王開富， 徐麗君， 鄒 欣， 黃光英

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所，武漢 430030

九味頭痛片由當(dāng)歸、丹參、赤芍、延胡索、蔓荊子、蒺藜、石決明、白芷等九味中藥合理配伍而成具有平肝潛陽、活血止痛等功效，多年的臨床實踐證明其治療偏頭痛療效確切，因此，我們對該藥的藥效學(xué)及作用機(jī)制進(jìn)行了實驗研究。

1 材料與方法

1.1 藥物及試劑

九味頭痛片浸膏（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部提供，批號：101218，1g藥材相當(dāng)于0.23g浸膏）；阿司匹林，由合肥久聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)；正天丸，由三九醫(yī)藥股份有限公司提供，批號：0604171；冰醋酸，由天津市博迪化工有限公司提供；羧甲基纖維素鈉，由大連天源基化學(xué)有限公司提供。硝酸甘油，由山西康寶生物制品股份有限公司提供；動物麻醉藥物氨基甲酸乙酯（烏來糖）由上海山浦化工有限公司提供。

1.2 實驗動物

昆明種小鼠，雌雄按實驗要求而定，體重18～22g，均由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實驗動物學(xué)部提供。健康Wistar大鼠，雌雄各半，體重180～220 g，由湖北省疾病控制中心提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 小鼠扭體法實驗［1］取昆明種小鼠100只，體重18～22g，雌雄各半，稱重標(biāo)記后隨機(jī)分為5組，每組20只。中藥組按九味頭痛片低、中、高劑量灌服浸膏（2.72、5.44、10.88g／kg），陽性對照組灌阿司匹林水溶液（0.4g／kg），陰性對照組灌服等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，每日1 次連續(xù)用藥7d，末次給藥后30min，各鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL／10g體重（醋酸溶液臨用前配制）。5min后觀察并記錄注射醋酸溶液后15min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)（腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行）的次數(shù)。

1.3.2 熱板法實驗［2］將昆明種小鼠置55℃熱板儀上，用秒表記錄小鼠自投入熱板至出現(xiàn)舔后足的時間（s）作為該鼠的痛閾值。在給藥前先測定每只小鼠的基礎(chǔ)痛閾值，共測2次，剔除喜跳躍者，以痛閾值＞10s而＜30s的小鼠為合格。如痛閾值超過60s，即停止測試而按60s計，以免燙傷足部。

動物分組及處理：將篩選合格的小鼠（全部為雌性）隨機(jī)分為5組，每組20只。中藥組按九味頭痛片低、中、高劑量灌服浸膏（2.72、5.44、10.88g／kg），陽性對照組灌服阿司匹林水溶液（0.4g／kg），陰性對照組灌服等體積0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，每日1次連續(xù)用藥7d，于末次給藥后0.5、1、2、4h按上述基礎(chǔ)痛閾值檢測方法分別測定痛閾值，并按下式計算其痛閾值提高百分率：痛閾值提高百分率＝（給藥后平均痛閾值－給藥前平均痛閾值）／給藥前痛閾值×100%。

1.3.3 偏頭痛大鼠造模及血液流變學(xué)、腦血流量的檢測 取Wistar大鼠60只（雌雄各半），隨機(jī)分為6組，即正常對照組、模型組、正天丸治療組、九味頭痛片高、中、低劑量治療組，每組10只。正常對照組及模型組：5%羧甲基纖維素鈉溶液5mL／d灌胃，每日1次連續(xù)7d。正天丸治療組：灌服正天丸混懸液（1.5g／kg）；九味頭痛片高、中、低劑量組灌服浸膏（2.72、5.44、10.88g／kg），每日1次連續(xù)7d。

造模：于末次給藥后0.5h，除正常對照組外，每只大鼠按10mg／kg體重皮下注射硝酸甘油，復(fù)制偏頭痛動物模型。

血流量測試及相關(guān)指標(biāo)檢測：造摸2h后，全部大鼠用20%烏來糖麻醉，用手術(shù)剪剪開大鼠頭皮暴露軟腦膜組織，用“407”號多譜勒激光探頭測試大鼠頭部腦血流量。腹主動脈取血5mL 于肝素鈉抗凝試管內(nèi)，用N6c全自動血液流變儀測定全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)等各項血液流變學(xué)指標(biāo)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理方法

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠給藥后對醋酸致痛的鎮(zhèn)痛效果比較

表1顯示九味頭痛片能明顯減少小鼠因醋酸刺激所致的扭體次數(shù)，各劑量組與陰性對照組比較均具有統(tǒng)計學(xué)意義，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。

表1 各組鎮(zhèn)痛效果的比較（±s，n＝20）Table 1 Comparison of the analgesic effect in different groups（±s，n＝20）

表1 各組鎮(zhèn)痛效果的比較（±s，n＝20）Table 1 Comparison of the analgesic effect in different groups（±s，n＝20）

與陰性對照組比較，＊P＜0.05 ＊＊P＜0.01；與陽性對照組比較，＃＃P＜0.01

組別 扭體次數(shù)陰性對照組29.75±6.29＃＃陽性對照組2.85±2.64＊＊九味頭痛片 低劑量組20.50±6.89＊＃＃ 中劑量組11.40±7.22＊＊＃＃ 高劑量組8.45±6.64＊＊＃＃

2.2 各組小鼠給藥后痛閾值的比較

表2、3顯示九味頭痛片能顯著提高小鼠熱刺激所致疼痛的痛閾值，且作用持續(xù)時間較長（4h時作用最強(qiáng)）。由表2可見4h時，中、高劑量組效果優(yōu)于阿司匹林組（陽性對照組）。

表2 各組小鼠用藥后不同時間段熱痛閾值的比較（±s，n＝20）Table 2 Comparison of the thermal pain threshold value at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

表2 各組小鼠用藥后不同時間段熱痛閾值的比較（±s，n＝20）Table 2 Comparison of the thermal pain threshold value at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

與陰性對照組比較，＊P＜0.05＊＊P＜0.01；與陽性對照組比較，＃P＜0.05

組別 用藥前0.5h1h2h4h陰性對照組16.79±7.81 12.49±4.74 13.67±8.13 14.85±6.25 19.71±7.31陽性對照組15.44±5.89 11.62±3.48 25.27±5.33＊＊23.30±7.84＊＊24.20±13.89九味頭痛片 低劑量組12.78±5.70 14.63±6.85 19.11±4.66＊＊21.35±11.94＊20.91±8.72 中劑量組16.84±5.72 14.77±5.12 23.52±7.88＊＊24.42±6.95＊＊33.35±17.98＊＊＃ 高劑量組13.99±5.33 14.32±6.57 19.59±9.27＊＊26.40±14.20＊＊32.43±15.98＊＊＃

表3 各組小鼠用藥后不同時間段痛閾值提高百分率（±s，n＝20）Table 3 Comparison of the increased percentage of thermal pain threshold at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

表3 各組小鼠用藥后不同時間段痛閾值提高百分率（±s，n＝20）Table 3 Comparison of the increased percentage of thermal pain threshold at different time points after JWTTP treatment（±s，n＝20）

與陽性對照組比較，＃P＜0.05＃＃P＜0.01

組別 1h（%）2h（%）4h（%）陰性對照組－－－陽性對照組63.67±3.91 50.91±4.28 56.67±3.62九味頭痛片 低劑量組49.53±2.87＃67.06±7.31＃63.62±8.64 中劑量組39.67±6.43＃45.01±6.14 98.04±7.59＃＃ 高劑量組40.02±3.29＃88.71±5.55＃＃131.81±6.41＃＃

2.3 各組大鼠腦血流量、血液流變學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果

經(jīng)九味頭痛片治療后，大鼠血液粘度顯著性下降，全血低切、高切還原粘度明顯下降（P＜0.05）；大鼠腦血流量得到了明顯改善，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；且從結(jié)果可見九味頭痛片3個劑量組與正天丸組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表4、5。

表4 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的變化（±s，n＝10）Table 4 Comparison of hemodynamic indexes among groups（±s，n＝10）

表4 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的變化（±s，n＝10）Table 4 Comparison of hemodynamic indexes among groups（±s，n＝10）

與模型對照組比較，＊P＜0.05

全血粘度（mPa·s） 組別紅細(xì)胞變形指數(shù)正常對照組8.74±0.56 19.44±1.36＊高切低切血漿粘度（mPa·s）紅細(xì)胞聚集指數(shù)紅細(xì)胞剛性指數(shù)1.04±0.04 1.92±0.15 8.38±0.48 1.20±0.05模型對照組8.93±0.59 21.87±1.75 1.03±0.02 2.13±0.22 8.68±0.53 1.15±0.07正天丸組7.53±0.41＊18.73±1.99＊1.04±0.04 2.08±0.21 7.25±0.40 1.09±0.05九味頭痛片 低劑量組7.99±0.97＊20.37±3.51 0.99±0.10 2.17±0.34 8.17±1.59 1.09±0.08 中劑量組7.52±0.92＊19.01±4.13＊1.02±0.01 2.14±0.26 7.33±0.88 1.05±0.11 高劑量組7.98±0.89＊23.09±4.42 1.04±0.07 2.43±0.27 7.61±0.88 1.04±0.10

表5 各組大鼠腦血流量變化（±s，n＝10）Table 5 The variation of the cerebral blood flow in different groups（±s，n＝10）

表5 各組大鼠腦血流量變化（±s，n＝10）Table 5 The variation of the cerebral blood flow in different groups（±s，n＝10）

與模型組比較，＊＊P＜0.01

組別 腦血流量（PU 值）＊＊正常對照組520.78±70.26模型對照組229.11±82.20正天丸組392.00±113.65＊＊九味頭痛片 低劑量組340.22±107.15＊＊ 中劑量組364.89±43.07＊＊ 高劑量組426.44±72.58＊＊

3 討論

九味頭痛片是我院的院內(nèi)制劑，多年來用于臨床治療偏頭痛有確切療效。本實驗首先采用小鼠熱板法和扭體法兩種疼痛模型，觀察九味頭痛片的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果顯示，九味頭痛片能顯著提高小鼠熱刺激所致疼痛的痛閾值，且作用持續(xù)時間較長，4h時，中、高劑量組效果優(yōu)于阿司匹林組。有文獻(xiàn)報道［3］小鼠熱板法實驗在測定麻醉性鎮(zhèn)痛藥的藥效時較為適宜，舔足底動作不僅是脊髓反應(yīng)，而且可能和高級中樞有關(guān)。本實驗用熱板法觀察九味頭痛片的鎮(zhèn)痛作用結(jié)果表明，該藥對熱刺激疼痛的止痛較為敏感，提示其鎮(zhèn)痛作用可能與調(diào)節(jié)中樞有關(guān)。采用扭體法實驗觀察發(fā)現(xiàn)該藥能明顯減少小鼠因醋酸刺激所致扭體的次數(shù)，各劑量組對小鼠醋酸所致的疼痛有顯著緩解作用，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，提示該制劑對化學(xué)致痛也有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

硝酸甘油皮下注射致大鼠偏頭痛這一模型的主要依據(jù)是：頸動脈血管擴(kuò)張是偏頭痛的發(fā)病機(jī)制之一［4］。硝酸甘油在體內(nèi)生成一氧化氮（NO），NO 通過強(qiáng)烈的擴(kuò)張腦血管效應(yīng)和神經(jīng)毒性作用誘發(fā)實驗性偏頭痛，是廣泛應(yīng)用的頭痛藥物研究模型之一，具有很好的科學(xué)意義和應(yīng)用價值。

近年來有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)偏頭痛患者的全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞壓積、血小板聚集率等顯著增高［5］。其中，以全血粘度的增高為主。本研究中，經(jīng)九味頭痛片治療后，全血低切、高切還原粘度明顯降低，與模型組比較有顯著性差異，且經(jīng)該藥治療后，大鼠的腦血流量得到明顯的改善，與模型組比較PU 值明顯增高（P＜0.01）。

本處方由川芎、當(dāng)歸、丹參、延胡索等中藥組成，據(jù)文獻(xiàn)記載，川芎生物堿（CHX）能降低大鼠腦局灶性缺血再灌注組織中NO 的含量［6］；當(dāng)歸注射液對缺氧缺血性腦損傷幼年大鼠神經(jīng)元可能具有保護(hù)作用［7］；延胡索是公認(rèn)的止痛良藥，據(jù)現(xiàn)代藥理證實，延胡索內(nèi)含紫菀堿等物質(zhì)，具有止痛、鎮(zhèn)靜、催眠和安定的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，九味頭痛片能有效地改善硝酸甘油所致大鼠偏頭痛模型的血液流變學(xué)指標(biāo)，升高局部腦血流量，表明該藥可能通過以上機(jī)制發(fā)揮治療偏頭痛的療效。由本研究可見，在治療頭痛、偏頭痛的擬方過程中，依據(jù)古代中醫(yī)中藥理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)藥學(xué)研究，選擇能降低血液粘度、增加腦血流量等功能的中藥應(yīng)用于臨床的做法值得推廣。

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