周文賓，姚 君，王建堯，王立生

(1.濰坊醫(yī)學(xué)院校醫(yī)院，山東 濰坊 261053;2.深圳市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東深圳 518020;3.深圳市兒童醫(yī)院普外科，廣東深圳 518020;4.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東青島 266071)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是臨床上導(dǎo)致糖尿病患者死亡的主要并發(fā)癥之一。近年來大量研究證實(shí)糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激關(guān)系密切［1］。應(yīng)用抗氧化治療，改善氧化應(yīng)激可延緩并發(fā)癥的發(fā)展。白藜蘆醇苷(polydatin，PD)又稱虎杖苷，是一種在多種植物中廣泛存在的多酚類化合物，中藥虎杖中含量最高。目前，實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)PD具有抗氧化、抗心血管疾病、抗菌抗炎、調(diào)節(jié)免疫、治療突變、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、保肝及雌激素調(diào)節(jié)等生物藥理活性［2］。本實(shí)驗(yàn)擬研究PD對腎臟的保護(hù)作用及機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康♂ Wistar大鼠40只，SPF級(南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號:SCXK粵2006-0015)，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，自由飲水，日常光照。

1.2 試劑 PD(深圳匯鑫榮生物科技有限公司，純度≥99%，批號:090226)。PD 低、高劑量按 30、60 mg·kg－1用蒸餾水配制。鏈脲佐菌素購于廣州斯佳生物科技有限公司。SOD、MDA和GSH-Px檢測試劑盒購于南京建成科技有限公司。［γ-32P］ATP購于北京福瑞生物工程公司核酸研究室。

2 方法

2.1 模型的制備與藥物干預(yù) 將30只Wistar大鼠禁食12 h，一次單劑量腹腔注射鏈脲佐菌素65 mg·kg－1，48～72 h鼠尾采血測血糖，取尿測尿糖。成模標(biāo)準(zhǔn)為:血糖≥16.65 mmol·L－1，尿糖強(qiáng)陽性～)。將成模DM大鼠分為DM模型組(DM組)、PD低劑量治療組(polydatin low dosetreated group，PDLD)、PD高劑量治療組(polydatin high dosetreated group，PDHD)，另設(shè)正常對照組(NC組)。NC與DM組分別行2 ml蒸餾水灌胃，PDLD組給予30 mg·kg－1的PD，PDHD組給予60 mg·kg－1PD，分別溶于2 ml蒸餾水灌胃，每天1次，30 d后處死大鼠。

2.2 指標(biāo)的檢測 將腎臟組織勻漿后，分別用化學(xué)比色法行SOD、GSH-Px、MDA的檢測，按試劑盒說明操作。將分組處理的近曲小管用單根微分離法挑取腎小管，按照cheval等方法測定腎小管的 Na+，K+-ATPase活性［3－4］。

3 結(jié)果

3.1 PD對腎組織氧化應(yīng)激的影響 與對照組比較，DM組大鼠腎組織MDA活性升高(P＜0.01)，SOD與GSH-Px活性降低(P＜0.01)。PD低劑量、PD高劑量組與DM組比較，大鼠腎組織MDA活性降低(P＜0.01)，SOD與GSH-Px活性升高(P＜0.01)。見Tab 1。

Tab 1 Effects of polydatin on activity of SOD，MDA，and GSH-Px in kidney of diabetic rat(ˉ±s，n=10)

Tab 1 Effects of polydatin on activity of SOD，MDA，and GSH-Px in kidney of diabetic rat(ˉ±s，n=10)

##P＜0.01 vs NC group;＊＊P＜0.01 vs the DM group

Group Activity of MDA/μmol·g－ 1Pro Activity of SOD/U·mg－1Pro Activity of GSH-Px/U·g－1Pro NC 1.236 ±0.1 242.91 ±11.6 807.21 ±54.6 DM 2.388 ±0.12## 148.35 ±12.3## 247.12 ±47.1##PDLD 1.777 ±0.15＊＊ 181.11 ±10.2＊＊ 498.65 ±35.0＊＊PDHD 1.542 ±0.12＊＊ 230.44 ±17.8＊＊ 628.19 ±56.4＊＊

3.2 PD對腎臟近球小管Na+，K+-ATPase活性的影響與對照組比較，DM組大鼠腎組織Na+，K+-ATPase活性降低(P＜0.01);PD低劑量、PD高劑量組與DM組比較，大鼠腎組織Na+，K+-ATPase活性升高(P＜0.01)。見Tab 2。

Tab 2 Effects of polydatin on Na+，K+-ATPaseactivity in kidney of diabetic rat(n=10)

4 討論

體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的升高和過量的活性氧(ROS)產(chǎn)生是糖尿病及其血管并發(fā)癥發(fā)生和發(fā)展的重要的因素之一［5］。目前，研究已經(jīng)確定高血糖是產(chǎn)生ROS過多直接原因，包括在高血糖的影響下能產(chǎn)生ROS的多種細(xì)胞，主要包括腎小球系膜細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞［6］。ROS能間接介導(dǎo)高血糖引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)致的基因活化［7］。動物實(shí)驗(yàn)和臨床調(diào)查證實(shí)，ROS在DN的發(fā)病機(jī)制中有著重要的作用。MDA是氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，組織中氧自由基含量及細(xì)胞損傷的程度可通過MDA的含量變化間接反映出來［8］。SOD是能清除超氧陰離子自由基(O－2)而起保護(hù)細(xì)胞作用的重要抗氧化酶［9］，SOD活性不足時(shí)，其抗氧化作用不能及時(shí)發(fā)揮，氧自由基就會攻擊細(xì)胞，引起細(xì)胞損傷。谷胱甘肽(GSH)是一種低分子自由基清除劑，它能通過與谷胱甘肽過氧化物酶－還原酶系(GSH-Px-Rx)共同作用，保護(hù)細(xì)胞不受氧基團(tuán)的損害［10］。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，DM組與NC組比較，糖尿病大鼠腎臟 SOD、GSH-Px降低，同時(shí) MDA增多，證實(shí)大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平增高，與以往研究相一致。PD治療組大鼠與DM組比較，其腎臟SOD、GSH-Px升高，MDA降低，證實(shí)PD對糖尿病大鼠腎臟的氧化應(yīng)激水平有一定的抑制作用，其抗氧化作用明顯。

Na+，K+-ATPase是判斷腎臟病情的重要指標(biāo)，它可以反映基底膜的損傷程度。本研究發(fā)現(xiàn)，DM組大鼠成模后30 d，大鼠腎近球小管Na+，K+-ATPase活性降低，可能與高糖環(huán)境損傷腎小管和腎基底膜有關(guān)［3］。而PD治療組Na+，K+-ATPase活性與DM比較水平升高，證實(shí)PD對腎小管有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過抑制氧化應(yīng)激，對高糖環(huán)境下近球小管的Na+，K+-ATPase活性有一定的恢復(fù)和保護(hù)作用。

本實(shí)驗(yàn)研究顯示，氧化應(yīng)激損傷是造成DN并發(fā)癥的重要作用之一。而PD作為一種有效的抗氧化劑和抗血管藥物，對DN的發(fā)展起到一定的抑制作用，其機(jī)制可能是抑制了DN本身的氧化損傷，保護(hù)了近球腎小管Na+，K+-ATPase的活性，使腎功能免受高糖環(huán)境的損害。PD有望成為延緩糖尿病并發(fā)癥－DN的有效藥物，但其療效還需要臨床的進(jìn)一步驗(yàn)證。

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