房 芳,尤如華,尤瑞琪，,高春國,楊祖云,郭榮富*

(1． 云南省動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南 昆明 650201；2．云南省曲靖市畜禽改良工作站，云南 曲靖 655000)

哺乳仔豬健康狀況及生長性能對斷奶仔豬的生長有重要影響。博落回提取物(Cordatd extract ,MCE)具有明顯的抗菌和抗氧化作用，能促進(jìn)初生仔豬對飼料養(yǎng)分的吸收，改善血清抗氧化指標(biāo)，增強機體免疫力，對斷奶仔豬的健康起到積極作用。Vieira等[1]研究報道，在火雞飼糧中添加32.8 mg含有MCE的飼料添加劑能提高火雞采食量。饒華等[2]、蔡鵬等[3]研究表明，MCE能降低料重比，改善斷奶仔豬生長性能。滿意等[4]研究表明，MCE能顯著改善斷奶仔豬生長性能、血清生化指標(biāo)及免疫參數(shù)。博落回在我國資源豐富，其主要有效成分血根堿和白屈菜紅堿具有良好的殺菌、抑菌活性。MCE作為抗生素的一種替代品使用，是改善仔豬健康和生產(chǎn)性能的有效途徑之一。迄今，MCE對哺乳仔豬生長性能，抗氧化能力、免疫力等方面的影響鮮見報道。本試驗以哺乳仔豬為研究對象，探討MCE對哺乳仔豬生長性能、免疫參數(shù)及血液抗氧化指標(biāo)的影響，旨在對哺乳仔豬MCE的研究和應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

本試驗選用體重、胎次、泌乳量、產(chǎn)仔數(shù)相近的18頭健康母豬所產(chǎn)的180頭哺乳仔豬為試驗對象，試驗組與對照組各90頭，每個處理組設(shè)9個重復(fù)，每個重復(fù)10頭仔豬，第7 d開始誘食補料，35 d結(jié)束。試驗組添加MCE 4.5 mg/kg，對照組未添加MCE。

1.2 試驗飼糧

試驗飼糧參照NCR[12]仔豬營養(yǎng)需要量配制基礎(chǔ)飼糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。在此基礎(chǔ)上，添加MCE 4.5 mg/kg配制成試驗飼糧。

1.3 飼養(yǎng)管理

仔豬第7 d開始誘食，自由采食和飲水，按種豬場常規(guī)飼養(yǎng)和免疫規(guī)程進(jìn)行飼養(yǎng)管理，記錄仔豬初生重及7 d，20 d，35 d體重，計算耗料量、日采食量和7～35 d平均日增重。

1.4 MCE來源

試驗材料MCE由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省動物營養(yǎng)重點實驗室豬營養(yǎng)研究室提供。

1.5 測定指標(biāo)與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能 分別于仔豬剛出生及7、20、35日齡早晨空腹稱重，計算仔豬的平均日增重、平均日采食量、料重比。

1.5.2 采血 試驗結(jié)束當(dāng)天，所有仔豬空腹、前腔靜脈采血5 mL，制備血清，用于血液免疫參數(shù)的測定：免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、溶菌酶(LSZ)、乳酸脫氫酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)，采用試劑盒(南京建成生物有限公司提供)測定。

1.5.3 血液抗氧化參數(shù) 總抗氧化能力(T-AOC)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽還原酶 、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶、谷胱甘肽和黏膜谷胱甘肽 ，采用試劑盒(南京建成生物有限公司提供)測定。

空腸黏膜鈉泵、總二糖酶活性參照袁雪波等[6]采用的方法進(jìn)行測定。

1.5.4 小腸形態(tài)學(xué)觀察 參照陳恒燦等[7]采用的方法進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗，試驗結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

表1 仔豬基礎(chǔ)飼糧 Table 1 Basal diet for piglets

注：①每千克日糧含：鐵(FeSO4) 100 mg，銅(CuSO4) 10 mg，錳(MnSO4)5 mg，鋅(ZnSO4) 100 mg，碘(KI) 0.2 mg，硒(Na2SeO3) 0.3 mg；② 每千克基礎(chǔ)日糧含：維生素 A 2 200 IU，維生素 D3220 IU,維生素 E 16 IU,維生素K 0.5 mg,維生素B120.02 mg，核黃素4 mg,煙酸 20 mg,泛酸12 mg,氯化膽堿0.6 mg,葉酸,0.3 mg,硫胺素,1.5 mg維生素B62 mg,生物素0.08 mg;③ 營養(yǎng)水平除消化能外其它指標(biāo)均為測定值。

Note:① The diet provides per kilogram of: Fe (FeSO4)100 mg, Cu (CuSO4) 10 mg, Mn (MnSO4) 5 mg, Zn (ZnSO4) 100 mg, I (KI) 0.2 mg, Se (Na2SeO3) 0.3 mg;② The basal diet supplies per kilogram of: vitamin A 2 200 IU, vitamin D3 220 IU, vitamin E 16 IU, vitamin K 0.5 mg, vitamin B120.02 mg, riboflavin 4 mg,niacin 20 mg, pantothenic acid 12 mg, choline chloride 0.6 mg, folic acid 0.3 mg, thiamin 1.5 mg, pyridoxine 2 mg, biotin 0.08 mg;③ Nutrition levels except DE are determined values.

2 結(jié)果與分析

2.1 MCE對哺乳期仔豬生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，初出生的仔豬及出生7 d、20 d和35 d體重組間差異不顯著，7～35 d增重及日增重差異也不顯著(P>0.05)。但7～35 d耗料量及日采食量差異顯著(P<0.05)，相比于試驗組,對照組日采食量減少了15.15%。

2.2 MCE對哺乳仔豬小腸形態(tài)學(xué)和空腸黏膜酶活性的影響

2.2.1 小腸形態(tài)學(xué) 由表3可知，加入MEC的試驗組空腸絨毛長度極顯著高于對照組(P<0.01)，空腸隱窩深度極顯著低于與對照組(P<0.01)，V/C顯著極顯著高于對照組(P<0.01)。

表2 MCE對仔豬生產(chǎn)性能的影響Table 2 Effects of MCE on the growth performance of piglets

注：同行肩標(biāo)大寫字母不同者表示差異極顯著(P<0.01)；小寫字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。下同。

Note：Values with different capitalized superscripts within a row mean significant difference(P<0.05); those with lowercase letter superscripts mean extreme difference(P<0.01).The same below.

表3 MCE對仔豬空腸絨毛長度、隱窩深度的影響Table 3 Effect of MCE on piglets' jejunum villus length and crypt depth

2.2.2 空腸黏膜酶活性 由表4可知，添加MCE后鈉泵和總二糖酶的含量顯著高于對照組(P<0.05)，試驗組鈉泵相對于對照組上升19.28%，總二糖酶上升25.44%。

2.3 MCE對哺乳仔豬血清免疫參數(shù)的影響

由表5可知，試驗組仔豬血清免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、溶菌酶、一氧化氮合酶和一氧化氮均極顯著高于對照組(P<0.01)，而乳酸脫氫酶活性顯著低于照組(P<0.05)。

表4 MCE對仔豬空腸黏膜酶活性的影響Table 4 Effect of MCE on piglets' jejunum enzyme activity

表5 MCE對仔豬血清免疫應(yīng)激參數(shù)的影響Table 5 Effect of MCE on piglets' serum immune stress parameters

2.4 MCE對哺乳仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，試驗組總抗氧化能力和總超氧化物歧化酶均顯著高于對照組(P<0.05)，丙二醛含量極顯著低于對照組(P<0.01)，試驗租谷胱甘肽過氧化物酶顯著高與對照組 (P<0.05)。試驗租黏膜谷胱甘肽極顯著高于對照組(P<0.01)。但與對照組比較，谷胱甘肽還原酶 、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 MCE改善新生期仔豬生產(chǎn)性能

蔡鵬等[2]研究表明，添加0.337～5.400 mg/kg的MCE，能顯著改善斷奶仔豬生長性能。本試驗發(fā)現(xiàn)，在7～35 d的仔豬基礎(chǔ)飼料中添加4.5mg/kgMCE，可顯著降低新生仔豬的日采食量及耗料量，有增加體重的趨勢。結(jié)果說明MCE可以提高新生仔豬對飼料養(yǎng)分的利用率。

表6 MCE對仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響Table 6 Effect of MCE on piglets' serum antioxidant index

進(jìn)一步分析小腸形態(tài)學(xué)變化后發(fā)現(xiàn)，對新生仔豬添加MCE，明顯增加空腸絨毛長度，降低隱窩深度。顧憲紅等[8]研究表明，仔豬絨毛寬度較寬, 會使單位面積上腸絨毛數(shù)減少, 吸收面積降低, 影響消化功能。本試驗結(jié)果表明，MCE通過增加空腸絨毛長度和降低隱窩深度，可增大吸收面積，提高飼料養(yǎng)分消化吸收能力。

小腸粘膜鈉泵和總二糖酶活性是反映仔豬對飼料養(yǎng)分吸收能力的重要參數(shù)。鄒偉等[9]研究表明，腸上皮細(xì)胞不能直接吸收日糧中的淀粉，必須由粘膜二糖酶水解成單糖后方可吸收利用，因此二糖酶在碳水化合物的消化吸收過程中起著至關(guān)重要的作用。袁雪波等[5]在對哺乳仔豬空腸黏膜酶活性變化的研究表明，提高哺乳仔豬總二糖酶活性有利于增強腸道對二糖的分解, 提高能量物質(zhì)的吸收、轉(zhuǎn)化和利用。許梓榮等[10]報道, 仔豬二糖酶主要分布于空腸中。本試驗添加MCE后，顯著提高空腸鈉泵和粘膜二糖酶活性，結(jié)果說明MCE能促進(jìn)新生仔豬對飼料養(yǎng)分的吸收和利用。

3.2 MCE能明顯改善新生仔豬血清免疫參數(shù)

免疫球蛋白是具有抗體活性的蛋白質(zhì)，能與抗原進(jìn)行特異結(jié)合是重要的免疫物質(zhì)。LSZ具有溶菌作用，是生物體內(nèi)重要的非特異性免疫因子，能防御外源微生物入侵，破壞細(xì)胞壁引起細(xì)胞裂解[11]。LDH是重要的氧化還原酶，正常情況下血清中含量很少但當(dāng)機體出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞受損時，LDH在血清中的含量就會顯著升高。病原侵入，機體會有大量的NOS產(chǎn)生，促進(jìn)大量的NO的生成，使機體有效抵抗外來病原入侵，提高機體免疫力。本試驗表明MCE能促進(jìn)免疫球蛋白、LSZ、NOS及NO升高，降低LDH含量。滿意等[3]對MCE的研究表明，MCE在改善血清免疫參數(shù)的效果上明顯優(yōu)于土霉素。本試驗表明，MCE可明顯改善哺乳仔豬血清免疫應(yīng)激參數(shù)，MCE是代替抗生素的一種有效途徑。

3.3 MCE對新生仔豬抗氧化能力的影響

自由基是機體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物，具有強氧化性，可損害機體組織和細(xì)胞，引起慢性疾病及衰老效應(yīng)。T-AOC主要是清除機體內(nèi)過高的自由基，維持內(nèi)環(huán)境活性氧的動態(tài)平衡，是反應(yīng)機體抗氧化能力的重要指標(biāo)，MDA是活性氧(ROS)作用于多不飽和脂肪酸后的氧化產(chǎn)物，常用于脂質(zhì)過氧化評價[12]。SOD的功能是催化超氧離子，清除體內(nèi)自由基，保護細(xì)胞免受損傷，在機體的氧化和抗氧化平衡中起著重要的作用。GPX是重要的抗氧化酶，可以清除體內(nèi)的過氧化氫及脂質(zhì)過氧化物可以防止細(xì)胞膜和其它生物組織免受過氧化損傷。還原型的GSH對氫過氧化物有還原作用在機體中具有抗氧化和整合解毒的作用，GPX不僅能清除自由基還可以提高機體免疫。劉永祥等[13]研究表明，堆型艾美耳球蟲感染肉仔雞后能極顯著降低肉仔雞十二指腸黏膜谷胱甘肽(GSH)的含量。本試驗加入MCE后仔豬十二指腸黏膜谷胱甘肽(GSH)含量極顯著高于對照組。李燁等[14]在丙二醛對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響表明，MDA 能降低 MSCs 向成骨細(xì)胞譜系分化能力。本試驗中，試驗組MDA極顯著低于對照組。與對照組相比，試驗組T-AOC提高8.55% 、T-SOD提高10.61% 、GSH-px提高13.72%、GSH升高17.44%、MDA下降19.24%。本試驗結(jié)果顯示，MCE明顯改善新生仔豬抗氧化參數(shù)，顯著提高仔豬機體的抗氧化能力。

4 結(jié) 論

MCE能明顯增加小腸絨毛長度、降低隱窩深度，提高空腸黏膜鈉泵和總二糖酶活性，具有促進(jìn)新生仔豬對飼料養(yǎng)分的利用，從而改善新生仔豬生產(chǎn)性能。MCE可改善新生仔豬血清T-AOC、T-SOD、GSH-px和空腸黏膜GSH參數(shù)，明顯降低MDA含量，提高仔豬的抗氧化能力，保護機體細(xì)胞免受自由基的損傷。MCE可改善新生仔豬血清免疫應(yīng)激參數(shù)，明顯提高新生仔豬的抗病能力，MCE不具有抗藥性和殘留問題，作為抗生素替代品使用具有很好應(yīng)用前景。

參考文獻(xiàn):

[1] Vieira S L, Berres J, Reis R N. Studies with sanguinarine like alkaloids as feed additive in broiler diets [J].Brazilian Journal of poultry Science, 2008, 10(1):67-71.

[2] 饒 華,蔡 鵬,周錫紅,等.博落回提取物對斷奶仔豬生長性能的影響[J].中國獸藥雜志,2009,43(11):42-45.

[3] 蔡 鵬,孫志良,曾建國,等.不同劑量博落回提取物對斷奶仔豬生長性能的影響[J].中國畜牧獸醫(yī),2010,37(5):41-43.

[4] 滿 意,張春勇,李美荃,等.博落回提取物對早期斷奶仔豬生長性能和血清免疫參數(shù)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(1):126-132.

[5] NRC. Nutrient requirement of swine[S].10th ed. Washington, D C: National Academy Press, 2012.

[6] 袁雪波,馬 黎,陳克嶙,等.丙氨酰谷氨酰胺二肽對哺乳仔豬生長性能、小腸形態(tài)學(xué)和血清生化指標(biāo)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2011,23(1):94-101.

[7] 陳恒燦,馬 黎,陳克嶙,等.丙氨酰谷氨酰胺二肽對早期斷奶仔豬抗氧化能力及腸道保護的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2011,42(2): 251-259.

[8] 顧憲紅,張宏福,佘銳萍,等.斷奶日齡對仔豬腸粘膜形態(tài)的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2001,32(4):306-313.

[9] 鄒 偉,何 余,陸 偉.小腸粘膜二糖酶的發(fā)育規(guī)律及其影響因素[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志,2011(5):1-4.

[10] 許梓榮,李衛(wèi)芬,孫建義.豬胃腸道黏膜二糖酶的性質(zhì)[J].動物學(xué)報,2002,48(2):202- 207.

[11] 張 鵬,江明鋒,王 永.動物源溶菌酶研究進(jìn)展[J].中國生物工程雜志,2012,32(8):87-93.

[12] 曾憲成,潘學(xué)營,姚昳舒,等.運輸應(yīng)激對食蟹猴血清生化指標(biāo)、丙二醛及總抗氧化能力的影響[J].四川動物,2010,29(6):990-996.

[13] 劉永祥,楊建平,姜東風(fēng)，等.共軛亞油酸對堆型艾美耳球蟲感染雞十二指腸黏膜免疫和脂質(zhì)過氧化狀態(tài)的影響[J].畜 牧 獸 醫(yī) 學(xué) 報,2012,43(9):1 463-1 470.

[14] 李 燁,楊沐思,劉文鋒,等.丙二醛對小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響[J].生命科學(xué)研究,2012,6(16):496-500.