周旻昱 王躍武

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010;2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

阿那日五味散原處方收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊，由石榴、肉桂、砂仁、蓽茇、干姜5味藥材組成，具有溫胃、清食作用，用于胃脘寒痛，清化不良，腎寒腰痛之功效［1］。經(jīng)多年臨床使用驗(yàn)證，對消化系統(tǒng)疾病有著獨(dú)特的療效。阿那日五味散傳統(tǒng)劑型為散劑。散劑存在服用劑量大，服用劑量不準(zhǔn)確，揮發(fā)性有效成分容易丟失等缺點(diǎn)。本課題旨在完成阿那日五味漂浮片提取工藝和制備工藝研究。文獻(xiàn)報(bào)道，處方中石榴［2］的主要成分有維生素和類黃酮、沒食子酸、氨基酸、礦物質(zhì)、鞣花酸、脂肪酸、多酚等。肉桂［3］的主要成分有揮發(fā)油、桂皮醛、桂皮酸、醋酸樹皮酯、多酚類等。蓽茇［4］的主要成分有生物堿、酰胺類、揮發(fā)油、木脂素類、萜類、甾醇類等。砂仁［5］的主要成分有揮發(fā)油類、皂苷類、黃酮苷類、有機(jī)酸類等成分。干姜［6］的主要成分有揮發(fā)油類、B－谷甾醇、棕櫚酸、環(huán)丁二酸酐、胡蘿卜苷等成分。綜上所述，阿那日五味漂浮片原處方藥材中含有揮發(fā)油，水溶性成分和醇溶性成分。所以，本課題設(shè)計(jì)阿那日五味漂浮片的提取工藝為:使用二氧化碳超臨界萃取方法提取肉桂、蓽茇、砂仁、

干姜中的揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，進(jìn)行環(huán)糊精包合，包合物待用。藥材殘?jiān)c石榴一起進(jìn)行乙醇提取，提取液濃縮，干燥，粉碎，備用。藥材摻渣再進(jìn)行水提取，水提液醇沉，過濾，濃縮，干燥，粉碎，備用。本實(shí)驗(yàn)就阿那日五味漂浮片的醇提工藝和水提取工藝進(jìn)行了詳細(xì)論述。

1 材料，儀器與試劑

1.1 儀器:DHT型磁力攪拌恒溫電熱套(山東荷澤石油化工學(xué)校儀器設(shè)備廠)，P1201高效液相色譜儀(大連依利特科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 藥材:石榴、砂仁、干將、蓽茇、肉桂均購于內(nèi)蒙古自治區(qū)凱蒙藥業(yè)。胡椒堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110775－201104);沒食子酸對照品，(中國藥品生物制品檢定所，批號:110831－201204)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)優(yōu)選醇提工藝

2.1.1 正交試驗(yàn)因素水平的確定:根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際及文獻(xiàn)報(bào)道，選取乙醇濃度、加液量、提取時(shí)間、提取次數(shù)作為考察因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.1.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:按阿那日五味散原處方稱取9份樣品，每份樣品由石榴10g、砂仁6g、干姜4g、蓽茇4g、肉桂6g組成，按照L9(34)正交表，加乙醇，回流提取，過濾，回收乙醇，定容至100mL容量瓶中。

2.1.3 色譜條件:色譜柱:HYPERSIL C18 柱(4.6mm ×200mm，5μm)，大連依利特科學(xué)儀器有限公司;流動(dòng)相:甲醇:水(V:V=75:25);流速:1.0mL·min－1;檢測波長:343nm;柱溫:室溫。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:精密稱定胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品5.1mg，置10mL容量瓶中，加無水乙醇溶解，用水稀釋至刻度，搖勻。取上述制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.25mL、0.5mL、0.75mL、1.0mL、1.25mL，分別置于5mL棕色容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，備用。精密量取各胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0μL進(jìn)樣，測定峰面積，以進(jìn)樣濃度X(μg·mL－1)為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=16176+14849435X，r=0.9999。結(jié)果表明胡椒堿在 25.5 ～127.5μg·mL－1范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣濃度具有良好的線性關(guān)系。

樣品溶液的制備與含量測定:將九份樣品分別過濾，精密量取續(xù)濾液5mL置100mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取各樣品溶液10.0μL，注入液相色譜儀中，測定峰面積，計(jì)算胡椒堿含量，測定結(jié)果見表2。

2.1.5 醇提最佳條件的確定:正交試驗(yàn)結(jié)果分析見表2。對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析見表3。

綜合正交試驗(yàn)直觀分析和方差分析結(jié)果可知:阿那日五味漂浮片最佳醇提工藝為A2B1C2D3，即:乙醇濃度為60%，加液量為8倍，回流提取3次，每次1.5h;各因素對胡椒堿提取率的影響大小順序?yàn)镈＞B＞A＞C，但每個(gè)因素各水平之間無顯著性差異。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果分析表

表3 方差分析表

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)選水提取工藝

2.2.1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平的確定:根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際及文獻(xiàn)報(bào)道，選取加水量、回流時(shí)間、回流次數(shù)作為考察因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，見表4。

表4 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

2.2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:按阿那日五味散原處方稱取九份樣品，每份樣品由石榴10g、砂仁6g、干姜4g、蓽茇4g、肉桂6g組成，按照L9(34)正交表，加水，回流提取，過濾，濃縮，定容至100mL容量瓶中。

2.2.3 色譜條件:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(4.6mm×200mm，5μm)，大連依利特科學(xué)儀器有限公司;流動(dòng)相:0.2%的甲醇乙腈溶液－0.1%磷酸0.1%的三乙醇胺水溶液(V:V=2:98)流速:1.0mL·min－1;檢測波長:273nm;柱溫:室溫

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 :精密稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0.98mg，置10mL容量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，精密量取2.5mL，置25mL容量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，得9.8μg·mL－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，置 5mL 容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度。精密量取各沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液 10.0μl進(jìn)樣，測定峰面積，以進(jìn)樣濃度 X(μg·mL－1)為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=2052+50929X，r=0.9996。結(jié)果表明沒食子酸在0.39～1.96μg·mL－1范圍內(nèi)峰面積與溶液濃度具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 樣品溶液的制備及含量測定:將9份樣品溶液搖勻，分別精密量取1mL至100mL容量瓶中，加水定容。然后再分別精密量取1mL至100mL容量瓶中，加水定容。吸取每份樣品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，計(jì)算沒食子酸含量，測定結(jié)果見表5。

2.2.6 水提最佳工藝條件的確定:正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析見表5。對正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行因素方差分析，見表6。

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果分析表

表6 方差分析表

綜合正交試驗(yàn)直觀分析和方差分析結(jié)果可知:阿那日五味漂浮片最佳水提取工藝為A3B2C3，即:加入12倍量的水，回流提取3次，每次2h;各因素對沒食子酸提取率的影響大小順序?yàn)镃＞A＞B，其中C因素各水平之間有顯著性差異。A因素、B因素各水平之間無顯著性差異。

3 討論

蒙醫(yī)藥有著悠久的歷史，是在蒙古民族傳統(tǒng)醫(yī)藥基礎(chǔ)上汲取了藏漢等民族醫(yī)藥，以及印度醫(yī)藥學(xué)理論的精華而形成的，具有獨(dú)特醫(yī)藥理論和治療經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)藥體系，在我國民族醫(yī)藥中占有重要地位。蒙醫(yī)藥的現(xiàn)代化不僅是蒙醫(yī)藥發(fā)展的迫切需求，更是弘揚(yáng)蒙古族民族文化的重要組成部分。

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)藥材所含有效成分的理化性質(zhì)，選擇了科學(xué)合理的提取工藝，同時(shí)，運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，對提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。本實(shí)驗(yàn)研究所得的最佳提取工藝確保了藥材有效成分提取完全，為阿那日五味漂浮片的研制提供了科學(xué)的依據(jù)。

阿那日五味散傳統(tǒng)劑型為散劑。散劑存在服用劑量大，服用劑量不準(zhǔn)確，揮發(fā)性有效成分容易丟失等缺點(diǎn)。將劑型改革為胃內(nèi)漂浮片，可以增加藥物在胃內(nèi)的滯留時(shí)間，增加藥物的釋放和吸收，提高藥物的生物利用度，還可以對消化系統(tǒng)疾病實(shí)現(xiàn)靶向治療作用。同時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)減少服用量和提高服用劑量的準(zhǔn)確性。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－蒙藥分冊［M］，1998:118.

［2］任彥飛，曲瑋，梁敬鈺，等.石榴的化學(xué)成分及抗前列腺癌的研究進(jìn)展［J］.海峽藥學(xué)，2011，23(9):7 －11.

［3］趙凱，薛培鳳，屠鵬飛，等.肉桂的化學(xué)成分及其生物活性研究進(jìn)展［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35(1):63－74.

［4］李瑞和，蘇日納，郭林云，等.蓽茇化學(xué)成分與藥理作用研究概況［J］.中國民族醫(yī)藥雜志，2006，13(3):73－74.

［5］胡玉蘭，張忠義，林敬明，等.中藥砂仁的化學(xué)成分和藥理活性研究進(jìn)展［J］.中藥材，2005，28(1):72 －74.

［6］營大禮.干姜化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國藥房，2008，19(18):1435－1436.