查中了解的流產(chǎn)高發(fā)于5～6月孕齡相符。盡管后1次采集的49份血清新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率僅12.2%，但4～6歲齡奶牛新孢子蟲(chóng)抗體陽(yáng)性率達(dá)23.1%，明顯高于其他年齡段。新孢子蟲(chóng)可感染各年齡段牛，但同時(shí)國(guó)內(nèi)外也有一些研究認(rèn)為新孢子蟲(chóng)感染具有一定的年齡趨向。楊娜對(duì)北京和沈陽(yáng)牛場(chǎng)的研究發(fā)現(xiàn)，5歲齡奶牛對(duì)新孢子蟲(chóng)較易感染［7］，Sengupta等對(duì)印度奶牛和水牛的調(diào)查也顯示，4歲及以上年齡的牛新孢子陽(yáng)性率較高［8］。本次檢出的6個(gè)陽(yáng)性牛中的4頭存欄位置非常接近，其抗體水平也較高，可能因一次性大量感染卵囊而致。綜合本次調(diào)研結(jié)果，查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)Dubey等提出的奶牛感染新孢子蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)因素，如牛場(chǎng)內(nèi)犬的存在、飼草飲水污染和缺乏管理等［9－10］，可以推定該奶牛養(yǎng)殖小區(qū)2011年至2012年發(fā)生的暴發(fā)性流產(chǎn)主要原因系新孢子蟲(chóng)感染所致。

奶牛養(yǎng)殖由分散型飼養(yǎng)轉(zhuǎn)為集中型的小區(qū)化飼養(yǎng)已成為國(guó)內(nèi)近年來(lái)奶牛養(yǎng)殖的重要模式之一，集中管理有利于產(chǎn)奶量的提高和牛奶品質(zhì)的提升。但與已經(jīng)發(fā)展成熟大型規(guī)?；?chǎng)相比，奶牛養(yǎng)殖小區(qū)還存在較多問(wèn)題，如選址和建場(chǎng)不科學(xué)、養(yǎng)殖小區(qū)環(huán)境較差、養(yǎng)殖戶組建粗放、奶牛購(gòu)入缺乏監(jiān)管及專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員和獸醫(yī)缺乏等，這些因素嚴(yán)重制約奶牛養(yǎng)殖集約化的健康發(fā)展［11］。本次調(diào)研發(fā)現(xiàn)，新孢子蟲(chóng)病的發(fā)生與飼養(yǎng)管理不規(guī)范、不科學(xué)密切相關(guān)。為預(yù)防新孢子蟲(chóng)病及其他奶牛疫病的發(fā)生，各地基層防疫人員應(yīng)加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖戶的教育和培訓(xùn)，養(yǎng)殖戶也應(yīng)為長(zhǎng)遠(yuǎn)利益考慮，了解購(gòu)入牛只背景，定期檢疫和淘汰陽(yáng)性牛，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，以期獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益。

［1］劉群，李博，齊長(zhǎng)明，等.奶牛新孢子蟲(chóng)病血清學(xué)檢測(cè)初報(bào)［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003，39（2）：8－9.

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