劉 穎 秦繼勇 李文輝 畢良文 段 偉 常 莉

（1.云南省腫瘤醫(yī)院、昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院，云南昆明 650118；2.南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，江蘇南京 210011；3.延安大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西延安 716000）

本研究選用云南海拔3000米以上高輻射藏族和納西族地區(qū)，具有活血化瘀、補(bǔ)血益氣、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等功效的天然植物藥土當(dāng)歸（隆顎當(dāng)歸，Angelica Oncosepala），觀察其水提物灌胃對輻射損傷小鼠體重及紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板數(shù)量的影響，目的是在云南高海拔地區(qū)尋找出新的，高效、低毒的，有廣泛臨床藥用及食用價(jià)值的抗輻射天然植物藥。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF級昆明種小鼠，雄性，6～8周齡，體重18～22g，由云南省昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 受試藥物 由云南省中醫(yī)中藥研究所提供土當(dāng)歸水提物。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 RPMI-1640（GIBCO公司生產(chǎn)，批號：1 296119）、高氯酸、苦味酸、氯化鈣、冰醋酸、福爾馬林、60C0遠(yuǎn)距離治療機(jī)、離心機(jī)、普通光學(xué)顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、分光光度計(jì)、電子天平、烘箱等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 土當(dāng)歸水提物提取 將藥物250g浸泡于3000mL清水中24h，加熱煮沸 30min，冷卻過濾，得濾液 1；藥渣中加入2000mL清水，加熱煮沸30min，冷卻過濾，得濾液2；再次在藥渣中加入2000mL清水，加熱煮沸30min，冷卻過濾，得濾液3，藥渣棄去。合并3次濾液，靜置過夜，次日取上清液加熱蒸發(fā)濃縮至浸膏，浸膏放入85℃烘箱烘干，取出藥物，保存待用。

2.2 藥物劑量 按動(dòng)物體表面積比率換算等效劑量法計(jì)算，參照文獻(xiàn)[1]，計(jì)算結(jié)果擴(kuò)大5倍作為高劑量，倍比稀釋得出中、低劑量，即 2.236g/kg、1.118g/kg、0.559g/kg。

2.3 給藥方式 將藥物用蒸餾水配成相應(yīng)濃度，按小鼠體重計(jì)算給藥劑量，灌胃給藥。正常對照組、照射對照組小鼠給予0.2mL蒸餾水灌胃。

2.4 動(dòng)物分組 將50只小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，分別作上標(biāo)記以便區(qū)分，分別是：正常對照組（normal control）、照射對照組（irradiating control IR）、照射＋高劑量藥物組（IR+HD）、照射＋中劑量藥物組 （IR+MD）、照射＋低劑量藥物組（IR+LD）。

2.5 照射條件60Co-γ射線一次性照射6Gy，吸收劑量率為0.19Gy/min，源皮距為80cm。

2.6 實(shí)驗(yàn)方法 動(dòng)物分組稱重小鼠，并剪斷小鼠尾巴取血1次，檢測血常規(guī)。隨后將小鼠送往云南省腫瘤醫(yī)院放射治療中心一次性照射60Co-γ射線6Gy，照射后土當(dāng)歸水提物連續(xù)灌胃給藥 10d，照射后第 2、4、7、14 天各稱 1 次體重，第 5、14天取血檢測血常規(guī)。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 不同時(shí)間的小鼠體重和紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)均以（）表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS11.5軟件進(jìn)行處理。統(tǒng)計(jì)方法使用單因素方差分析 （one-way ANOVA），組間兩兩比較用q檢驗(yàn)。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

照射前5組小鼠體重和白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板細(xì)胞數(shù)值無明顯差異。照射后，與正常對照組比較，照射對照組上述指標(biāo)均明顯下降。與照射對照組比較，土當(dāng)歸水提物中、低劑量可明顯升高輻照后14d小鼠的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)；照射＋低劑量藥物組照射后14d紅細(xì)胞計(jì)數(shù)亦明顯高于同時(shí)期照射＋高劑量藥物組。其余指標(biāo)和時(shí)段各藥物干預(yù)組與照射對照組比較無顯著性差異。見表1～表4。

4 討論

近年來，一些學(xué)者對當(dāng)歸、土當(dāng)歸的抗輻射作用做了研究。張端蓮等[2]應(yīng)用當(dāng)歸注射液對60Co-γ照射損傷后的小鼠給予治療，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸可使輻射損傷后的小鼠卵泡數(shù)目恢復(fù)正常，卵泡平均面積增加。李宗山等[3]報(bào)道100%當(dāng)歸水浸出液可使照射小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著增強(qiáng)，且未見副作用。陳蕙芳[4]介紹了土當(dāng)歸（Aralia cordata Thunb）對于放射損傷引起的造血功能不全有恢復(fù)作用。但國內(nèi)外未見有研究土當(dāng)歸 （隆顎當(dāng)歸，Angelica Oncosepala）放射保護(hù)作用的文獻(xiàn)報(bào)道。

表1 土當(dāng)歸水提物對輻照小鼠體重的影響g

表2 土當(dāng)歸水提物對輻照小鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響 ×109/L

表3 土當(dāng)歸水提物對輻照小鼠紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響 ×1012/L

表4 土當(dāng)歸水提物對輻照小鼠血小板計(jì)數(shù)的影響 ×109/L

本研究結(jié)果可見，照射對照組小鼠體重、白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)均明顯低于正常對照組，這說明本次實(shí)驗(yàn)輻射損傷模型建立成功，其實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果是可靠的，同時(shí)也說明該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷目茖W(xué)性和可重復(fù)性，與文獻(xiàn)[5-6]一致。照射+土當(dāng)歸水提物組小鼠體重和外周血象中白細(xì)胞、血小板與照射對照組比較均無顯著性差異，分析原因有可能是對藥物只進(jìn)行了粗提，粗提取物中所含有效成分可能太少，此外所用的提取方法也可能使某些有效成分未能提取出來。從土當(dāng)歸水提物實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可知，照射后第14天，三個(gè)照射給藥組紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值均高于照射對照組，低、中劑量藥物組與照射對照組之間有顯著性差異，低、高劑量藥物組之間也有顯著性差異，提示土當(dāng)歸水提物有促進(jìn)輻射損傷小鼠外周血紅細(xì)胞恢復(fù)的趨勢。但僅依靠這一個(gè)指標(biāo)我們尚不能判斷土當(dāng)歸水提物對輻射損傷小鼠有防護(hù)作用，但這一結(jié)果值得我們進(jìn)一步深入研究。

[1]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：1103

[2]張端蓮，王松山，余墨聲，等.當(dāng)歸對輻射損傷后小鼠卵泡影響的定量研究.中草藥，1997，28（3）：156

[3]李宗山，邱世翠，曹奇志，等.當(dāng)歸抗X線輻射對小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響.濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).2004，27（6）：424

[4]陳蕙芳.天然藥物和傳統(tǒng)藥物：土當(dāng)歸提取物治療放射引起的造血功能不全.國外藥訊，1992（5）：35

[5]Hari kumer K B，Sabu MC，Lima PS，et al.Modulation of haematopoetie system and antioxidant enzymes by Emblica officinalis gaertn and its protective role againstgammaradiation induced damages in mice.J Radiat Res，2004，45（4）：549

[6]郭群，陳水英，張作民，等.心樂靈抗輻射作用的實(shí)驗(yàn)研究.中醫(yī)藥臨床雜志，2004，16（2）：101