黃海燕，徐 靜，胥艷芳，張麗燕，郝偉偉，邱文英，余 謙，向丕元

（四川省華派生物制藥有限公司，四川 簡陽 641400）

豬圓環(huán)病毒屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，其無囊膜，為單股環(huán)狀DNA病毒，是已知?jiǎng)游锊《局械淖钚〔《?。該病毒?duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，在pH值為3的酸性環(huán)境中可長時(shí)間存活，其對(duì)氯仿不敏感，56℃或70℃處理一段時(shí)間不被滅活。病毒不凝集牛、羊、豬、雞等多種動(dòng)物和人的紅細(xì)胞。

該病毒分為PCV1和PCV2兩型，PCV1是從多株連續(xù)傳代的PK-15細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，是一種可以感染豬的常規(guī)病毒，其無致病性；PCV2是從病豬及一些無明顯臨床癥狀的隱性感染豬體內(nèi)檢測(cè)到的。感染PCV2后會(huì)引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎腎病綜合征，與豬圓環(huán)病毒病與豬呼吸道疾病綜合征、豬繁殖障礙、肉芽腫性腸炎、急性肺水腫、增生性壞死性肺炎等疾病的發(fā)生有一定關(guān)系。本病最早于1991年發(fā)現(xiàn)于加拿大，1997年首次分離到PCV2，我國最早于1999年通過血清學(xué)方法證實(shí)了此病的存在。

PCV2主要侵害豬的免疫系統(tǒng)，可導(dǎo)致豬發(fā)生免疫抑制甚至免疫缺陷。

1 豬圓環(huán)病毒病的臨床類型

1.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征 該綜合征是由PCV2引起的，患病斷奶仔豬以呼吸急促或困難，腹瀉，貧血，有明顯的淋巴組織病變和漸進(jìn)性消瘦為特征。該綜合征主要發(fā)生于哺乳期和保育期仔豬，尤其是6～18周齡仔豬最易感，其次為2～4月齡豬，其發(fā)病率一般在10%～20%（有時(shí)可達(dá)50%～60%），發(fā)病死亡率4%～20%。

患豬下痢、呼吸困難、眼瞼水腫、生長發(fā)育受阻。病理變化為有不明顯的淋巴結(jié)病變，出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎，胸腺和肝臟萎縮，腎臟浮腫，呈半透明狀，脾臟呈肉色，胃有潰瘍。

1.2 豬皮炎腎病綜合征 該綜合征是由PCV2引起的，以豬皮膚出現(xiàn)病變、淋巴結(jié)腫大和腎臟出血、腫大、壞死等為特征。該病主要侵害仔豬、育成豬和成年豬，尤其是10～16周齡豬最易感，其發(fā)病率低于10%，死亡率達(dá)50%。

病豬輕度發(fā)熱，步態(tài)僵硬，后肢及會(huì)陰部皮膚出現(xiàn)紅斑和丘疹，特征性癥狀為有壞死性脈管炎。臟器病變包括淋巴結(jié)腫大，皮質(zhì)有點(diǎn)狀壞死，肺臟、腸道和胃有出血點(diǎn)。

1.3 其他相關(guān)疾病 豬呼吸道疾病綜合征主要是由PCV2、豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬肺炎支原體引起的，有時(shí)豬胸膜肺炎放線桿菌、豬多殺性巴氏桿菌和豬鏈球菌等也可引起發(fā)病。該病主要發(fā)生于4～6月齡豬，發(fā)病率一般為 30%～70%，死亡率為10%以下。

豬繁殖障礙主要發(fā)生于初產(chǎn)母豬或新引入的母豬。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，豬胚中心是PCV2增殖的主要場(chǎng)所。對(duì)640頭母豬進(jìn)行PCV2疫苗免疫，統(tǒng)計(jì)免疫前后1年母豬的繁殖性能數(shù)據(jù)，結(jié)果表明母豬接種PCV2疫苗能顯著提高母豬的繁殖性能。實(shí)驗(yàn)還采用ELISA和PCR方法檢測(cè)免疫母豬所產(chǎn)仔豬血清中的PCV2抗體和核酸，結(jié)果顯示免疫PCV2疫苗母豬所產(chǎn)仔豬的體內(nèi)含有較高水平的母源抗體。

2 豬圓環(huán)病毒病的流行新特點(diǎn)

家豬和野豬是PCV2的自然宿主，PCV2各日齡的豬均易感，而豬科以外的動(dòng)物對(duì)PCV2不易感。研究表明，用PCV2人工感染馬、牛、羊、兔后，被感染動(dòng)物不產(chǎn)生抗體，但病毒可在小鼠體內(nèi)復(fù)制、傳播，因此小鼠常作為PCV2研究的動(dòng)物模型。

PCV2主要經(jīng)口腔、呼吸道感染豬，病豬、帶毒豬及患病公豬的精液等均是傳染源，病豬的排泄物中含有大量的病毒。懷孕母豬感染PCV2后，病毒可通過胎盤垂直傳播給仔豬，感染PCV2的公豬，病毒通過精液引起垂直傳播。感染PCV2的豬發(fā)生免疫抑制，抵抗力下降。據(jù)報(bào)道，2006～2009年與 2002～2005年相比，9周齡及以下豬的PCV2發(fā)病率和死亡率顯著下降，而10～12周齡和12周齡以上豬的發(fā)病率和死亡率顯著上升。

對(duì)各地豬只的血清樣品的檢測(cè)結(jié)果表明，PCV2的抗體陽性率在65%以上，由此可見，PCV2感染已較嚴(yán)重。該病毒分為5個(gè)亞型（PCV2a-e），近年來，世界范圍內(nèi)流行的PCV2已從PCV2a亞型轉(zhuǎn)化變PCV2b。

3 豬圓環(huán)病毒對(duì)免疫效果的影響

3.1 對(duì)豬瘟免疫的影響 檢測(cè)結(jié)果顯示，豬接種豬瘟疫苗前后感染PCV2會(huì)導(dǎo)致豬瘟特異性抗體水平低下、血清抗體陽轉(zhuǎn)率下降、外周血淋巴細(xì)胞增殖活性降低。免疫前感染PCV2的豬在加強(qiáng)免疫豬瘟疫苗后，其抗體水平和血清抗體轉(zhuǎn)陽率更低。

對(duì)已感染PCV2的試驗(yàn)豬進(jìn)行豬瘟疫苗免疫后，在免疫第1、3、7、14、21、28 和 63 d 收集血清進(jìn)行豬瘟特異性抗體和PCV2抗體檢測(cè)，并采集淋巴結(jié)、內(nèi)臟進(jìn)行PCV2核酸和CSFV核酸檢測(cè)，結(jié)果顯示，幾乎所有試驗(yàn)豬都未產(chǎn)生有效的豬瘟特異性抗體，在其內(nèi)臟組織中也未檢測(cè)到CSFV核酸，但在豬的淋巴結(jié)中檢測(cè)到PCV2核酸。這表明PCV2會(huì)給豬的免疫系統(tǒng)造成嚴(yán)重?fù)p害，并抑制豬瘟抗體的產(chǎn)生。

3.2 對(duì)豬偽狂犬病免疫的影響采集只接種偽狂犬病疫苗和人工感染PCV2后3周接種偽狂犬病疫苗的試驗(yàn)豬的血清，對(duì)其PRVgB特異性抗體水平進(jìn)行比較，結(jié)果表明，PCV2在一定程度上抑制了豬體對(duì)偽狂犬病疫苗的免疫應(yīng)答，PCV2在感染后期抑制了機(jī)體特異性細(xì)胞免疫功能。

用Real-time PCR檢測(cè)仔豬外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）體外單接種和共接種PCV2、豬偽狂犬病毒后的調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果顯示，PCV2能抑制豬偽狂犬病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞因子mRNA表達(dá)上調(diào)，其中對(duì)IFN-γmRNA的抑制最為顯著，由此推斷PCV2會(huì)對(duì)豬偽狂犬病的細(xì)胞免疫反應(yīng)產(chǎn)生不利影響。

3.3 對(duì)豬口蹄疫免疫的影響 采用阻斷ELISA對(duì)只接種口蹄疫疫苗和人工感染PCV2后4周接種口蹄疫疫苗的豬血清進(jìn)行口蹄疫抗體水平檢測(cè)，對(duì)前腔靜脈血進(jìn)行CD4/CD8流式細(xì)胞術(shù)及血常規(guī)分析，結(jié)果表明，PCV2感染可在一定程度上抑制機(jī)體對(duì)豬口蹄疫疫苗的體液免疫應(yīng)答，可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞及白細(xì)胞數(shù)量降低，進(jìn)而影響機(jī)體免疫功能。

4 疫苗的研究及效果

4.1 病毒載體疫苗 病毒載體疫苗是將PCV2基因組中編碼Cap蛋白的片段克隆到不同的病毒載體中，通過培養(yǎng)病毒，快速、大量獲得具備免疫原性的PCV2 Cap蛋白后，再將其制備成疫苗。

用昆蟲桿狀病毒作為病毒載體，對(duì)豬圓環(huán)病毒2型的ORF2進(jìn)行表達(dá)，結(jié)果證實(shí)，該種重組蛋白具有良好的免疫活性，但昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)對(duì)營養(yǎng)、氧氣等因子的要求較為苛刻，而為增加含氧量不停攪拌也會(huì)給細(xì)胞造成巨大壓力，故該系統(tǒng)無法形成連續(xù)性表達(dá)。

4.2 嵌合病毒疫苗 將PCV2的Cap基因克隆入無致病性的PCV1基因骨架中可構(gòu)建具有感染性的減毒嵌合病毒PCV1-2。為分析嵌合豬圓環(huán)病毒（PCV1-2）對(duì)仔豬的致病性和免疫原性，觀察接種PCV1-2后的健康仔豬的臨床癥狀及檢測(cè)組織病毒含量及血清學(xué)變化，結(jié)果顯示，接種PCV1-2后，豬體組織和血清中的病毒載量低，大體未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀和病理變化。由此可見PCV1-2的致病性明顯低于PCV2，接種仔豬快速產(chǎn)生了高水平的PCV2 ORF2抗體。PCV1-2具有優(yōu)良的免疫原性，該重組病毒有望成為圓環(huán)病毒的候選株。

4.3 豬圓環(huán)病毒滅活疫苗 滅活疫苗是將PCV2野毒株或經(jīng)標(biāo)記改造的PCV2通過擴(kuò)大培養(yǎng)、滅活劑滅活后，與佐劑按一定比例混合而成。

研究表明：PCV2滅活疫苗安全性高，免疫效果好，可刺激機(jī)體產(chǎn)生很強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫，被免豬產(chǎn)生的抗體效價(jià)高，作用時(shí)間長。經(jīng)產(chǎn)母豬或后備母豬免疫該疫苗后，仔豬可通過初乳獲得保護(hù)。斷奶仔豬接種滅活疫苗能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，可有效抑制其他病菌引起的繼發(fā)感染，并提高飼料報(bào)酬。

利用懸浮培養(yǎng)的PK-15細(xì)胞繁殖病毒，濃縮后β-內(nèi)酰內(nèi)酯（BPL）滅活，油佐劑乳化后接種仔豬和母豬，可獲得良好的免疫效果。

用PCV2分離株接種PK15-B1克隆細(xì)胞制備抗原后，濃縮，經(jīng)甲醛滅活，制成油佐劑疫苗，試驗(yàn)表明豬只應(yīng)用該疫苗后可獲得良好的免疫效果。據(jù)悉，某生物制藥有限公司生產(chǎn)的PCV2強(qiáng)毒株滅活苗即將上市，試驗(yàn)結(jié)果表明其免疫效果良好。